胃癌组织中MTA1蛋白及微血管密度检测

林存侠,温洪涛#,张 蕾,张云汉

1)郑州大学第一附属医院消化内科郑州 450052 2)郑州大学第一附属医院肿瘤科郑州 450052 3)郑州大学第一附属医院病理科郑州 450052

#通讯作者,男,1968年2月生,博士,教授,主任医师,研究方向:消化道肿瘤的基础与临床,E-mail:wenhongtao68@163.com

胃癌是发病率较高的一种恶性肿瘤,严重危害人类的生命与健康,早期多发转移是其一个重要的生物学特性[1]。MTA1(metastasisassociated gene 1)是最近发现的一个肿瘤转移相关基因,尽管其功能尚未完全清楚,但已有的研究[2]表明,其表达产物MTA1蛋白与多种肿瘤的浸润、转移密切相关。微血管密度(microvessel density,MVD)反映肿瘤新生血管的增生程度,肿瘤组织中 MVD越高,肿瘤越易浸润、转移[3]。为了解胃癌组织中 MTA1蛋白的表达及其与MVD的关系,作者进行了如下研究。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集郑州大学第一附属医院病理科 2006年 9月至 2008年 9月 63例胃腺癌组织存档蜡块,患者术前均未接受化疗、放疗及免疫治疗等,其中男 34例,女 29例,年龄 35.0～77.0 (57.4±11.0)岁;高、中分化腺癌22例,低分化腺癌41例;侵及浅肌层者 9例,侵及深肌层者 22例,侵及浆膜层者 32例;有淋巴结转移者 36例,无淋巴结转移者 27例。另选同期 12例胃溃疡手术患者溃疡旁正常胃黏膜组织作对照,其中男 7岁,女 5例;年龄36.0～75.0(56.1±9.8)。标本均经病理学证实。

1.2 主要试剂 山羊抗人MTA1多抗购自美国Santa Cruz公司,工作浓度为1:200;浓缩型鼠抗人CD105单抗(工作浓度 1:100)和免疫组织化学通用试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 2种组织中TA 1蛋白及M VD检测 标本均经体积分数为10%甲醛固定,石蜡包埋,4μm厚连续切片3张,1张行 HE染色以确定病理性质,另外2张用于免疫组织化学检测。切片常规脱蜡、脱水,抗原经高温高压修复,严格按免疫组化试剂盒说明书步骤进行操作。分别以已知MTA1蛋白阳性的乳癌组织、CD105阳性的扁桃体组织作为阳性对照,用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判断标准 MTA1蛋白阳性染色颗粒主要位于胞核内,部分细胞胞质也呈阳性反应。采用Barnes等[4]半定量法进行阳性结果判定,每例选择10个高倍视野,计算MTA1阳性细胞数占视野中肿瘤细胞总数的百分比:无阳性表达计0分,＜25%计1分,25%～计 2分,50%～计 3分,≥75%计 4分。按染色强度计分:浅黄色计 1分,棕黄色计2分,棕褐色计 3分。将 2项指标评分相乘,总分0分为阴性(-),＞1分为阳性(+)。依照Weidner等[5]的判断标准进行MVD判定:所有染成棕色的单个内皮细胞或内皮细胞簇均计数为 1个血管,管径 ＜50 μm、单个染色细胞及成群无管腔的染色细胞均作为微血管计,而管径 ＞50μm及肌层较厚者均不作为微血管计。先于低倍镜下寻找 MVD最高的区域,然后在高倍镜下选择 3个视野计数微血管,取平均值即为MVD。

1.5 统计学处理 采用SPSS 10.0进行统计分析,应用 χ2检验、t检验或单因素方差分析比较不同类型胃组织及不同临床病理特征的胃癌组织中 MTA1蛋白和MVD的表达情况,检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 2种胃组织中M TA 1蛋白的表达及MVD比较 MTA1蛋白的表达见图1A、1B。CD105标记的微血管主要分布于肿瘤组织,特别是肿瘤边缘区,在正常胃黏膜中表达较弱或不表达(图 1C、1D)。胃癌组织中MTA1蛋白的表达及MVD高于正常胃黏膜组织,见表 1。

图1 正常胃黏膜及胃癌组织中M TA 1蛋白及微血管检测结果(SP,×400)A,B:分别为正常胃黏膜和胃癌组织中MTA1蛋白的表达;C,D:分别为正常胃黏膜和胃癌组织中MVD的表达。

表1 2种胃组织中M TA 1蛋白的表达及MVD比较

*χ2=9.380,P=0.002;#t=9.974,P＜0.001。

2.2 胃癌组织中M TA1蛋白表达及M VD与临床病理特征的关系 见表2。

表2 胃癌组织中MTA 1蛋白表达及M VD与临床病理特征的关系

2.3 胃癌组织中M TA1蛋白的表达与MVD的关系 MTA1蛋白表达者MVD值(47.49±7.69)高于MTA1蛋白未表达者(36.77±5.71)(t=5.265,P＜0.001)。

3 讨论

自从Toh等[6]利用Southern印迹杂交法分离出鼠乳癌相关基因 MTA1及其对应的人类同源物MTA1之后,MTA1及其表达产物与肿瘤的关系就成了研究的热点。MTA1蛋白在肿瘤浸润转移中的作用目前还不清楚,研究[7]证明 MTA1蛋白是核小体重塑和组蛋白去乙酰化酶复合物的一个组成部分,可通过与组蛋白去乙酰化酶(HDACs)结合,趋化HDACs到达目标基因的启动子区域,通过去除其组蛋白的乙酰基从而重塑染色质结构,促进基因组DNA与组蛋白结合,使某些染色质区域的结构由松散变得更加紧密,从而导致某些抑制肿瘤浸润转移的基因的转录受到抑制,降低其表达水平。

作者的研究结果显示:胃癌组织中MTA1蛋白的表达水平高于正常胃黏膜组织;胃癌组织中侵及浆膜者MTA1蛋白表达水平高于未侵及浆膜者,低分化者高于高中分化者,有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者。说明MTA1蛋白的表达与胃癌的发生及浸润、转移有关,MTA1蛋白的过表达可能是胃癌发生发展的促进因素。

有研究[8]报道,MTA 1可能是通过增强低氧诱导因子1α(HIF-1α)的稳定性和转录活性间接使血管内皮生长因子的转录活性和表达增强,最终导致新生血管的形成,但具体机制尚不清楚。作者的研究结果表明,MTA1蛋白阳性表达的胃癌组织中MVD的表达高于MTA1蛋白阴性表达者,提示胃癌组织中MTA 1蛋白的过表达可能与微血管的生成密切相关,具体机制有待于进一步研究。

综上所述,MTA1蛋白在胃癌的发生发展中发挥重要作用,可能与其促进胃癌组织的微血管生成有一定关系。深入研究 MTA1蛋白及其编码基因,进而研究它们与肿瘤的关系对于进一步揭示肿瘤的浸润、转移机制和探寻更为有效的治疗手段具有重要意义。

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