多项目特种蛋白复合冻干质控品的研制

2010-03-28林建军徐成国盛小宗何燕武谢海宝

实验与检验医学 2010年6期

林建军，徐成国，盛小宗，何燕武，谢海宝

(浙江省宁波市象山第一人民医院，浙江宁波 315700)

临床实验室要获得可靠的测定结果，需要建立一个全面的质量管理体系。其中，实验室内质量控制(以下简称室内质控)是一个重要的环节，而质控品是保证质控工作的重要物质基础[1]。与液体质控品和混合血清等相比较，冻干品稳定性较好，便于长期保存与运输，是开展质控活动更理想的质控品[2]。

随着特种蛋白基础研究的深入和临床治疗实践经验的积累，特种蛋白的检测得到了从事肿瘤基础和临床工作者的重视，已成为临床检测的重要项目之一，快速准确地检测特种蛋白有重要的临床价值。

但目前国内临床实验室特种蛋白检测质控品主要来自国外进口或是国内实验室配置非商品化生产。上述质控品存在诸多问题，比如：单一项目质控品操作繁琐、进口产品价格昂贵、多项目水平质控品使用成本明显增加，在实际使用中推广困难、非商品化生产的质控品产品的质量及供应无法保证等。本研究旨在研制多项目特种蛋白复合冻干质控品，用于对多种临床检测项目同时进行质控。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 HITACHI 7170全自动生化分析仪 (日本，HITACHI)，Bio-Rad 质控品 (美国，Bio-Rad)，Scientz-12N冷冻干燥机。

1.2 质控品的制备

1.2 .1血清基质的制备正常人血清中每1000ml血清中加入 50%CaCl2溶液 10ml，36～37℃孵育 2～3h，4000～4500g/min，离心 5min，过滤除去血浆中的纤维蛋白，制得质控品血清基质。

1.2 .2质控品的制备 (1)收集日常工作中检测出的特种蛋白高浓度、无溶血、无黄疸、无细菌污染剩余血清标本，用国家卫生部门认可的方法检测标本携带传染病的可能性。检测项目包括乙型肝炎表面抗(HBsAg)、丙型肝炎抗体、艾滋病抗体(HIV 1/2抗体)、梅毒螺旋体特异性抗体。结果均为阴性的标本经56℃加热10h灭活，离心或过滤去沉淀，-70℃冰箱保存备用。特种蛋白质控品包括下列检测项目：载脂蛋白A1(Apo-A1)、载脂蛋白B(ApoB)、前白蛋白(PA)、β2微球蛋白(β2-MG)、IgG、IgA、IgM、补体 C3、补体C4、类风湿因子(RF)、抗链球菌溶血素O(ASO)、C-反应蛋白(CRP)、转铁蛋白(TRF)。(2)正常人血清中加入不同浓度的特种蛋白阳性血清调整至合适的浓度(水平1和水平2)，并加入0.5%叠氮钠作为防腐剂和稳定剂温和混匀。精密分装贴签后低温真空干燥。所得冻干质控血清取出后立即加盖封口，2～8℃保存备用。制得低浓度指控品(水平1)和高浓度质控品(水平2)。使用前加入域分装时同体积的去离子水复溶。

1.3 定值 HITACHI 7170全自动生化分析系统校准(采用可溯源至CRM470的校准品)在仪器系统保养校正、项目试剂、定标试剂均为新批号重新定标及熟练操作人员的最佳工作条件下，随机标本检测20次以上，统计分析得出平均值和期望区间值。

1.4 稳定性检测质控品制备后于2～8℃保存，每个工作日随机标本检测一次，统计分析检测结果在常规条件下的变异情况。与进口伯乐质控品进行比较，并作统计学分析。

1.5 瓶间差检测取10瓶质控品，每瓶测试1次，计算测试结果的平均值和标准差S1；另取上述质控品中的一瓶连续测试10次，计算测试结果的平均值和标准差S2；计算瓶间CV%，一般瓶间CV(%)≤5%。

2 结果

2.1 自制冻干特殊蛋白质控品的均值(x)及批内重复精确度见表1。

2.2 稳定性

表1 自制冻干特殊蛋白质控品13项目的批内重复(CV)和均值

自制冻干特殊蛋白质控品第一个月、第六个月和第十二个月结果比较见表2、3，不同时间段结果比较均无明显差异(P＞0.05)。

表2 自制冻干特殊蛋白质控品(水平1)第1、6和12个月结果比较(n=20)

自制质控品与伯乐质控品第1、6和12月变异情况比较见表4、表5，不同时间段结果比较均无明显差异(P＞0.05)。

2.3 瓶间差

使用上述1.4中的方法测得自制质控品水平1瓶间CV为1.86%，水平2瓶间CV为1.57%，伯乐质控品瓶间CV为1.55%。

3 讨论

作为较理想的质控品至少应具备以下一些特性(以临床化学质控品为例)：(1)人血清基质，分布均匀；(2)无传染性；(3)添加剂和调制物的数量少；(4)瓶间变异小；(5)冻干品复溶后稳定，2～8℃ 时≥24h，－20℃ 时≥20d；某些不稳定成分(如胆红素、ALP等)在复溶后前4 h的变异应<2%；(6)到实验室后的有效期应在1年以上[1]。其中，稳定性和瓶间差是质控品的两个重要性能，只有两者据符合要求，室内质控品才能发挥其检测和控制实验室精密测定工作的作用[3]。本研究以日常工作中检测出的特种蛋白高浓度血清为基础，以正常人血清为基质，调整至适当浓度，经精密分装和真空冷冻干燥，自制了多项目特殊蛋白复合冻干质控品，以达到同时对多种临床检测项目进行质控、降低医疗成本的目的。制备的质控品定制准确，批内重复好，分装差异仅为1.86%和

表3 自制冻干特殊蛋白质控品(水平2)第1、6和12个月结果比较(n=20)

表4 自制质控品(水平1)与伯乐质控品13个项目变异情况比较(CV%)

1.57 %；第1、6和12月结果比较差异无统计学差异(P＞0.05)，2～8℃至少可保存 12 个月，稳定性较好；各时间段与同类进口质控品变异情况比较，均无明显统计学差异(P＞0.05)，可以满足日常室内质控品的要求。临床实验室的成本核算是一个非常现实的问题，特别是2006年特种蛋白的收费价格调整后，使用原厂质控品高昂的代价更是让一些中小型医院的实验室望而却步[4]。本实验结果表明，自制特种蛋白质控品完全能够满足实验室日常室内质控的要求，解决了特种蛋白质控成本偏高的问题，为特种蛋白检测的全面质量控制提供了技术和经济上的保证。自制质控品含有多种特种蛋白项目，使仪器分析系统仅使用一个质控样本就能达到对其不同检测项目的质控，克服了单项目质控品操作繁琐的弊端，明显降低医疗成本，同时结合目前实验室情况，使用方便，有利于实验室内质控扎实地开展，提高检测质量，具有较高的社会效益和经济效益。