柏硝祛毒洗剂急性毒性实验研究

王丽军 王会丽 张 茹 刘丽萍 河北省唐山市中医医院 (唐山 063000)

柏硝祛毒洗剂是由黄柏、芒硝、地榆、防风、甘草等组成的复方制剂。具有消肿止痛,凉血止血,清热利湿,临床用于伴有血便、疼痛、红肿、瘙痒等症状。本实验对柏硝祛毒洗剂的急性毒性安全性评价实验进行研究,现报道如下。

1 材 料 1.1 实验动物 洁净级 wister大鼠,雌雄各半(雌性性无孕),体重在 170～ 210g,3～ 4月龄。由河南省实验动物中心提供,合格证号:SCXK(豫)2005-0001。饲料为本院实验动物中心自制干糕。大鼠 5只 /笼,自由饮水和摄食。白色豚鼠,雌雄兼有,体重 250-290g,由河南省实验动物中心提供,合格证号:SCXK(豫)2005-0001。健康白色家兔,雌雄兼有,体重2.00± 0.2kg。

1.2 动物实验室 温度为 19± 3℃。湿度 60±5%,采光12h/d,排风扇通风,每天 4次 ,每次至少 30min,环境安静无噪音。

1.3 试 剂 硫化钠(天津市北方天医化学试剂厂,批号:200061138),2,4二硝基氯代苯 (上海试剂一厂提供,批号:99-07-01,用 70%乙醇将其配成 1%的致敏浓度和 0.1%激发浓度)。

2 方法与结果 2.1 急性毒性试验 2.1.1方法:选择健康 wister大鼠 64只,适应环境 5d后,于实验前 24h用 8%硫化钠脱掉大鼠背部脊柱两侧毛约 8cm×4cm,其中 32只大鼠保持皮肤完整不受损,随机分成 4组 ,每组 8只,即对照组(蒸馏水),柏硝祛毒洗剂高剂量组(将柏硝祛毒洗剂用原溶液,按40mL/kg均匀涂抹于脱毛处,每次 10mL/kg,每小时涂一次,共 4次给完)。柏硝祛毒洗剂中剂量组 (将柏硝祛毒洗剂用开水配制成 1∶3溶液,按 40mL/kg均匀涂抹于脱毛处,每次10mL/kg,每小时涂 1次,共 4次给完)。柏硝祛毒洗剂低剂量组 (将柏硝祛毒洗剂用开水配制成 1∶ 6溶液,按 40mL/kg均匀涂抹于脱毛处,每次 10mL/kg,每小时涂一次,共 4次给完)。另 32只大鼠实验时用 16号针头,在脱毛且消毒的皮肤上划“#”字,以皮肤渗血为度,其分组与给药剂量同完整皮肤急性毒性试验。涂抹药物后每日观察并记录大鼠的体重,精神状态,四肢活动,皮肤,毛发,眼睛,黏膜,呼吸的变化,有无发抖,震颤,流涎,腹泻,嗜睡,昏迷等全身中毒表现和死亡情况。

2.1.2 结果:涂抹柏硝祛毒洗剂后,大鼠未见异常反应,饮食,体重,大小便和活动均正常;完整皮肤急性毒性试验组大鼠皮肤无红斑,无水肿,无死亡;破损皮肤急性毒性试验组大鼠皮肤划痕处可见红肿,结痂,划痕周围皮肤无红肿,无死亡,与对照组比较无差别。

2.2 皮肤刺激性试验

2.2.1 方法:选择健康白色家兔 16只,雌雄兼有,体重 2.00±0.20kg,适应环境 5d,与给药前 24h在兔背部脊柱两侧用8%硫化钠脱毛 (两侧约 50cm2,无红斑、水肿及破损)。 16只家兔随机分成 4组,每组 4只 ,设单次涂抹完整皮肤组、单次涂抹破损皮肤组、多次涂抹完整皮肤组和多次涂抹破损皮肤组。均涂抹给药(破损皮肤组,每只家兔背部脊柱两侧去毛区在涂药前用针头在涂药部位皮肤划“#”字以渗血为度),左侧为受试区,右侧为对照区。分别于给药区涂抹柏硝祛毒洗剂溶液(原液)0.2mL/cm2;对照区涂以等量的蒸馏水 ,用一层玻璃纸覆盖保湿,再加纱布覆盖保护,再用胶布适当固定。单次涂抹组:涂抹后 24h,用温水洗去残留的受试药;多次涂抹组:2次 /d,连续7d,末次涂抹后 24h,用温水洗去残留的受试药。去除受试药后1h、24h、48h、72h观察涂抹部位有无红肿和水肿等情况,以及上述变化的恢复情况和时间。

