5种天然植物及其不同部位提取物抗氧化能力比较研究

谢娟平，姜雄波

5种天然植物及其不同部位提取物抗氧化能力比较研究

谢娟平，姜雄波

(安康学院化学化工系，陕西 安康 725000)

目的：以犁头草、商陆、车前草、豆腐柴及箭叶淫羊藿5种天然植物及其不同部位提取物为研究对象，研究其抗氧化能力的差异，筛选出天然抗氧化资源及其有效部位。方法：采用甲醇超声提取各植物的不同部位，以清除DPPH自由基法分析各提取物清除自由基作用的强弱，从而评价各实验样品的抗氧化能力。结果：几种天然植物及其不同部位提取物均具有清除DPPH自由基的作用，具有较强的抗氧化能力，其中抗氧化作用最强的为豆腐柴；各提取物对DPPH自由基清除能力依次为豆腐柴(叶)＞犁头草(叶)＞车前草(叶)＞车前草(根)＞箭叶淫羊藿(地上部分)＞商陆(叶)＞商陆(根)＞犁头草(根)。结果还表明，同种植物的叶比根的抗氧化能力强。结论：天然植物的抗氧化能力与不同植物品种及不同生长部位密切相关，且与提取物的用量呈正相关。

犁头草；商陆；豆腐柴；车前草；箭叶淫羊藿；抗氧化

抗氧化性物质可以抑制氧自由基反应的发生，保护生物大分子如蛋白质、脂质及DNA[1]等，防止许多疾病的发生。目前，尽管有许多人工合成抗氧化物质，但由于安全性和潜在的毒性作用等方面的不足，合成抗氧化剂的使用受到越来越多的限制。因此，近年从天然植物中探究或寻找安全性更高的天然抗氧化物质，引起了许多学者的关注[1-4]。

犁头草、商陆、箭叶淫羊藿、车前草及豆腐柴等几种植物为秦巴山区重要的药材资源品种，具有多方面的药理活性。目前药理作用研究较多集中在提取物对心血管、血液、呼吸系统和骨代谢等方面的作用，未见犁头草、豆腐柴等植物不同部位提取液抗氧化活性研究

报道[5-9]。DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)分析法是一种筛选自由基清除剂的简便方法，其依据是自由基具有单电子而在516nm处有强吸收呈深紫色，当遇到抗氧化剂时颜色变浅，用分光光度法可以对清除程度进行定量分析。本研究以体外抗体系为模型，采用自由基分析法研究了犁头草等植物提取物对DPPH自由基的抗氧化活性，评价实验样品的抗氧化能力，为探究、寻找安全性更高的天然抗氧化性物质提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

犁头草、商陆、车前草、豆腐柴及箭叶淫羊藿由陕西省安康市药检所胥道宝主任药师鉴定并提供，样品来源见表1。

表1 样品来源Table 1 Origins ofViola japonicaLangsd. and other samples

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH) Sigma公司；甲醇、乙醇均为分析纯；蒸馏水为二次重蒸水。

BT25S型分析天平 北京赛多利斯仪器系统有限公司；SP-1901型紫外分光光度计 上海色谱仪器有限公司；HS-120D型超声波提取器 上海声源超声波仪器设备有限公司；DZKW-4型电热恒温水浴锅 黄骅渤海电器厂；JK-2000型加液器 上海精益区学仪器厂；热湿电恒温干燥箱 上海阳光实验仪器有限公司。

1.2 方法

1.2.15 种天然植物及其不同部位提取液的制备

准确称取犁头草(叶)、犁头草(根)、商陆(叶)、商陆(根)、车前草(叶)、车前草(根)、豆腐柴(叶)及箭叶淫羊藿(地上部分)干燥药材各约0.2g，由于各样品中的主要成分为黄酮苷或皂苷，均可溶于水或者极性较大的有机溶剂，而75%的乙醇具有较强的破壁能力，可以有效穿透植物细胞壁，充分提取植物有效成分，因此，取上述药材，分别加入30mL 的75%乙醇，超声提取1h，过滤，取滤液蒸干，以30mL甲醇溶解，作为药材供试液。

1.2.2 DPPH自由基的清除能力的测定

参照文献[10-11]的方法并进行如下操作：分别吸取不同浓度的样品溶液置于5mL容量瓶中，各加入4mL的 0.025mg/mL DPPH甲醇溶液，以甲醇定容至5mL，同法制备空白溶液为对照。室温下避光静置1h后于516nm处测定吸光度。

式中： A0为体系中DPPH自由基初始浓度时的吸光度；At为t时刻溶液中DPPH自由基的吸光度。

1.2.3 半数有效浓度EC50的计算和清除能力的评价

根据各样品清除DPPH自由基的曲线。计算得到质量浓度减少至原始质量浓度50%(稳定态)时所需各样品的添加量(EC50)，根据EC50值的大小判断抗氧化剂清除自由基的能力的大小，EC50值越小其清除自由基能力越强[12]。

