乐果中毒大鼠肝脏损害及氯磷定治疗的影响

高恒波 田英平 姚冬奇 苏建玲 佟飞 马玉腾 霍书花 陈慧 王英辉

急性有机磷中毒(acute organophasphorous pesticides poisoning，AOPP)是常见的农药中毒，尤其在发展中国家，农业人口较多，发病率高，救治水平低，AOPP病死率可达 4%～30%[1]。本实验通过对 SD大鼠胃内灌注致死量乐果制备 AOPP模型，对中毒大鼠不予治疗及给予氯磷定和阿托品治疗或单用阿托品治疗，观察其病情变化，于染毒后不同时间取血测丙氨酸氨基转移酶(ALT)进行肝细胞损害的研究。报告如下。

1 材料与方法

1.1 动物分组 SD大鼠 180只，体重 180～220 g(河北医科大学实验动物中心提供)。随机分为 6组，其中对照组 6只，未治疗组 6只，治疗组 168只分为 4组，组别为阿托品组、大、中、小剂量氯磷定 +阿托品组[2]，各治疗组染毒后每个时段(1、2、4、6、8、10、12 d)6只。

1.2 试剂 乐果乳油，江苏南京农药厂生产。氯磷定，北京四环制药厂生产(批号:070902)。阿托品，天津金耀氨基酸有限公司生产(批号:0707032)。

1.3 实验方法 对照组:给 1ml 0.9%氯化钠溶液灌胃。剩余各组:给予 2L D50(640 mg/kg)的乐果灌胃，用 0.9%氯化钠溶液将设计量的乐果稀释到 1 ml给大鼠一次性灌胃染毒。未治疗组:无特殊处理。阿托品组:3 min左右给予阿托品10mg/kg肌内注射，之后据大鼠流涎、流泪、呼吸困难等体征情况酌情追加给药。小剂量氯磷定 +阿托品组:3 min左右给予阿托品10 mg/kg肌内注射 +氯磷定 10mg/kg肌内注射，之后阿托品据大鼠体征情况酌情给药；此后氯磷定于中毒后 2、4、6分别给予5 mg/kg肌内注射，然后停药。中剂量氯磷定+阿托品组:3 min左右给予阿托品 10mg/kg肌内注射 +氯磷定 10 mg/kg肌内注射，之后阿托品据大鼠体征情况酌情给药；氯磷定于中毒后 2、4、6 h分别给予 5 mg/kg肌内注射，之后 5 mg/kg肌内注射每 6小时 1次，用至 24h，改为 5mg/kg肌内注射每 12小时 1次，用至 48 h停药。大剂量氯磷定+阿托品组:3 min左右给予阿托品 10 mg/kg肌内注射 +氯磷定 20 mg/kg肌内注射，之后阿托品据大鼠体征情况酌情给药；氯磷定突击剂量 10 mg/kg肌内注射:1次 /h，连用 3次，之后每 2小时 1次连用 3次，再每 3小时 1次用至 24 h，每 4小时 1次用至 48 h，最后每 6小时 1次用至第 4天，停用氯磷定。

1.4 6组大鼠中毒后表现与评定标准 流涎、流泪、肌颤、肌无力、抽搐、呼吸困难、发绀；肌无力评分标准参照 De Bleecker标准对大鼠 Ops中毒后肌无力症状进行评分:0分:正常活动，无肌无力；1分:后肢肌无力导致共济失调但仍能自主活动；2分:尾部疼痛刺激后仅有轻微活动；3分:尾部给予疼痛刺激后肢体不能活动，不伴昏迷。

1.5 标本采集 未治疗组待大鼠死亡，治疗组于染毒后 1、2、4、6、8、10、12 d取血，测 ALT值分析其变化规律。

1.6 统计学分析 应用 SPSS 11.0统计软件，计量资料以 ¯x±s表示，进行方差齐性检验，有意义者进行最小显著差法(LSD法)，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床表现 乐果染毒后，未治疗组依次出现流涎、眼分泌物增多、下颌肌肉颤动、全身肌颤、呼吸困难、口唇明显发绀、肌力逐渐下降，所有大鼠于(9±8)h出现口吐白沫、抽搐而死亡。其他各治疗组能很好地改善染毒大鼠症状，除阿托品治疗组死亡 2只外，其余中毒大鼠均存活。给予氯磷定+阿托品治疗组均比同等剂量单用阿托品治疗组症状轻，恢复快(P＜0.01)，大剂量氯磷定+阿托品组比中小剂量组症状轻、恢复快(P＜0.01)。中剂量氯磷定 +阿托品组比小剂量组恢复快(P＜0.01)。 见表 1、2。

