河北省2008年HIV-1感染者分子流行病学研究

李巧敏 赵宏儒 赵翠英 李保军 苗香芬 路新利 胡园园 邢辉

HIV具有高度变异的生物学特性，使得其在传播过程中产生了许多相对独立的基因序列特征的组和亚型［1］，同时形成了特定地区或特定人群的不同亚型分布。为及时掌握河北省艾滋病病毒1型(HIV-1)的主要亚型类别和分布特点，监测不同人群中亚型毒株的分布和基因变异规律，对2008年新发现的HIV-1感染者开展HIV-1流行毒株亚型分布和变异情况研究，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 在2008年新报告的HIV感染者中随机抽样64份，其中性传播途径44例(异性传播14例，同性传播30例)，血液传播4例，吸毒传播5例，不详9例。

1.2 样品采集与处理 在对2008年新发现的HIV感染者进行流行病学调查时，用真空抗凝采血管采取静脉血，分离血浆和淋巴细胞富集液于－80℃备用。使用Qiagen公司QIAamp Viral RNA Mini Kit或Roche公司MagNA Pure LCsystem核酸自动提取仪按照说明书提取血浆样本的病毒RNA。

1.3 HIV基因扩增和纯化 扩增gag基因和env基因2个片段确定病毒基因型别。第一轮采用TaKaRa One Step RT-PCR试剂，第二轮PCR扩增基于Tiangen PCR Master Mix，按照试剂说明书操作。所用引物见表1。第二轮PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳，用QIANGEN公司的QIAquick gel extraction kit，按照说明提纯扩增的HIV-1 DNA片段。

内部控制环境是企业内部控制要素中的基础环节，是保证内部控制顺利实施的基本前提。企业要想营造完善的内部控制环境必须从内部控制制度框架的构建着手，以此为基础，充分发挥内部控制环境的作用。例如：企业应将内部控制的理念灌输到每一名员工的心中，将内部控制融入到企业的所有日常经营管理环节中，从而为内部控制的顺利实施营造良好的环境，为内部控制的顺利实施提供制度保障。再例如：作为企业的高层管理者必须结合自身的实际情况，高度关注并重新认识内部控制制度的重要性，并在企业内部成立合规的监察部门，实现对企业各个业务处理流程的动态化合规监察。另外，企业还必须站在全局发展的角度对内部控制的实施做一个整体规划。

1.4 核苷酸序列测定 以提纯的PCR产物为模板，测序引物用e7和GUX/GDX，用ABI公司3730型DNA全自动序列进行序列测定。

1.5 HIV-1亚型确定和系统进化树分析 获得的gag基因区和env基因区序列与HIV-1国际参考株比对后进行系统进化树分析，分别确定不同基因的亚型，对于发现的新重组模式的序列进行重组断点分析，结合2个基因片段的结果确定样本亚型。用Los Alamos HIV database网站下载分型参考株序列。综合分析获得的gag基因区和env基因区的序列，与HIV-1国际参考株比对。用MEGA4.0软件进行系统进化树分析。分别确定不同基因的亚型，对于B/C重组亚型主要以gag基因判别。

表1 扩增的HIV-1基因片段和引物

2 结果

2.2 河北省HIV-1毒株系统进化树分析 根据其gag和env基因片段，与HIV-1各个亚型国际参考株进行比对后构建系统进化树，结果见图1、2。

2.3 在本次流行病学调查中，采集血样64份，获得序列58份，共存在5种亚型。其中，B亚型为河北省HIV传播的主要流行毒株，占43.1%(25/64)，主要分布于血液传播途径、性传播途径人群中;其次是CRF01-AE和CRF07-BC亚型毒株，各占25.9%(15/64)。CRF01-AE亚型毒株主要分布在同性传播人群中，CRF07-BC亚型毒株的分布人群比较复杂，包括性传播途径、吸毒以及不详等人群。具体亚型的分布情况见表2。

2.1 扩增结果 gag基因片段扩增阳性54份，占84.4%;env基因片段扩增阳性58份，占90.6%。其中，测序后获得gag基因序列52条，env基因序列54条。

