降乳散对雌激素诱发大鼠催乳素瘤防治作用

王 晖，徐 春

长时间给予雌激素可以导致大鼠垂体PRL细胞增生，PRL分泌增加，最后形成PRL瘤。E诱发大鼠垂体PRL瘤模型对研究PRL瘤形成机理和寻求有效的治疗措施具有重要意义。笔者秉用17-β雌二醇皮下植入，同时用中药降乳散灌胃，研究降乳散对雌激素诱发大鼠PRL瘤的防治作用。

1 材料和方法

1.1 材料 动物：雌性Wistar大鼠由解放军总医院实验动物中心提供。在控光鼠房中分笼饲养，温度18～20℃，湿度43%，食用标准饲料，饮瓶装自来水。降乳散组成：柴胡15 g，郁金5 g，白芍 15 g，夏枯草15 g，生麦芽30 g，川牛滕15 g，香附30 g，当归15 g，仙灵脾10 g，巴戟10 g，元胡10 g，浙贝10 g。 大鼠PRL抗原、标准品和一抗，由美国NIDDK的Dr.Parlow惠赠。

1.2 方法

1.2.1 大鼠PRL瘤模型的制备 24只成年雌性Wistar大鼠，体重120～150 g，腹腔内注射10%水合氯醛50～80 mg/kg麻醉，常规消毒，于背部腰椎两侧做长约2～3 cm的纵形切口，暴露腹腔，结扎子宫，切除卵巢，并逐层缝合。于其背部中线尾骨上约3 cm偏左处做一约1 cm长纵形切口，游离皮下组织，将一含有17β-雌二醇10 mg的硅胶管 （长20 mm，内径1.5 mm，外径2.41 mm)或空白硅胶管植入皮下。全部动物随机分3组，每组8只。①对照组（C组），皮下植入空白硅胶管；②雌激素组（E组）：皮下植入含有雌激素的硅胶管；③降乳散组（J组），皮下植入雌激素硅胶管的同时，用降乳散汤剂灌胃（15 mg/kg·d）。用药第8周处死动物。乙醚麻醉大鼠后，于心脏穿刺取血，分离血清于-70℃保存，打开颅骨，翻开脑组织，摘下垂体，称重后将1/2冻于液氮中，1/2放于4%多聚甲醛中固定。

1.2.2 血清PRL水平的放免测定 灵敏度：0.312 ng/ml，批内CV 4.5%，批间CV 10.5%。

1.2.3 组织学及免疫组织化学观察 垂体组织在4%多聚甲醛中固定，石腊包埋、切片后行HE染色.部分切片采用免疫组化方法显示垂体组织PRL蛋白的表达和分布。

1.2.4 统计学处理 实验结果求出均数±标准差，组间比较采用t检验。

2 结 果

2.1 各组大鼠垂体重量 E组垂体重量为 （78.6±8.4）mg，明显高于C组的（13.4±0.9）mg（P<0.01），J组的（20.2±2.4）mg（P<0.01）。J组与C组亦存在显著性差异（P<0.01）。

2.2 各组大鼠血清PRL水平 E组大鼠血清PRL为（4226.3±446.9）ng/ml，明显高于 C组的（16.2±5.6）mg（P<0.01）；J组大鼠血清 PRL的水平为（526.7±43.6）ng/ml，显著低于E组（P<0.01），但明显高于C组（P<0.01）。

2.3 各组大鼠垂体组织学的改变 在HE染色下，C组垂体细胞呈圆形，胞浆少，胞核大小一致，血窦形态规则，分布均匀。E组细胞数目明显增加，细胞呈圆形或多角形，胞体增大，胞浆带增宽，细胞分化差，核大小不一致，可见大核细胞，有核异型性，血窦数目减少，分布不均，形态不规则，均被增生的细胞挤压变形。J组出现细胞异常增生，部分区域可见形态分布正常的血窦。

2.4 各组大鼠垂体PRL免疫组织化学的改变 每200倍视野随机数5个小格的阳性细胞 （压上线和左线的细胞计数，压下线和右线的细胞不计数），每组数5个切片，取其平均值。C组PRL阳性细胞散在分布，平均为（1.4±1.1）个/格，E组的阳性细胞广泛存在并且分布密集，平均（20.6±2.4）个/格，明显高于C组（P<0.01）；J组的阳性细胞数为（16.0±1.6）个/格明显低于E组（P<0.05）而高于C组（P<0.01）。

3 讨 论

在雌激素作用下，大鼠出现高PRL血症和PRL细胞增生，作用8周后，E组垂体平均重量为（78.6±8.4）mg，根据Welsch等判断垂体PRL瘤的标准50 mg[1]，此组已成功的诱发出PRL瘤。E诱发大鼠PRL模型的诸多研究，尽管在动物型别和用药方法方面各有不同，但均得出同样的结论[1-3]，说明雌激素具有刺激PRL基因表达和PRL细胞增生的作用。一例长期服用E的换性者（男性→女性）发生垂体PRL瘤，瘤组织表达丰富的雌激素受体ER和较低的多巴胺受体[4]，此例PRL瘤的发生是偶然，还是由于E直接作用或通过介导其它机制如生长因子、癌基因的激活、抑制癌基因的抑制或其它异常基因的作用，尚不清楚，但是，此病例提示E刺激在内分泌肿瘤的发生中起一定的作用。

中医理论认为高PRL血症属肝淤肾虚，根据辨证调理原则解放军总医院中医科杨明会主任医师配制成的降乳散，由柴胡、白芍、当归、仙灵脾、穿山甲、郁金、夏枯草等15味中药组成，临床用于治疗高PRL血症有效。笔者将此中药用于雌激素诱发的大鼠PRL瘤，发现其具有降低血清PRL和垂体重量的作用。中药降乳散的治疗法则为舒肝解淤，补肾健脾。至于其降低PRL的机制还有待进一步研究。

本文结果显示，J组的垂体重量、血清PRL水平和PRL阳性细胞计数均明显高于C组，提示降乳散对雌激素刺激的PRL过渡分泌仅能起部分抑制作用。光镜下J组出现明显的细胞增生，胞浆增宽，血窦挤压变形及核异型性等改变，这些均说明降乳散不能完全阻止E诱导的大鼠PRL瘤的形成和发展。中药的剂量不足可能是原因之一，本组用药剂量根据人的治疗剂量换算成的大鼠用量，设计方案中没有关于降乳散剂量逐渐增加的观察。

总之，在皮下植入雌激素诱发PRL瘤的同时，用中药降乳散给大鼠灌胃，能够明显降低大鼠血清PRL的水平及垂体的重量，提示其对雌激素诱发的PRL瘤具有一定的防治作用。

[1]Welsch CW，Jenklins T，Amenomori Y，et al.Tumorous development of in situ and grafted anterior pituitary in female rats treated with diethylstilbestrol.Experimentia，1979，27:1350-1352.

[2]许荣琨，郭传海，黄曼影，等.17β-雌二醇诱发大鼠垂体PRL瘤的形成和原癌基因c-myc的表达.基础医学与临床，1993，13:29-32.

[3]薛毅龙，段国升，张灿远.雌酮诱发大鼠垂体腺瘤动物模型.中华实验外科杂志，1992，9:136.

[4]Kovacs K，Stefaneanu L，Ezzat S，et al.Prolactin-producing pituitary adenoma in a male-to-female transsexual patient with protracted estrogen administration.A morphologic study.Arch Pathol Lab Med，1994，118(5):562.