固本健脑液改善小鼠学习记忆障碍的实验研究

袁 林,朱云峰,黄 琼,胡玉萍,袁德培

1.湖北中医药大学(湖北 武汉 430065)

本研究的课题组曾报道用固本健脑液对轻度认知障碍模型大鼠治疗给药,效果明显[1]，本实验通过固本健脑液预防给药，然后复制东莨菪碱所致记忆获得障碍、亚硝酸钠所致记忆巩固障碍及40%乙醇所致记忆再现障碍小鼠模型，观察固本健脑液对模型小鼠学习记忆的改善作用，进一步为其临床防治轻度认知障碍提供实验依据。

1 材料与方法

1.1固本健脑液由恩施板党、枸杞、茯苓、山楂、酸枣仁等组成。除板桥党参由恩施市峰岚板桥党参有限公司提供外，其余药材均购自湖北中医药大学专家门诊部中药房。按传统煎法，用5倍于药材的冷水浸泡药材20 min，用武火煎至水沸，改用文火煎煮40 min，滤过药液后加冷水适量，复煎至水沸，改用文火煎30 min，滤出药液，两煎合兑，浓缩为每毫升含1 g生药(即成人用药剂量60 kg体重的等效剂量)，4℃冰箱保存备用。

1.2动物选用清洁级昆明种小鼠90只，雄性，体重(20±2)g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。

1.3试剂东莨菪碱(上海禾丰制药有限公司生产，批号为20100110),乙醇(国产分析纯，批号为20090401),亚硝酸钠(国产分析纯，批号为20090306)。

1.4动物分组和给药小鼠随机分成3组，每组再分为3个亚组，即正常组(A组)30只，其中A1、A2、A3每组各10只；固本健脑液组(B组)30只，其中B1、B2、B3每组各10只；模型组(C组)30只，其中C1、C2、C3各10只。各组小鼠均每日1次按10 ml/(kg·d)的剂量灌胃，正常组和模型组小鼠灌服生理盐水，固本健脑液组灌服含生药1 g/ml的固本健脑液，共10 d。

1.5 复制动物模型

1.5.1 小鼠记忆获得障碍模型：取A1、B1、C1组于末次给药1 h后进行训练，训练前20 min，B1组和C1组分别腹腔注射东莨菪碱3 mg/kg，A1组腹腔注射等容量生理盐水。24 h后重新测试。

1.5.2 小鼠记忆巩固障碍模型：取A2、B2、C2组于末次给药1 h后进行训练，B2组和C2组训练结束后立即分别皮下注射亚硝酸钠120 mg/kg，A2组皮下注射等容量生理盐水。24 h后进行测试。

1.5.3 小鼠记忆再现障碍模型：取A3、B3、C3组于末次给药1 h后进行训练，24 h后重新测试。测试前20 min B3组和C3组分别以0.1 ml/10 g体重腹腔注射40%乙醇，A3组腹腔注射等容量生理盐水。

1.6 跳台法：训练时先将小鼠放入跳台仪的5个格子内适应1 min，然后通36 V的交流电，小鼠受电击后只有跳上跳台才能逃避电击，如跳下就会又受到电击，如此训练5 min，记录其跳下平台受到电击的次数作为错误次数；测试时先将小鼠放在跳台上，同时秒表计时，记录第一次跳下时间作为潜伏期；并记录5 min内跳下平台受到电击的错误次数。

2 结果

2.1固本健脑液对记忆获得障碍模型的影响由表1可见，在训练与测试过程中，C1组与A1组相比，错误次数增加而潜伏期缩短，两项均有显著差异 (P<0.01)；B1组与C1组相比，错误次数明显减少(P<0.05)，且潜伏期明显延长(P<0.05)。

2.2固本健脑液对记忆巩固障碍模型的影响由表2可见，在训练时，A1组和C1组两组训练成绩相比较无明显差异(P>0.05)；B1组训练成绩稍好于A1组，但无统计学意义(P>0.05)。在测试时，C1组与A1组的测试成绩相比，错误次数显著增多(P<0.01)、潜伏期明显缩短 (P<0.01)；B1组与C1组的测试成绩相比，错误次数明显减少(P<0.05)，潜伏期明显延长(P<0.05)。

表1 固本健脑液对记忆获得障碍小鼠模型的影响

表2 固本健脑液对记忆巩固障碍小鼠模型的影响

2.3固本健脑液对记忆再现障碍模型的影响由表3可以看出，在训练时，A1组和C1组两组训练成绩无明显差异(P>0.05)；B1组训练成绩比A1组稍优，但无统计学意义(P>0.05)。在测试时，C1组与A1组的测试成绩相比，错误次数显著增多(P<0.01)而潜伏期明显缩短 (P<0.01)；B1组的测试成绩明显好于C1组，表现在错误次数减少 (P<0.05)、潜伏期延长(P<0.05)。

