柴郁汤对小鼠应激性胃溃疡的预防作用

刘红艳，张莉华，方步武，田在善

柴郁汤由郁金、柴胡两味中药组成，具疏肝活血、清心凉血、理气开郁作用，可视为金铃子散的变方，可单用或作为辅助药物用于急腹症和慢性腹部疾病。束缚-水浸法可引起应激性胃溃疡，但是否同时引起肝损伤未见报道[1]。本研究探讨引起胃溃疡的束缚-水浸法是否可致肝损伤，并观察柴郁汤对该应激性胃溃疡的预防作用，并从抗脂质过氧化损伤和保护肝功能等方面探讨其作用机理，为祖国医学“肝木乘脾土”、“肝脾同病”的理论提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 昆明种小鼠60只，SPF级，雌雄各半，体重(20±2)g，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供，合格证号:SCXK-(军)2002-001。

1.1.2 药品 柴郁汤由郁金和柴胡组成,二者比例为4∶1，水煎制而成，浓度为1 g/mL，由天津市南开医院药物研究室制备；Vit E软胶囊:天津中新药业集团有限公司第六中药厂，批号666001；雷尼替丁胶囊:天津太平洋制药有限公司，批号060702；大豆调和油:广州市粤皇食品科技有限公司，批号20061109。

1.1.3 试剂 丙二醛(MDA)检测试剂盒，批号20070113；丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测试剂盒，批号20061207；考马斯亮兰蛋白定量试剂盒，批号20070115，均为南京建成生物工程研究所产品。其余皆市售分析纯试剂。

1.1.4 主要仪器 722型可见光分光光度计:北京瑞科分析仪器公司；游标卡尺,放大镜；小鼠水浴固定器。

1.2 方法

1.2.1 药物配制 柴郁汤高、中、低剂量:柴郁汤用药量分别为19.50g/kg、6.50g/kg、2.17 g/kg，浓度分别为0.975 g/mL、0.325 g/mL、0.109 g/mL，用药体积均为20mL/kg。其中6.50g/kg为临床等效剂量。Vit E油剂:将Vit E胶囊(100mg/粒)壳剪开，以大豆调和油冲洗、溶解其内容物，振荡，配成3.9mg/mL的Vit E油剂。雷尼替丁混悬液:取雷尼替丁胶囊内容物，用蒸馏水溶解，配成3.9mg/mL的雷尼替丁混悬液。用时振荡摇匀。

1.2.2 分组与用药 小鼠60只，按体重随机区组法分为6组，每组10只:正常组，模型组，柴郁汤高、中、低剂量组，阳性药物组。实验周期为7 d。前5 d，各组分别灌胃各自的药物:正常组和模型组灌胃蒸馏水20mL/kg；柴郁汤高、中、低剂量组分别灌胃高、中、低剂量的柴郁汤，皆为20mL/kg；阳性药物组:同时灌胃VitE及雷尼替丁的混悬液各10mL/kg，均为每日1次。

1.2.3 束缚-水浸法应激性胃溃疡模型制备 末次给药后禁食24 h，不禁水。除外正常对照小鼠，将其余小鼠装入特制鼠笼，浸入(18±1)℃的水，水面平小鼠剑突处，水浸应激20 h后，取出吹干。摘眼球取血；颈椎脱臼处死小鼠，剖腹，留取肝脏；结扎幽门部，灌胃0.4%福尔马林溶液1mL，结扎贲门部，游离胃，固定30min后，沿胃大弯剪开，0.9%氯化钠溶液冲去胃内容物，展平。

1.2.4 指标观测 按Guth标准计算各组小鼠溃疡指数和抑制率[2],按溃疡或糜烂面积计分。点状出血:每3个点状溃疡(黏膜缺损小于1mm或出血性糜烂小点,称点状溃疡)计1分。条状出血:以游标卡尺测量溃疡面的最大长径和垂直于最大长径的最大宽径，二者的乘积即为溃疡指数。1mm宽者每毫米长为1分；2mm宽者每毫米长为2分；3mm宽者每毫米长为3分。溃疡抑制率(%)=(模型对照组平均溃疡指数－用药组平均溃疡指数)/模型对照组平均溃疡指数。这里，用药组平均溃疡指数改为用药组每只动物的溃疡指数，以便计算出用药组溃疡抑制率的平均数而进行统计分析。

肝组织MDA:用0.86%氯化钠(4℃预冷)将肝冲洗干净，以滤纸吸干水分，称重，液氮中冻存，以1∶9(W∶V)制备肝组织匀浆，离心取上清。对上清液中的蛋白定量并按试剂盒说明书测定MDA。血清ALT按试剂盒说明书测定。

