标本经液化浓缩后抗酸染色检测分枝杆菌

王 勇,黄昕明,郭宇航,王晓红

(1.佳木斯大学附属第一医院,黑龙江 佳木斯 154003;2.佳木斯妇幼保健院,黑龙江 佳木斯 154003)

近年来 ,由于免疫缺陷患者逐年增多、临床激素、免疫抑制剂应用广泛等原因使分枝杆菌条件感染病例呈明显上升趋势。虽然目前针对分枝杆菌病诊断的新方法层出不穷。但经典的抗酸染色仍然是医生诊断以结核为主的分枝杆菌病的重要依据。目前实验室常规采用痰涂片抗酸染色方法虽简便易行,但该方法最小检出菌量要达到10,000条 /mL以上,阳性检出率较低,大大影响了分枝杆菌病的临床病原学诊断。为提高病原学诊断阳性率,在日常工作中我们对准备进行抗酸染色的临床痰标本在预处理方法上进行了改进,取得了很好的效果,明显提高临床痰标本分枝杆菌的阳性检出率。

1 材料和方法

1.1 材料

浓缩液 (PEG6000、 NaCl等成分 )、提取液 (EDTA、 Tris-HCl、NP40等成分)、10%次氯酸钠购自广州中山大学达安生物诊断公司;抗酸染色液购自台湾 BASO公司;高速台式离心机系上海安亭科学仪器公司产品。

1.2 方法

患者清晨漱口后咳深部痰于有盖无菌试管内。在无菌试管内加入 2～ 3倍量10%次氯酸钠,室温放置30min,期间每10分钟振荡混匀,混匀数次后痰液即可充分液化。将液化后痰液加入等量 DNA浓缩液震荡混匀13,000rmp离心 10min,弃去上清液,在沉淀中加入 DNA提取液40μL,震荡混匀后55℃加热10min,10000rmp离心5min。吸去上清液,取沉淀涂片,干燥后按常规方法行抗酸染色。对照组采用常规方法:即痰标本直接涂片行抗酸染色作为方法学对照。

2 结果

来自临床各科室痰标本58份 ,实验组抗酸染色阳性19例(19/58),占总数32.76%;对照组抗酸染色阳性14例(14/58),占总数 24.14%;其中实验组 19例阳性标本包括对照组全部14例阳性标本。两组结果具有明显差异。

3 讨论

近年来针对分枝杆菌诊断的新方法层出不穷,尤其是分子生物学方法快速敏感,但对于资源有限情况下分枝杆菌检测仍主要依赖于传统的抗酸染色检查,尤其是结核为代表的分枝杆菌感染的“重灾区”往往是哪些贫穷、落后的农村地区,如何利用现有农村医疗资源,建立快速、敏感检测分枝杆菌感染的方法意义更为重大。原有常规抗酸染色虽简单易行,但最小检出菌量要达到 10,000条 /mL以上,约有 24～61%的 HIV/AIDS结核患者为抗酸染色阴性肺结核。因此,提高抗酸染色阳性检出率异常重要。从本实验对原有方法改进中,作为液化剂而使用的次氯酸钠具有灭菌特性可以起到很好的生物安全防护作用。符合 SARS流行后国家卫生组织对医疗机构生物安全的要求。浓缩液的使用,可以最大限度的使标本中抗酸杆菌浓集,提取液与痰沉淀物混匀后55℃加热10min不会损伤分枝杆菌,但可以破坏痰中杂菌,减少杂质对染色的干扰。这些都有利于阳性检出率的提高。