表 1 5组主要症状发生时间比较 n=6，h，¯x±s

表2 4组主要症状持续时间比较n=6，h，¯x±s

2.2 ALT结果

2.2.1 应用氯磷定 3组与阿托品组比较结果:在染毒后第 6天 3组比较除中小剂量组间无差异外(P＞0.05)，其余均存在明显差异(P＜0.05或 ＜0.01)，3氯磷定治疗组 ALT峰值均明显低于阿托品组(P＜0.05)。见表 3。

2.2.2 ALT峰值随时间变化均有下列趋势:染毒后 ALT随时间延长逐渐升高，至 6 d时达高峰。见表 3、图 1。

表 3 4组 ALT值比较 n=6，U/L，¯x±s

图 1 4治疗组不同时期 ALT值变化曲线

3 讨论

乐果属工农业生产常用的高毒类有机磷农药，其中毒机制为通过抑制体内胆碱酯酶(ChE)活力，从而产生一系列毒蕈碱及烟碱样症状，严重时可导致患者死亡。有观点认为胆碱酯酶复能剂对乐果中毒疗效可疑[3]，本实验模拟不同剂量氯磷定治疗 AOPP的方法，结果表明治疗效果明显。对于早期、足量、足疗程应用氯磷定治疗 AOPP，临床报道已经不少[4]，本实验进一步验证了突击量应用氯磷定治疗AOPP的有效性及可行性。

肝脏是人体重要的代谢器官，是机体的重要防线，在解毒过程中起重要作用。AOPP患者普遍存在肝功能损害，严重者还可导致肝功衰竭，但临床工作中往往被忽视。ALT主要存在于肝细胞浆内，细胞内浓度高于血清中 1 000～3 000倍。只要有 1%的肝细胞被破坏，就可以使血清酶增高一倍[5]。因此，ALT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。本研究通过对 ALT的测定，表明乐果中毒大鼠 ALT均有不同程度升高，提示中毒后肝细胞损害的存在，且其损害程度随氯磷定用量增加而减少。因此恰当的复能剂治疗不仅可缓解临床症状，还可减轻肝损害的程度。ALT峰值在第 6天出现，考虑与乐果在体内半衰期长及毒物在胃内重吸收有关，因此有人主张中毒后反复洗胃 48h[6]，同时复能剂不能过早停用。这种肝损害的发生与肝细胞缺氧，细胞器的损伤(线粒体，溶酶体，粗面内质网，滑面内质网，胞膜)密切相关[7]。同时乐果可显著诱导肝脏中的细胞色素氧化酶的活性[8]，对肝脏产生氧化胁迫，从而加重肝损害。

1 关里，王汉斌，赵得禄.肟类复能剂治疗急性有机磷农药中毒的研究现状.中华内科杂志，2004，43:157-158.

2 田英平，苏建玲，李星海，等.急性乐果中毒大鼠实验治疗研究.中国急救医学杂志，2004，24:799-801.

3 叶任高主编.内科学.第 6版.北京:人民卫生出版社，2006.964.

4 赵德禄，关里们，王汉斌.国内外肟类能剂在救治有机磷农药中毒中的应用.中华急诊医学杂志，2003，12:382-383.

5 高英梅，石桂英，郝玉杰，等.急性重症有机磷农药中毒 150例救治体会.河北医药，2009，31，2088.

6 陈成伟主编.药物与中毒性肝病.第 1版.上海:上海科学技术出版社，2002.75-80.

7 宋会霞，刘晓燕.重症有机磷农药中毒 95例的抢救与护理.中国误诊学杂志，2010，10:387-388.

8 马红霞，程培英.乐果急性、亚急性暴露对大鼠胆碱酯酶及细胞色素氧化酶影响的研究.吉林农业大学学报，2006，28:678-681.