表3 固本健脑液对记忆再现障碍小鼠模型的影响

3 讨论

学习和记忆分为三个阶段，即学习记忆的获得、记忆的巩固和记忆的再现[2]。文献记载东莨菪碱、亚硝酸钠、乙醇可分别对此三个阶段进行阻断，用这三种化学试剂造模，具有记忆损害确实、损害环节明确、造模方法简单等优点，故常用于制造学习记忆功能障碍的动物模型[3]。跳台法属于被动回避性反射法，可以考察药物对记忆全过程的影响，同时测定药物对逃避潜伏期和安全平台潜伏期的影响，可以排除药物非特异性作用的干扰[4]。因此本实验用跳台法观察固本健脑液对记忆获得、巩固和再现障碍动物模型的影响。

东莨菪碱为M—胆碱能受体阻滞剂，训练前20 min腹腔注射可抑制条件反射的形成，破坏动物记忆的获得[5]。实验结果显示训练和测试过程中，模型组与正常组均存在显著差异，提示学习记忆获得障碍模型复制成功。同时实验结果显示固本健脑液组的成绩明显优于模型组，表明固本健脑液预防给药可明显改善动物的记忆获得性障碍。

训练后腹腔注射亚硝酸钠能使血红蛋白变性，使脑组织缺血缺氧，损害学习和记忆过程，引起动物记忆巩固障碍[6]；乙醇为中枢性抑制剂，测试前20 min腹腔注射较低浓度乙醇即可明显破坏记忆过程，造成学习记忆再现障碍[7]；实验结果提示模型组与正常组未造模训练时无明显区别，造模后测试时均存在显著差异，说明学习记忆巩固、再现模型复制是成功的。同时实验结果显示造模前固本健脑液组的成绩稍好于正常组，表明固本健脑液有一定的益智作用；造模后固本健脑液组的成绩明显优于模型组，提示固本健脑液预防给药可以改善动物的记忆巩固、再现障碍。

记忆力障碍是中老年人轻度认知障碍和老年痴呆的临床典型特征[8]，中医认为“高年无记忆者，脑髓渐空”，说明脑髓是学习记忆的物质基础。本课题组认为脑髓是由肾中先天精气所化生，又有赖脾运化后天水谷以生精化气生血，上奉以滋养清窍。脾肾先后天功能健旺才能使脑髓充盈，认知、思维等脑的功能也就正常。人至老年，脏腑开始出现生理性的虚衰，脾肾功能逐渐减弱，化源不足，导致先后天精气逐渐虚少，使得脑髓化生不足，从而出现老年人认知功能减低，表现为老年人随增龄而出现与之相应的记忆、思维等功能降低。但如果老年人不注意养生，耗精过度或外邪侵袭，脾肾亏损，就会导致先后天精气过度减少，使得脑髓严重化生不足或枯竭，从而出现老年人认知功能更加减低或障碍，引起轻度认知障碍。脾肾亏衰日久，运化水液失常导致痰浊，气虚无力推动血行产生瘀血，痰浊随气升降，无处不到，蒙蔽清窍则加重健忘病情；血瘀痹阻脑络，脑府灵机运行不畅，加重认知功能障碍，严重者脾肾所化之精气难以上行充脑，从而会产生痴呆。

固本健脑液以党参、枸杞为君补先后天精气以充脑髓，佐以茯苓、山楂、酸枣仁健脾宁心以安神，全方共凑补脾益肾、固本健脑、宁心安神的功效。正常衰老的老年人预防服用固本健脑液，可使脾胃得养，气血调和，脑髓得充，认知障碍就可得以改善，从而能防治轻度认知障碍的发生，防止出现老年痴呆。

从上述中医理论和实验结果可以看出，固本健脑液预防给药对记忆障碍具有明显的影响，值得临床上推广使用，并应深入全面研究其作用机制。

[参考文献]

[1] 朱云峰，袁林，袁德培.固本健脑液对MCI大鼠学习记忆功能及海马Aβ表达的影响[J].湖北民族学院学报(医学版)，2010，27(3):5-7.

[2] 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学(第3版)[M].北京:人民卫生出版社,2002:829-830.

[3] 张磊，张均田.学习记忆的实验方法和记忆障碍模型[J].药学通报,1988,23(8):475.

[4] Kameyame T, Nabeshima T, Kozawa T.Step-down-type passive svidance and escape learning methods[J].Pharmacol Methods,1986(16):39.

[5] 马作峰，姜瑞雪.固本健脑方改善记忆障碍动物模型记忆功能的实验研究[J].江苏中医药,2005,26(2):47-50.

[6] 侯悦,吴春福,何祥,等.氟哌啶醇对小鼠在避暗实验中学习记忆获得、巩固和再现过程的影响[J].中国临床康复,2006,34(10):99-102.

[7] 张小超,何波,陈鹏,等.三七皂苷对学习记忆功能障碍的影响[J].中药药理与临床,2008,24(3):13-16.

[8] 黄德斌，董志.阿尔茨海默病病因及治疗药物研究进展[J].湖北民族学院学报(医学版),2007,24(2):63-66.