抗宫炎软胶囊水苏碱供试液提取纯化的方法

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(1.佳木斯大学继续教育学院，黑龙江 佳木斯 154007；2.黑龙江中医药大学佳木斯学院，黑龙江 佳木斯 154007)

抗宫炎软胶囊中共有紫珠、益母草等3味药组成,选择君药紫珠中的黄酮类控制本品质量，专属性差。选择臣药益母草中含量较高的盐酸水苏碱，作为控制质量的指标性成分，具有可控性和专属性。

1 仪器与试药

1.1 药品 益母草药材,购自安徽亳州乐尔康药业有限公司，经佳木斯药检所检测(《中国药典》2005年版一部附录Ⅵ D方法)[1]确定为质量合格药材。盐酸水苏碱对照品(批号110712-200508)；由中国药品生物制品检定所提供。其他试剂均为分析纯。

1.2 仪器 岛津LC-10AT vp高效液相色谱仪，岛津SPD-10A vp紫外检测器，浙江大学N2000色谱工作站；岛津AX200电子分析天平。

2 测定方法

2.1 方法 按高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录ⅥD)[1]测定。

2.1.1 色谱条件 以氨基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙睛-水(82∶18)为流动相;检测波长为192 nm；柱温：22℃。理论塔板数按盐酸水苏碱峰计算应不低于5 000。

2.1.2 溶液的制备 (1)对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的盐酸水苏碱对照品适量，加流动相制成每1 mL含盐酸水苏碱40 μg的溶液，摇匀，滤过，取续滤液，即得对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：①供试品提取液的制备:取装量差异项下的内容物，混匀，取1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，超声提取1 h，放冷,用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，得滤液；②供试品提取液的纯化：精密量取上述滤液25 mL至中性氧化铝柱上(4 g，100～200目，柱内径1.5 cm，湿法装柱，甲醇预洗),用100 mL甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干,残渣用流动相分次溶解并转移至25 mL量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，即得。

2.1.3 测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL,注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量，即得。

2.2 结果 见表1。

表1 抗宫炎软胶囊10批样品含量测定结果

本品每粒含益母草以盐酸水苏碱(C7H13NO2·HCL)计，不得少于0.80 mg[2-3]。

3 讨论与结论

3.1 讨论

3.1.1 提取方法的考察 方法1:取装量差异项下的内容物，混匀，取1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇50 mL，称定重量，超声处理1 h，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，滤过，得滤液，照测定方法项下的纯化方法处理，测定含量。方法2:取本品内容物1 g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醇50 mL,回流提取颜色至无色(约6 h)，滤过，得滤液，照测定方法项下的纯化方法处理，测定含量。结论：两种提取方法的结果相近，由于连续回流提取法时间长，超声提取法省时省力，因此选用精密加入乙醇50 mL,称定重量，超声处理1 h，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，滤过，得滤液的提取方法。

3.1.2 提取时间的考察 分别精密称取本品内容物1 g，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称量，分别超声30，40，50，60，70 min。放冷后，用甲醇补足减失的重量，照含量测定项下供试品制备方法和色谱条件，制备样品并测定。结果超声处理60，70 min，含量无明显变化，故确定提取时间为60 min。

3.1.3 提取溶剂用量的考察 分别精密称取本品内容物1 g,分别加入30，40，50，60 mL甲醇，超声60 min，照供试品配制方法配制，同上法测定。

3.1.4 提取液纯化方法的考察 方法1：精密量取提取液25 mL置蒸发皿中，加活性炭0.5 g，置水浴中加热约30 s，搅拌，滤过，乙醇多次洗涤蒸发皿,合并滤液置水浴上蒸干，残渣用流动相分次溶解并转移至25 mL量瓶中,流动相定容至刻度，摇匀，取续滤液，即得。方法2:将提取液浓缩至约5 mL，转移至活性炭-中性氧化铝层析柱(中性氧化铝4 g，湿法装柱，上覆层析用活性炭0.4 g，95%乙醇预洗)上，用100 mL乙醇洗脱(约需时12～14 h)，收集洗脱液，蒸干，残渣用流动相溶解，置25 mL量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。方法3：将提取液浓缩并至约25 mL量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。方法4:精密量取提取液25 mL至中性氧化铝柱上(4 g，100～200目，柱内径1.5 cm，湿法装柱，甲醇预洗)，用100 mL甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用流动相分次溶解并转移至25 mL量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，即得。结果：方法1和方法4含量结果较方法2和方法3高；方法1、方法3简单易行、杂质较多、对含量测定有干扰；方法2重现性较差、含量变化较大、加样回收率较低、时间长；方法4杂质较少，含量较高。因此，采用方法4纯化提取液。

3.2 结论 采用取装量差异项下的内容物，混匀，取1 g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，超声提取1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，得滤液，精密量取上述滤液25 mL至中性氧化铝柱上(4 g,100～200目，柱内径1.5 cm，湿法装柱，甲醇预洗)，用100 mL甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用流动相分次溶解并转移至25 mL量瓶中，用流动相定容至刻度,摇匀的方法制备供试品溶液[4-5]。

[1]中华人民共和国卫生部.中国药典[M].北京:人民卫生出版社,2005:附录Ⅵ D.

[2]王胜伟,朱利敏.HPLC法测定鲜益母草中盐酸水苏碱的含量[J].西北药学杂志,2006,23(1):15.

[3]严优芍,李卫民,高英,等.HPLC法测定益母草不同制剂中水苏碱[J].中草药,2006,37(1):70.

[4]姜舜尧.益母草药材中水苏碱的高效液相色谱分析法分析[J].药物分析杂志,2001(4):50.

[5]任江剑.HPLC法测定鲜益母草中盐酸水苏碱含量[J].中药新药与临床药理,2006,17(3):98.