2 结果与分析

2.1 5种植物及其不同部位提取液清除DPPH自由基的作用

实验测定了5种不同植物及其不同部位样品提取液对DPPH自由基的清除作用，以样品与DPPH质量比与对DPPH自由基清除率作图，比较结果见图1。

图1 各种提取液对DPPH自由基的清除作用Fig.1 Scavenging effect of each extract on DPPH free radicals

从图1可以看出，5种不同植物及其不同部位提取液对DPPH自由基的清除作用有一定差异，其中犁头草(叶)和豆腐柴(叶)清除能力较强，而其他几种则较弱，随着加入量的增加，各个样品对DPPH自由基清除能力都有增强。可以看出，豆腐柴(叶)在实验范围内，随着样品加入量的增加，清除能力迅速增加，到达约2mg/mg时达到最大，此后不再有显著增加；犁头草(叶)和车前草(叶)的清除能力在样品量分别增加到约8.0mg/mg时趋于稳定；其他几种样品在实验范围内对DPPH自由基清除能力呈缓慢增加趋势。

2.2 5种植物及其不同部位提取液EC50值及清除能力的评价

各样品的清除率对其样品量进行曲线拟合，求出各种样品的EC50值(每个样品平行做3次，取平均值)，结果见表2。

表2 5种植物提取液对DPPH自由基的半数有效浓度EC50Table 2 EC50of extracts from these plants on DPPH free radicals

由图1和表2可以看出，在DPPH自由基的反应体系中，各种植物样品(叶)提取液对自由基的清除能力差异较大，其清除能力依次为豆腐柴、犁头草、车前草、箭叶淫羊藿和商陆，其中豆腐柴的抗氧化能力几乎为商陆叶的16倍；同一植物不同部位提取液对自由基的清除能力也有较大差异，其中差异最大的为犁头草，其次为车前草和商陆，其中犁头草叶提取液的EC50值仅为犁头草根提取液的1/10，表明犁头草叶提取液的抗氧化能力几乎为犁头草根提取液的10倍。

3 讨 论

综上所述，本实验所研究的犁头草等5种植物提取液都具有较强的清除DPPH自由基的能力，其中抗氧化作用最强的为豆腐柴；各提取物对DPPH自由基清除能力依次为豆腐柴(叶)＞犁头草(叶)＞车前草(叶)＞车前草(根)＞箭叶淫羊藿(地上部分)＞商陆(叶)＞商陆(根)＞犁头草(根)；随着提取液质量浓度的增大，抗氧化能力逐渐增强。结果还表明，同种植物的叶比根的抗氧化性能力强。几种植物提取液在DPPH自由基清除率方面表现出的差异与不同植物品种及不同生长部位密切相关，且与提取物的用量呈正相关。

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Antioxidant Effects of Extract from Different Parts of Five Natural Plants: A Comparative Study

XIE Juan-ping，JIANG Xiong-bo
(Department of Chemistry and Engineering, Ankang University, Ankang 725000, China)

Objective: The antioxidant activities of extracts from different parts of Viola japonica Langsd., Phytolacca acinosa Roxb, Plantagoasiatica L., Premna microphylla Turcz. and Epimedium sagittatum were determined to screen natural antioxidant resources and effective parts. Methods: Different parts of these plants were extracted with methanol under the assistance of ultrasound wave treatment. The antioxidant activities of these plants were assayed by evaluating the scavenging effects on DPPH free radicals. Results: All the extracts from these plants had significant antioxidant activity. The strongest DPPH free radical scavenger was the extract from leaves of Premna microphylla Turcz., followed by extracts from leaves of Viola japonica Langsd., leaves of Plantagoasiatica L., roots of Plantagoasiatica L., leaves of Epimedium sagittatum, leaves of Phytolacca acinosa Roxb, roots of Phytolacca acinosa Roxb, and roots of Viola japonica Langsd.. Conclusion: There is a close relationship between antioxidant activity and the type and part of these plants and the extracts from different parts of these plants shows an antioxidant effect positively dependent on dose.

Viola japonica Langsd.；Phytolacca acinosa Roxb；Premna microphylla Turcz.；Plantagoasiatica L.；Epimedium sagittatum；antioxidation

R284.1

A

1002-6630(2010)21-0173-03

2010-03-20

陕西省教育厅科学研究计划项目(09JK319)；安康学院科研资助项目(2007AKXY029；AYQDZR200801)

谢娟平(1972—)，女，副教授，硕士，研究方向为天然产物分离分析与开发。E-mail：xjp_731205@163.com