70例严重少精症和无精症患者 Y染色体微缺失检测

王喜良,郝冬梅,侯开波,张宁,闫素文

(中国人民解放军第 202医院全军计划生育优生优育技术研究所,辽宁 沈阳 110003)

严重少精症和无精症是男性不育的主要原因之一[1]。导致严重少精症和无精症的因素有很多,包括染色体数目和结构异常,微生物感染、药物影响等。近年发现 Y染色体长臂存在微缺失现象,本文采用多重 PCR技术检测染色体正常的严重少精症和无精症患者的 Y染色体微缺失,探讨严重少精症和无精症与 Y染色体微缺失之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 70例严重少精症和无精症患者均来自本院 2009年1月至 12月不育门诊就诊患者。年龄 22～39岁,平均 30岁。按 WHO精液常规分析标准确定为严重少精症或无精症,其中严重少精症 39例,无精症 31例。对照组 20例为在本院就诊,并经至少 1次精液常规分析满足 WHO(精子密度正常)标准者。

1.2 方法 用血液 DNA提取试剂盒提取 DNA,运用多重 PCR技术检测 Y染色体 AZF基因家族AZFa、AZFb、AZFc三个区域中的 6个序列标签位点微缺失。每个样品做 A组和 B组两个多重 PCR反应,A组包括 sY 254、sY127、sY86三个位点,B组包括 sY134、sY84、sY255三个位点。每组设置一对扩增 SRY基因 (位于 Y染色体短臂上的性别决定基因)的引物,作为内对照。Y染色体微缺失试剂盒来自于透景生命科技有限公司。按照试剂盒操作说明扩增 DNA,扩增条件为:95℃ 3 min;95℃ 30 s,59℃ 30 s,72℃ 30 s,35个循环,最后 72℃延伸 10m in。产物经琼脂糖凝胶电泳后,用凝胶成像系统观察分析条带。

2 结果

39例严重少精症患者中发现 5例存在 Y染色体微缺失,均为 AZFc缺失,缺失率为 12.82%。31例无精症患者中发现 6例存在Y染色体微缺失,其中 AZFb+AZFc缺失 2例,AZFb缺失 3例,AZFc缺失 1例,缺失率为 19.35%。70例严重少精症和无精症患者共检出 11例 Y染色体微缺失,总缺失率为 15.71%。20例精液正常患者 Y染色体均未发现微缺失。

3 讨论

1976年,Tiepolo和 Zuifaidi首先提出 Y染色体上有多个基因参与生精过程[2],30多年来的研究发现男性特有的 Y染色体上面存在一个关键的与生育相关的因子的区域,称为 AZF区。目前认为在 AZF区上存在三个精子发生亚区 (AZFa、AZFb、AZFc),各亚区包含的位点在男性生殖细胞发育的不同时期起着不同的作用,位点的缺失可致患者表现为少、弱精症或无精症从而引发不育。一般认为,Y染色体的近端缺失 (涉及 AZFa和 AZFb),表现以唯支持细胞综合症为主的严重生精障碍,Y染色体的远端缺失 (涉及 AZFb远段和 AZFc),可残留岛状的生精正常区域[3]。

无精症和少精症 AZF总的缺失率不同实验室报道差别很大 1%～55%[4],可能是选择的对象不同导致结果不同。本文中选择的病例是排除了染色体异常的患者后检测的结果。31例无精症患者中发现 6例存在 Y染色体微缺失,其中 AZFb+AZFc缺失 2例,AZFb缺失 3例,AZFc缺失 1例,缺失率为 19.35%,而 39例严重少精症患者中发现 5例存在 Y染色体微缺失,均为 AZFc缺失,缺失率为 12.82%。可以看出无精症患者的微缺失率高于严重少精症,且缺失情况更严重。

Y染色体微缺失的检测具有非常重要的意义,不同的位点缺失其治疗方法是不一样的,检测的结果将指导临床医生决定是否采用供精人工授精或移植前遗产学诊断 (PGD)实施辅助生育。

AZFa,AZFb,AZFb+AZFc,AZFa+b+c这四种类型缺失的患者,一般表现为无精子症。即使通过睾丸穿刺,获得精子的机会也几乎为零,故不建议进行穿刺手术和施行卵胞浆内单精子注射 ICSI。这类患者可以通过人类精子库供精生育后代。

AZFc区域缺失的少精子症患者,其精子数目有进行性下降的趋势,部分患者最后发展为无精,所以应及早进行治疗,对暂不需要后代的患者,可将其精液冷冻保存。

20世纪 90年代始,卵胞浆内单精子注射技术的应用使严重少精症甚至无精症不育男性实现了生育的可能。但无精症和严重少精症患者存在遗传缺陷的几率是很大的,Y染色体微缺失可通过辅助生殖技术传给男性子代,子代有可能在成年后表现出与父亲相同的异常缺陷,应建议患者实施移植前遗传学诊断 (PGD)来获得后代。因此严重少精症和无精症患者在进行辅助生育治疗前应常规进行遗传咨询,并应把 Y染色体微缺失检测应作为常规的检查项目[5]。

开展 Y染色体微缺失检测,可全面评价男性不育遗传缺陷,从而更好的解释发病原因,提供遗传咨询和指导临床诊疗。

[1]Krausz C,Mc Elreavey K.Y chromosome and male infertility[J].Front Biosci,1999,15(4):1-8.

[2]Tiepolo L,Zuffardi O.Localization of factors controlling spermatogenesis in the nonfluorescent portion of the human Y chromosome long arm[J].Hum Genet,1976,34(2):119-124.

[3]Maurer B,Simoni M.Y chromosome m icrodeletion screening in infertilemen[J].JEndocrinol Invest,2000,23(10):664-670.

[4]Dada R,Gupta NP,Kucheria K.Yq microdeletions-azoospermia factor candidate genes and spermatogenic arrest[J].J Biomol Tech,2004,15(3):176-183.

[5]Liow SL,Yong EL,Ng SC.Prognostic value of Y deletion analysis:How reliable is the outcome of Y deletion analysis in providing a sound prognosis?[J].Hum Reprod,2001,16(1):9-12.