戊四氮致癫痫大鼠肝损伤的电镜观察

王芳芳,王淑秋,刘君星,刘 蕾,马小茹,梁衍峰

(佳木斯大学基础医学院,黑龙江 佳木斯 154007)

戊四氮慢性点燃模型适合于对癫痫病理、传播机制和癫痫灶形成机制以及筛选抗癫痫药物的研究,但是在致癫痫的过程中,是否对其它脏器有损害,人们对这点关注不多,有人在光镜下观察了戊四氮致痫后大鼠的肝肾损伤[1,2],本研究拟在电镜下观察戊四氮致痫后大鼠肝脏超微结构的变化。

1 材料与方法

1.1 材料

戊四氮(PTZ):美国 Sigma公司。大鼠:Wistar雄性健康大鼠 ,3～ 5月龄 ,体重 (200± 20)g,共 16只 ,分为癫痫模型组和正常对照组,每组8只。电镜:日本电子株式会社 JEM-1200EX。

1.2 方法

①PTZ点燃模型的制备:PTZ用前以生理盐水新鲜配制成溶液(10g/L)。癫痫模型组用 PTZ亚惊厥剂量(35mg/kg)腹腔注射,每日 1次,持续 28d;正常对照组以等容生理盐水代替 PTZ腹腔注射。大鼠癫痫发作评分标准[3]:0级,无行为上的发作反应;Ⅰ级,节律性点头或头面部抽动;Ⅱ级,阵挛性咀嚼或点头甩尾;Ⅲ级,头部颤搐加前肢阵挛性抽搐;Ⅳ级:袋鼠姿势或多肢抽动;Ⅴ级,全面性持续强直-阵挛发作。每天对每只大鼠在 PTZ注射后观察30～ 60min,并记录癫痫发作的级别、发作潜伏期(s)(即注入 PTZ到首次痫性发作之间经历的时间)及发作持续时间(s),凡出现连续 5dⅡ级以上痫性发作的大鼠为达到点燃标准。②电镜观察:实验动物麻醉后断头处死,在低温条件下迅速取肝脏,用于电镜检测。

图2 癫痫肝脏a

图1 正常肝脏

2 结果

2.1 行为学观察结果

癫痫组实验动物在实验过程中均有显示连续多次Ⅱ～Ⅴ级惊厥发作,全部达到点燃标准。癫痫组实验动物在注射戊四氮后2～ 6min内即开始发作,首先出现睑肌阵挛、点头运动、尾巴翘起,严重者继之双前肢抬起阵挛,随后出现四肢抽搐,部分动物出现翻滚,每次发作持续 1～ 30min,常反复发作。

2.2 电镜观察结果

正常对照组肝脏结构正常(图1),癫痫组肝脏发生明显改变,细胞核染色质边集(图2),线粒体变圆(图3)。

图3 癫痫肝脏 b

3 讨论

用于癫痫研究的动物模型种类繁多,曾用于癫痫研究的动物模型约有100余种。依据制备方法不同可分为化学药物模型、电刺激模型等;依据发作情况可分为痫性发作模型 (急性 )和癫痫模型(慢性);按发作表现可分为急性单纯部分发作模型、慢性单纯部分发作模型、复杂部分发作模型、癫痫持续状态模型、全身强直阵挛发作模型、失神发作模型、难治性癫痫模型;按主要致病机制可分为免疫性癫痫模型、遗传性癫痫模型等。其中慢性点燃模型和急性癫痫持续状态(Status Epilepticus,SE)模型都属于 M EL模型 ,在癫痫研究种广泛应用。有关资料显示雄性成年 Wistar大鼠具有对癫痫点燃的先天易感性,是制作点燃癫痫模型的常选动物[4]。化学点燃,是重复给予动物某种化学致痫剂(阈下剂量),戊四氮是最常用的化学点燃药物,可使动物出现癫痫敏感性增高并持续存在[5],最后形成癫痫通常用于制备大鼠慢性点燃模型。慢性点燃模型适合于对癫痫病理、传播机制和癫痫灶形成机制以及筛选抗癫痫药物的研究。但人们只关注戊四氮致痫引起海马神经元的损伤,在探讨其致痫机制和药物治疗机制的研究中忽略了戊四氮引起其它脏器损伤的作用。我们的研究结果证实,戊四氮致大鼠癫痫的同时伴有肝脏的损伤。但戊四氮导致的肝损伤作用,是否对其致痫作用有关系尚待进一步研究。

[1]杨艳华.丙戊酸钠-苯妥英钠-拉莫三嗪对戊四氮点燃大鼠肝肾细胞影响的研究.河北医科大学,硕士论文,2008

[2]李国丽.丙戊酸钠-卡马西平和托吡酯对戊四氮点燃大鼠模型肝脏和肾脏影响的研究.河北医科大学,硕士论文,2008

[3]Erdtmann-Vourliotis M,Riechert U,Mayer P,et al.Pentyenetetrazole(PT Z)-induced c-fos ex pression in the hippocampus of kindled rats in suppressed by concomitant treatment with naloxone[J].Brain Res,1998,792(2):299-308

[4]Eskazan E,Onat FY,Alter R,et,al.Resistance to propagafion of amygdaloid kindling seizures in rats with genetic absence epilepsy。[J].Epilepsia,2002,43(10):1115-1119

[5]Urca G,Frenk H.Intracerebral opiates block the epileptic effect of intracerebroventricular(ICV)leucine-enkephalin[J].Brain Res,1983,259(1):103-110