联合使用氨基葡聚糖和硫酸软骨素抗炎镇痛作用实验研究

杨春燕 韩刚 王锦程 原海忠 董月 翟冠钰 范颖康英

1唐山市第二医院（唐山 063000） 2华北煤炭医学院药学系 3唐山容大药业有限公司

氨基葡聚糖（glucosamine，GS）和硫酸软骨素（chondroitin sulfate，CS）属于天然氨基多糖类化合物［1］，两者易溶于水，易吸收，可以通过血液－滑膜屏障覆盖并分散至关节软骨内，能够被软骨细胞吸收［2］。氨基葡聚糖和硫酸软骨素在关节软骨中更易与水结合，保持关节腔润滑和缓冲压力，对受损的软骨细胞具有一定的保护作用。氨基葡聚糖和硫酸软骨素可控制和改善骨性关节炎（osteoarthritis，OA）症状，修复软骨组织［3］。多项临床随机双盲实验中，膝关节骨性关节炎的患者服用氨基葡聚糖，对照服用安慰剂治疗，结果患者的膝关节疼痛、肿胀、活动受限症状明显减轻［4］。近年来，有关氨基葡聚糖和硫酸软骨素单独与联合使用治疗骨性关节炎的报道较多［5,6］。对于联合使用氨基葡聚糖和硫酸软骨素抗炎和镇痛作用的实验研究报道较少。本实验以大鼠和小鼠为动物模型，研究联合使用氨基葡聚糖和硫酸软骨素抗炎和镇痛作用，为探讨联合使用氨基葡聚糖和硫酸软骨素改善OA症状作用机制提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SD大鼠，SPF级，雄性，体重150～180g；ICR小鼠SPF级，雄性，体重 18～22g，许可证编号：SCXK（京）20060330，动物饲养设施许可证编号：SYXK（冀）2005-0038。

1.2 药品

角叉菜胶胶（辽宁省药物研究所）；阿斯匹林（石家庄康利药业有限公司，批号：080724）；氨基葡聚糖和硫酸软骨素（唐山容大药业有限公司）。

1.3 实验方法

1.3.1 大鼠足肿胀试验［7］

SD大鼠100只随机分为10组，每组10只，分别为正常对照组（14天组、28天组）、阿斯匹林阳性药物组14天组、28天组）、联合使用GS和CS低剂量组（14天组、28天组）、中剂量组（14天组、28天组）、高剂量组（14天组、28天组）。

给药时，氨基葡聚糖和硫酸软骨素的质量比为5∶4［8］。经口灌胃给药，每天1次，连续给药14天和28天。正常对照组给予蒸馏水灌胃。

在给药第14天和第28天，各组大鼠均于左后足趾中部皮下注射1%角叉菜胶0.1ml。分别于致炎1、4和6h用千分卡尺测量足趾厚度（右后足作为对照），计算左右足趾厚度差（足趾肿胀度）。

1.3.2 炎症因子PGE2含量的测定

另取正常大鼠10只，与给药14天组同时同剂量注射角叉菜胶作为模型组，另取给药14天、致炎6h各组大鼠，测量足趾肿胀度后立即处死，取炎症足，剪开皮肤后浸入1.5ml生理盐水中，反复挤压洗出炎症渗出液，3000r/min离心，取上清液 140μl，加入 2ml 0.15mol/L氢氧化钾－甲醇溶液，混匀，50℃水浴20min，取出稍冷后加入5ml甲醇稀释，在278nm处测定吸光度值A。

1.3.3 大鼠肉芽肿实验［7］

雄性SD大鼠50只，大鼠乙醚吸入麻醉，在无菌条件下，将重量为20mg的灭菌棉球，植入大鼠两侧腹股沟皮下，缝合皮肤，大鼠饲养于室温20～24℃、湿度45%～65%的屏蔽环境。术后动物随机分为5组，每组10只，分别为正常对照组、阿斯匹林阳性药物组、同1.3.1项方法设低剂量组、中剂量组、高剂量组。大鼠灌胃给药，每天1次，连续给药30天。末次给药禁食不禁水10h后，麻醉处死动物，摘出棉球与肉芽组织，称湿重，于70℃干燥24h，称干重。干重减去棉球重量即为肉芽肿净重，肉芽肿增生系数为肉芽肿重量。

