中远红外线对荷瘤鼠免疫功能的影响

李电刚,王淑湘,马小茹,韩玉泽,陶佳南,佟春玲,王 杰,侯丽然,冷莉莉

(佳木斯大学基础医学院病理生理学教研室,黑龙江 佳木斯 154007)

近年来,各国医学家们在实验和临床研究做的大量工作证明,中远红外线可治愈或延长癌症病人的生命[1,2]。本实验通过中远红外线对荷瘤(S— 180和 H— 22肝癌)小鼠的照射,测定小鼠的非特异性与特异性免疫的功能状态,探讨中远红外线具有提高机体免疫功能作用的程度。

1 材料与方法

1.1 材料

实验动物:昆明种小白鼠 ,体重 (20± 2)g,雌雄不拘 ,由中科院上海药研所、哈市实验动物研究所、哈医大和佳木斯大学医学院动物室提供。

1.2 方法

1.2.1 实验分组

Ⅰ组为阴性对照组;Ⅱ组为阳性对照组;Ⅲ组为 S-180和 H-22荷瘤鼠治疗观察组。

1.2.2 小鼠耳肿试验

在用中远红外线波长7～ 10μm;照射距离:20cm;照射时间:每日两次,每次30min,14d为一个疗程。用二甲苯0.01mL涂小鼠右耳内侧 ,致炎 30min后,脱颈处死,剪下双耳,用9mm直径的打孔器,打取双耳对称部位的耳片,用1/万感量的电子天平秤重量,计算双耳对称耳片的重量差值,即为耳肿胀率。

1.2.3 小鼠足垫肿胀试验

经改良,即在中远红外线照射的第9天,每鼠右足垫皮下注射108/mL ISRBC0.5mL。免疫4d后再同量 SRBC进行左足垫皮下注射。在免疫注射的前与后24h,用游标卡尺分别测定右左足垫的厚度,两足垫厚度的差值,即为足垫肿胀率。

1.2.4 小鼠血清 LZM含量的测定

采用平板法。取小鼠眼球血液分离血清,用生理盐水稀释成10、20、50及100μ g/mL浓度的标准 LZM,加到 1%琼脂(含微球菌)平板相应孔内 ,中心孔加生理盐水。平板置37℃温箱内温育18～ 24h。用卡尺测量 LZM的溶菌环直径 (以 cm表示),参照各孔对应 LZM的浓度,在对数坐标纸上以纵坐标为 LZM浓度;横坐标代表溶菌环直径(cm),绘制成 LZM标准曲线。以待检血清代替标准 LZM加入上述琼脂平板孔内,经温育后,测定溶菌环直径,在标准曲线查出其相应LZM的含量。

1.2.5 胸腺、脾脏的重量及其指数的测定

先称重小鼠体重,然后测定胸腺、脾脏的重量,求出胸腺 /体重、脾脏 /体重的比值,在计算出胸腺指数与脾指数。

1.2.6 小鼠外周血的 ANAE阳性细胞百分率的测定

取小鼠眼球血制成推片血膜,自然干燥后,按原法略加改良进行染色,即将复染色液改为2%孔雀绿色液。染色后在光学显微镜下,计算 LC内呈现红色颗粒的 AN AE阳性细胞的百分率。

1.2.7 小鼠血清溶血素(HA)的测定

在连续照射的第 9天,取4%SRBC0.2mL给实验鼠进行腹腔内注射。免疫后第5天,无菌操作取小鼠眼血并分离血清。取 1:800血清 1mL、5%SRBC0.5mL与 1:10豚鼠血清 (补体 )1mL,在试管内混匀,经37℃ 水浴 30min,冰浴停止反应。1500转 /分 ,离心 10min。取上清 1mL加都氏试剂3mL,混匀后10min用 721型分光光度计,于波长540mm读取 OD值,计算半数 SRBC溶血值(CH50);另设不加血清的空白对照管,作为比色时调零的基准;半数溶血管取5%SRBC0.25mL加入都氏试剂3.75mL,其余同上。

