三种不同加样模式对ELISA法检测乙肝核心抗体结果的影响

2010-03-28张丽莉蔡安季

实验与检验医学 2010年6期

张丽莉，蔡安季

(1、深圳大学医院检验科，广东深圳 518060；2、深圳市第六人民医院检验科，广东深圳518000)

抗-HBc的检测在乙型肝炎的诊治等方面具有重要的作用[1]，酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测乙肝病毒抗-HBc已成为应用最广泛的检测技术，目前，抗-HBc检测要求是对血清进行1:30倍稀释，当面对大量的体检标本时，其工作量极其大，同时也增加了操作的复杂性。我们通过建立三种不同的架模式。运用ELISA法检测1200名入学体检大学生的血清乙肝病毒核心抗体，分析其对抗-HBc阳性检出率的差异。

1 材料与方法

1.1 标本清晨空腹采集我校1200名入学体检的大学生的静脉血，年龄18～24岁，平均20.1岁。

1.2 试剂及仪器核心抗体ELISA法检测试剂盒，上海荣盛生物技术有限公司提供；酶标仪美国BIO-RAD680；洗板机北京拓普DEM-111型。

1.3 方法

1.3.1 采血2h后，离心分离血清，2～8℃冰箱保存，48h内完成检测。

1.3.2 标准加样模式 (1)严格按照说明书操作，血清1:30倍稀释，每孔加入50μl，各设阴、阳性及空白对照。

1.3.3 加样模式 (2)血清不稀释，每孔直接加入10μl，各设阴、阳性及空白对照。

1.3.4 加样模式 (3)血清不稀释，每孔直接加入50μl，各设阴、阳性及空白对照。

1.3.5 除空白对照不加入酶标抗体，其余每孔均加入50μl酶标抗体，温育30min，洗板机洗板5次，再加入底物A、B，室温显色10min，加入终止液，最后使用酶标仪检测0D值。

1.3.6 统计学处理运用统计学的χ2拟合优度检验，标准值为 χ2=6.635(P＜0.01)。

2 结果

2.1 结果判读 HBcAb检测采用竞争法，其中样本OD值S/CO≥1为阴性，反之，为阳性。

2.2 三种不同加样模式检测1200例核心抗体结果分析，见表1。

3 讨论

ELISA法来检测乙肝病毒核心抗体标志物，其结果的准确性较为可靠，但加样方法比较复杂，主要是因为要进行对血清标本1:30倍的稀释，耗费的时间较长，而直接加入10μl、50μl的血清，加样时间比较短,操作简单。我们的实验结果表明，与标准的加样模式(1)比较，加样模式(2)：直接加入血清10μl，乙肝病毒核心抗体阳性率变化不显著，无统计学意义；而加样模式(3)：直接加入血清50μl，乙肝病毒核心抗体阳性率明显升高，具有统计学意义，这可能是由于当直接加入 50μl血清样本时，酶标抗体-HBc与反应板上包被的HBcAg结合机会有所减少，从而严重的影响了结果的检测，从抗原和抗体反应的比例分析，当过量的待测抗体与包被的抗原结合，出现明显的带现象，有研究报道单项抗HBc阳性的标本中存在低滴度和假阳性结果[2]，所以，加样模式(3)不适合ELISA法检测分析乙肝病毒核心抗体标志物。然而，加样模式(2)，虽然不是标准的加样模式，但按照其加样分析处理，结果与标准的加样模式(1)比较，其检测结果无明显的差异，当进行大规模的体检时：即检测样本含量比较大时，加样模式(1)在稀释血清时，每人需要1支试管，操作比较复杂，会造成一定的人力和物力的浪费，因此，在进行大量体检标本检测时，运用ELISA法分析乙肝病毒核心抗体，直接加入血清10μl的加样模式，在一定的程度上具有省时、经济、环保的作用，提高工作效率，比较适合于学校等机构大批量体检标本的检验。