2.2.2 结果判定及评价:每只动物皮肤刺激反应评分按下表进行刺激反应评分,计算出平均分值。皮肤刺激强度评价按无刺激性(＜0.5),轻度刺激性 (＜2.0),中度刺激性(＜6.0),强刺激性(＞6.0)进行刺激强度评价。

表1 皮肤刺激反应评分标准

表2 皮肤刺激强度评价标准

2.2.3 结果:一次给药或多次给药结束后,对照区与受试区比较观察,皮肤刺激反应强度均 ＜0.5分,多次给药期间也未观察到皮肤有红斑、水肿等刺激反应,涂药部位无色素沉着,无出血点,无皮肤粗糙及皮肤菲薄等现象。结果表明:柏硝祛毒洗剂一次给药或多次给药对兔完整皮肤和破损皮肤均无刺激性。

2.3 皮肤过敏试验 2.3.1方法:取健康白色豚鼠,与试验前 24h,采用 8%硫化钠脱毛剂,将全部受试豚鼠背部脊柱两侧去毛(每侧约 4cm×4 cm,无红斑、水肿及破损)。24只豚鼠按体重随机分成 3组 ,每组 8只,分别是受试药组(柏硝祛毒洗剂)、空白对照组(蒸馏水)、阳性对照组(2,4二硝基氯代苯)。将柏硝祛毒洗剂(原液)0.5mL涂在左侧脱毛区,6h后用温水擦去残留受试药,第 7d和 14d以同样方法重复。空白对照组涂蒸馏水 0.5mL,阳性对照组涂以 1%的 2,4二硝基氯代苯 0.5mL。于末次涂药 14d时在动物右侧脱毛区涂药 0.5mL,6h后去除受试物,立即观察,并于 24h,48h和 72h重复观察豚鼠脱毛区皮肤涂抹部位有无红斑和水肿等过敏反应情况。空白对照组与阳性对照组给药方法均同受试药物组。

2.3.2 结果判定及评价:实验结果按卫生部药政管理局发布的《中药新药研究指南》皮肤过敏反应程度的评分标准评分,并计算平均分值。每只动物皮肤过敏反应程度的评分标准:无红斑为 0分;勉强可见为 1分;中度红斑为 2分;严重红斑为 3分;紫红色红斑为 4分。无水肿为 0分;勉强可见为 1分;可见为 2分;皮肤隆起约 1mm,轮廓清楚为 3分;水肿隆起 1mm以上并范围扩大为 4分。进行过敏反应评分,计算出平均分值。致敏率分类按弱致敏性 (0～ 10%),轻度致敏性(20%～ 30%),中度致敏性(40%～60%),高度致敏性(70%～ 80%),极度致敏性(90%～100%)进行。根据致敏率类别进行评价。

2.3.3 结果:受试组和空白组各 8只豚鼠皮肤未出现红斑和水肿,均为 0分;阳性对照组 8只豚鼠中 3只出现重度红斑 3×3分,2只出现中度红斑 2×2分,1只可见轻度红斑为 1× 1分,2只豚鼠出现水肿并红斑为 4×2分,阳性药反应总积分 22分,平均为 2.75分。阳性致敏物 2,4二硝基氯代苯动物皮肤受试区自激发给药 1h后出现红斑,6h最明显,24h逐渐消退,72h后红斑仍可勉强看见,致敏达 100%。受试药物柏硝祛毒洗剂组豚鼠皮肤受试区自激发给药后 72h后未出现红斑及水肿形成,与空白对照组比较无差别。

3 结 论 试验结果表明:柏硝祛毒洗剂对大鼠完整、破损皮肤均无急性毒性反应。对白兔完整、破损皮肤无刺激性。对豚鼠皮肤不产生致敏反应,说明柏硝祛毒洗剂是安全的局部外用药。

[1] 中华人民共和国卫生部药政管理局.新药临床前研究指导原则汇编 [M].北京:人民卫生出版社,1994:204-208.

[2] 孙敬方.动物实验方法学 [M].北京:人民卫生出版社,2002,191:374-375.

[3] 王北婴,李仪奎.中药新药研制开发技术与方法[M].上海:上海科学技术出版社 ,2001:811-813.

[4] 徐淑云,卞如濂,陈修.药理实验方法学 [M].第二版.北京:人民卫生出版社,1991:207-209.