1.2.8 小鼠脾脏溶血空斑形成细胞(PEC)的测定

按史美浩方法进行取小鼠脾细胞悬液。0.2%SRBC与补体各 1mL,在试管内混均后,置 37℃水浴箱内温育 1h,3000转 /分 ,离心 5min,取上清液 ,用 721型分光光度计 ,波长413mm测光度读数(OD值)。

1.2.9 小鼠外周血 TLC亚群的测定

取小鼠眼球血,肝素抗凝。去抗凝血 100 μL,加入 FITCCD3(CD4、CD8)McAb100μL,混匀 ,置 4℃冰箱作用 30min;加入溶血剂2mL,混匀 ,室温放置 10min。1200转 /分 ,离心 5min,弃去上清。沉淀物中加入 PBS2mL,混匀、同上离心后弃上清;加入固定液0.6mL,混匀 ,4℃放置 30min后上机计数。

2 结果

2.1 中远红外线的抗炎作用

见表 1。

表1 中远红外线对小鼠急性与慢性炎症反应的影响 (±s,n=6)

表1 中远红外线对小鼠急性与慢性炎症反应的影响 (±s,n=6)

注:1、与Ⅰ组比较*P ＜ 0.05,△P＞ 0.05;2、与Ⅱ 组比较*P ＜0.01,5P＞ 0.05。

组别(n=6) 耳肿胀率(mg) 足垫肿胀率(mm)Ⅰ .阴性对照组 2.8± 0.12 0.32± 0.14Ⅱ .阳性对照组 2.5± 0.10△ 0.46± 0.05*Ⅲ .治疗观察组 2.6± 0.0015 0.22± 0.05*

2.2 中远红外线对小鼠非特异性免疫功能的影响

见表 2。

表2 中远红外线对小鼠非特异性免疫功能的作用 (±s,n=6)

表2 中远红外线对小鼠非特异性免疫功能的作用 (±s,n=6)

注:①与Ⅰ组比较*P＜0.01,P＞ 0.05;②与Ⅱ 组比较*P＜0.01。

组别 血清 LZM(mg/mL) 胸腺指数 脾指数 外周血 AN AE±C(%)Ⅰ71.0±3.57Ⅱ29.30± 0.84* 0.72 0.98 65.3± 3.01*49.21±0.79Ⅲ48.51± 1.14△* 0.60 0.90 70.3± 2.94△*

2.3中远红外线对小鼠特异性体液免疫功能的影响

见表3。

表3 中远红外线对小鼠 HA与 PEC的作用 (±s,n=6)

表3 中远红外线对小鼠 HA与 PEC的作用 (±s,n=6)

注:与Ⅰ组比较*P＜0.05,P＞ 0.05;与Ⅱ组比较△ P＜0.05。

组别 HA(CH50) PFC(OD)Ⅰ87.73± 9.7 0.538± 0.03Ⅱ86.40± 10.15* 0.537± 0.02*Ⅲ88.40± 6.9△* 0.533± 0.02△*

3 讨论

急性与慢性炎症反应是许多疾病的重要病理表现。因此,防止炎症反应是控制许多疾病发生与发展的重要措施[3,4]。本实验揭示中远红外线照射对荷瘤鼠的急性炎症反应无影响,而对慢性炎症侧有较强的抑制作用,这可能是中远红外线对机体慢性炎症疾病有较好疗效之所在。机体非特异性与特异性体液与细胞免疫功能对机体的抗感染、抗肿瘤,同种反应性与迟发超敏反应的发生、发展与结局具有重要作用[1,5]。本实验证实中远红外线能增强小鼠血清 LZM含量,说明该仪对 M合成与分泌 LZM有促进作用,连同中远红外线增加外周血 ANAE阳性细胞与 TLC亚群中 CD3、CD4、减少 CD8TLC等作用 ,表明中远红外线对小鼠的细胞免疫具有增强作用,推测中远红外线在抗胞内寄生物的感染、抗肿瘤、移植排斥反应与迟发型超敏反应的发生、发展与结局等具有临床实际应用价值。

[1]徐景智,卢爱荣,杨景发,等.红外辐射对机体免疫功能的影响[J].红外技术,2000,22(3):58-62

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[4]杨景发,刘玉颖,李同锴.中红外与短波红光综合治疗仪的临床应用与实验研究 [J].红外技术,2002,24(3):56-58

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