图1 2008年河北省HIV env基因系统进化树分析

图2 2008年河北HIV gag基因系统进化树分析

时值明治维新(1868年)，33岁的加藤由新政府重新任命为开成所教授职并。1869(明治2)年，34岁时就任大学大丞一职。1871(明治4)年成为文部大丞。其后数年间，数次被明治政府任官授职，但皆辞职。至1877(明治10)年，42岁时由文部大辅、田中不二麻吕被任为东京大学法学部、理学部、文学部的3学部综理(起初，医学部综理是池田谦斋)。1881(明治14)年有所改正，加藤成为4学部的初代总理(从此年设置学部长一职，外山正一就任文学部长)。

卡夫卡父子关系的痛苦之处在于：卡夫卡无法成为父亲，无法找到属于自己的坐标，更不可能用父亲的标准来衡量自己那个完全迥异的世界，而卡夫卡显然一生都受困于此；父亲的蛮横无理击溃了卡夫卡，以至于他认为一切困难都可以击倒他；而父亲粗暴的爱也并没有教会卡夫卡责任和承担，教会他勇敢地选择并为之付出代价。卡夫卡无法在内心树立起一个属于自己的强大形象，并达到最终真正的成长。

表2 2008年河北省样本亚型分布情况

3 讨论

2008年河北省发现了5种HIV-1亚型毒株。其HIV-1流行毒株主要为B亚型毒株，占43.1%(25/64);其次是CRF01-AE和CRF07-BC亚型毒株，各占25.9%(15/64)。B亚型毒株主要分布于血液途径传播、性传播途径人群中;CRF01-AE亚型毒株主要分布在同性传播人群中。性传播人群中亚型种类比较复杂，除以 B亚型为主外，还发现 CRF01-AE、CRF07-BC、CRF08-BC和C四种亚型。2007年进行的HIV-1分子流行病学调查时，也是发现了此5种HIV-1亚型毒株，但是不同的是，5种HIV-1亚型毒株的比例发生了明显的变化。2008年的HIV-1分子流行病学调查发现，B亚型毒株依然是主要的流行株，但是比例有所下降，CRF01-AE亚型毒株所占比例由29.4%降至25.9%。CRF-BC亚型毒株所占比例明显上升，尤其是CRF07-BC亚型毒株，在2007年的全国HIV-1分子流行病学调查中仅有1例［2］，2008年上升至15例，所占比例由2.9%上升至25.9%。可以看出，CRF07-BC亚型毒株在我省近几年开始普遍流行。可见，随着HIV-1流行时间的推移和传播途径的多样化，HIV-1流行的亚型比例在发生变化，人群分布也进一步复杂化。

我省血液途径传播的人群中主要流行B亚型，这与我国供受血感染者中以B亚型为主相一致。但是除在供受血感染者中存在外，性传播途径人群中也发现了B亚型毒株［3］。我国的CRF01-AE亚型从东南沿海省市向周边迅速扩散，我省的CRF01-AE亚型在同性恋人群中蔓延迅速，比例增长明显，应引起高度重视。同时CRF07-BC亚型比例的增加，说明HIV-1的感染途径愈来愈多样化［4］。由于HIV-1感染的血液传播途径基本已被控制，经性传播途径和母婴传播途径感染的比例开始迅速上升。据此，我们今后的工作重点应适当转移，大力宣传，加强对高危人群干预和监测，采取综合多样措施，切实有效地预防艾滋病的传播，控制经性传播蔓延的趋势。

1 Robertson D，Bradac J，Foley B，et al.HIV-1 nomenclature proposal.Science，2000，288:55-56.

2 赵翠英，邢辉，赵宏儒，等.河北省2007年HIV-1流行毒株基因序列测定及亚型分析.中华流行病学，2009，30:871-872.

3 潘晓红，姚亚萍，夏时畅，等.浙江省2003-2005年HIV-1感染者分子流行病学研究.中国艾滋病性病，2007，13:308-310.

4 刘丽花，卜宪岭，李卫红，等.男性性行为人群HTV-I基因序列测定和亚型分析.河北医药，2010，32:287-288.