2 结果

2.1 药物对小鼠应激性胃溃疡的影响 与正常组比较，模型组溃疡指数显著增高(P<0.01)；与模型组比较，柴郁汤高、中剂量组和阳性药物组溃疡指数明显降低(P<0.01)。柴郁汤高剂量组的溃疡指数和溃疡抑制率分别与阳性药物组比较差异无显著性意义，但柴郁汤中、低剂量组的作用弱于阳性药物对照组(P<0.01)。柴郁汤降低溃疡指数和提高溃疡抑制率的作用呈一定的量效关系（见表1）。

2.2 药物对应激性胃溃疡小鼠血中ALT的影响与正常组比较，模型组血中ALT显著增高(P<0.01)；与模型组比较，柴郁汤各剂量组和阳性药物对照组ALT明显降低(P<0.01)，且高剂量的柴郁汤的作用明显优于中、低剂量的柴郁汤(P<0.01)，柴郁汤降低ALT的作用呈一定的量效关系（见表2）。

2.3 药物对应激性胃溃疡小鼠肝组织MDA的影响与正常组比较，模型组肝组织MDA显著升高(P<0.01)；与模型组比较，柴郁汤高、中剂量组和阳性药物组MDA明显降低(P<0.01)，且高剂量的柴郁汤的作用明显优于中、低剂量的柴郁汤(P<0.01)，柴郁汤降低MDA的作用呈一定的量效关系（见表2）。

表1 柴郁汤对小鼠应激性胃溃疡的影响(）

表1 柴郁汤对小鼠应激性胃溃疡的影响(）

注:与正常组比较，**P<0.01；与模型组比较，##P<0.01；与柴郁汤高剂量组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与阳性药物组比较，$$P<0.01，ΔP=0.298

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表2 柴郁汤对应激性胃溃疡小鼠血中ALT和肝组织MDA的影响(）

表2 柴郁汤对应激性胃溃疡小鼠血中ALT和肝组织MDA的影响(）

注:与正常组比较，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01；与柴郁汤高剂量组比较，▲▲P<0.01；与阳性药物组比较，$$P<0.01

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3 讨论

本研究采用束缚-水浸法引起小鼠胃溃疡，溃疡指数和形态观察表明造模成功，并发现应激性胃溃疡小鼠同时存在肝损害，该小鼠血中ALT和肝脏MDA水平均显著升高。胃溃疡和肝损害皆为应激性损伤所致，至于肝损伤是否加重胃溃疡尚待明确。小鼠一次性拘束 l8 h即可明显损害肝功能(ALT升高4.5倍)，本研究束缚-水浸法亦明显损害肝功能(ALT升高1.4倍)，故水浸并未能加重肝损伤，而是束缚引起小鼠肝损伤。另有研究表明，相同水温下束缚-浸水应激和单纯浸水应激导致大鼠产生同等程度的胃溃疡，故“冷水刺激”在束缚-浸水应激导致的胃溃疡中起重要作用，而“束缚刺激”不起重要作用，冷水刺激引起体温降低是胃溃疡的诱发因素。可见，束缚-水浸法所致胃溃疡模型中，主要是浸入冷水引起了胃溃疡，而束缚则主要引起肝损伤，这两种应激刺激引起的损伤是有差别的，而脂质过氧化损伤为其共同的病理机制之一。

同名方柴郁汤(但组成与本研究的柴郁汤不同)对幽门结扎、消炎痛或利血平所致大鼠胃溃疡有抑制作用[3]，但其对应激性胃溃疡的影响未见报道。本研究以柴郁汤(19.50g/kg、6.50g/kg、2.17 g/kg)预防束缚-水浸应激法所致小鼠应激性胃溃疡，结果高、中、低剂量对溃疡的抑制率分别为53.97%、35.31%和20.55%，高、中剂量的柴郁汤能显著降低溃疡指数,作用存在量效关系，并且柴郁汤高剂量的作用与雷尼替丁并用Vit E相似（P>0.05），产生了明显的抗应激性胃溃疡的作用。

本研究发现，柴郁汤对束缚-水浸法所致应激性溃疡小鼠血中ALT和肝组织MDA均有显著的降低作用，并存在量效关系。19.50g/kg柴郁汤的作用与Vit E并用雷尼替丁的作用相似，表明柴郁汤具有确切的保肝作用，其作用机理之一仍是该方具有抗脂质过氧化损伤的作用。总之，抗脂质过氧化和保肝作用为柴郁汤抗应激性胃溃疡的部分作用机制。

[1]谢果，宝丽，何蓉蓉，等.榴莲壳醇提物对应激性肝损伤小鼠的保护作用[J].中药新药与临床药理，2008,19(1):22.

[2]张玉玉，祝文兴，孙一耕，等.大鼠束缚-浸水应激模型体温降低与应激性胃溃疡的关系[J].生物医学工程研究,2007,26(3):282.

[3]韩兆丰，陈兰羽，尤春来.柴郁汤抗实验性胃溃疡作用的实验研究[J].辽宁中医学院学报,2002,4(4):320.