1.3.4 醋酸致小鼠扭体反应试验［7］

ICR小鼠60只，按预筛潜伏期随机分为5组，每组12只，分别为正常对照组、阿斯匹林阳性药物组、同1.3.1项方法设低剂量组、中剂量组、高剂量组。经口灌胃给药，每天1次，连续给药28天。在给药第28天，于给药后30min，各组动物均腹腔注射0.6%醋酸溶液（1.3ml/kg），记录15min内小鼠“扭体”次数。将小鼠给药后的扭体次数与正常对照组比较。

1.4 统计学分析

所有数据均用SPSS 12.0进行统计学分析，数值采用平均数±标准差（）表示，采用方差分析及两两比较的q检验进行统计学分析，P<0.05认为有显著差异。

2 结果

2.1 足趾肿胀度

表1显示，给药14天，注射角叉菜胶4h，阿司匹林组，联合使用GS和CS中、高剂量组足趾肿胀度明显小于正常对照组，具有统计学意义（P<0.05）；注射角叉菜胶6h，低、中、高剂量组足趾肿胀度明显小于正常对照组，具有显著性差异（P<0.05）。

给药28天，与正常对照组比，低、中、高剂量组足趾肿胀度明显下降（P<0.05）。与阿司匹林阳性药物组比，低、中、高剂量组大鼠足趾肿胀度无显著性差异（P>0.05）。

表1 给药14天和28天大鼠足趾肿胀度（mm）

2.2 PGE2含量

表2显示，与模型组比，阿司匹林阳性药物组，联合使用GS和CS低、中、高剂量组炎症渗出液中炎症因子PGE2水平显著降低（P<0.05）。

表2 给药14天大鼠炎症渗出液PGE2含量比较

2.3 大鼠肉芽肿净重

表3显示，阿司匹林阳性药物组，联合使用GS和CS低、中、高剂量组大鼠肉芽肿净重显著低于正常对照组（P<0.01），与阿司匹林阳性药物组比，联合使用GS和CS低、中、高剂量组无显著性差异（P>0.05）。

表3 给药30天各组大鼠肉芽肿净重比较

2.4 醋酸致小鼠扭体反应实验结果

表4显示，与正常对照组比，给药28天，阿司匹林阳性药物组，低、中、高剂量组醋酸致小鼠扭体反应次数均显著下降（P<0.05）。

表4 给药28天醋酸致小鼠扭体反应实验结果

3 讨论

大鼠足趾肿胀实验是经典的动物急性炎症模型，可用于抗急性炎症的评价。本实验中，给药28天，与正常对照组比较，联合使用GS和CS（低、中、高剂量）均能明显抑制角叉菜胶致大鼠急性炎症。棉球植入法致大鼠肉芽肿是经典的致慢性炎症模型，本实验结果表明，联合使用GS和CS可显著抑制大鼠肉芽肿的形成，对慢性炎症有抑制作用。联合使用GS和CS（低、中、高剂量）均能对醋酸致小鼠扭体反应产生明显的抑制作用，表明联合使用GS和CS有镇痛作用。与阿司匹林疗效比较，联合使用GS和CS（低、中、高剂量）无显著性差异。

有研究表明［9］，对于OA，联合使用GS和CS可通过抑制关节组织中多种炎症介质和氧自由基的产生，起到抗炎和镇痛作用。炎症介质是一种参与炎症反应具有生物活性的化学物质，在炎症发展过程中，PGE2是一种重要的炎症介质，可引起血管扩张，血管壁通透性升高，引起发热或致痛［10］。本实验中，与模型组比较，联合使用GS和CS时，能显著降低炎症组织PGE2含量，这说明联合使用GS和CS能抑制炎症组织PGE2的合成与释放，从而产生抗炎作用。

氨基葡聚糖和硫酸软骨素为天然高分子，无毒无副作用。联合使用氨基葡聚糖和硫酸软骨素可缓解骨性关节炎及关节炎引起的疼痛。本研究通过动物实验证实了联合使用氨基葡聚糖和硫酸软骨素具有抗急性炎症和慢性炎症及镇痛作用，也为氨基葡聚糖和硫酸软骨素复方制剂的开发提供了依据［11］。

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