细穗兔儿风的化学成分研究Δ
2010-02-11罗艺萍赵兴堂赵静峰羊晓东李良
罗艺萍,赵兴堂,赵静峰,羊晓东#,李良
(1.云南大学教育部自然资源药物化学重点实验室,昆明市 650091;2.思茅师范高等专科学校生命科学系,普洱市 665000)
细穗兔儿风(Ainsliaea spicata)系菊科兔儿风属植物,又名肾炎草、卵叶宽穗兔儿风、马蹄草等,主要分布于云南、广西、贵州等地,印度和不丹也有分布[1]。该植物在滇南地区民间以全草入药,具有清热、利湿、止咳和解毒的功效,主治急、慢性肾炎,肾孟肾炎,膀胱炎,支气管炎及痢疾和刀枪伤[2]。报道兔儿风属植物中的化学成分主要有倍半萜内酯、倍半萜苷、三萜、甾体及黄酮类化合物。细穗兔儿风的化学成分的研究未见报道。笔者从细穗兔儿风的干燥全草的乙醇提取物中分离得到了10个化合物,分别为木栓酮(1)、表木栓醇(2)、蒲公英赛醇(3)、蒲公英赛醇乙酯(4)、还阳参属苷E(5)、4,4′-二丁氧基联二苯(6)、棕榈酸(7)、正二十烷醇(8)、β-谷甾醇(9)、胡萝卜苷(10)。以上化合物均为首次从该植物中分离得到,其中3、4、5、6 为首次从该属中分离得到。
1 材料
1.1 仪器
XT-4型显微熔点测定仪(北京泰克仪器有限公司);1100型LC/MSD TOF联用仪(美国Agilent公司);AM-300型超导核磁共振(NMR)仪(瑞士Bruker公司);GF254薄层色谱板(青岛海洋化工厂)。
1.2 试药
β-谷甾醇对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110851-200504);胡萝卜苷标准品(顺勃生物工程技术有限公司,纯度:98%,批号:09081-199805);200~300目和300~400目柱色谱硅胶(青岛海洋化工厂);样品于2008年9月采自云南省普洱市,由思茅师范高等专科学校生命科学系李秀副教授鉴定为细穗兔儿风A.spicata,标本存放在云南大学教育部自然资源药物化学重点实验室。
2 方法与结果
2.1 提取分离
细穗兔儿风干燥的全草5.0 kg,用95%乙醇室温冷浸5次。合并提取液,减压蒸馏得粗提物。将其悬浮于水中,分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得石油醚部分94 g、乙酸乙酯部分30 g、正丁醇部分48 g。取石油醚部分进行硅胶柱层析,用石油醚-乙酸乙酯溶剂体系(1∶0~0∶1)梯度洗脱,得到4个组分。组分3用石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮等溶剂体系进行洗脱,最终分离得到到化合物1(100 mg)、5(400 mg)、6(8 mg)、9(100 mg)、10(30 mg)。乙酸乙酯部分经硅胶柱层析,用石油醚-乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇溶剂体系梯度洗脱,得到5个组分。组分3经反复的柱层析,用石油醚-氯仿、石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮等溶剂体系进行洗脱,最终分离得到化合物2(200 mg)、3(150 mg)、4(70 mg)、7(20 mg)、8(100 mg)。
2.2 结构鉴定
2.2.1 化合物1:无色针状结晶(氯仿),C30H50O;mp 267~268℃;1H-NMR(300 MHz,CDCl3)δ:0.88(3H,d,J=6.0Hz,H-23),0.73(3H,s,H-24),0.87(3H,s,H-25),1.01(3H,s,H-26),1.05(3H,s,H-27),1.18(3H,s,H-28),0.95(3H,s,H-29),1.00(3H,s,H-30);13C-NMR(75 MHz,CDCl3)δ:21.8(C-1),41.7(C-2),212.6(C-3),57.8(C-4),41.7(C-5),41.1(C-6),18.2(C-7),52.7(C-8),37.8(C-9),59.4(C-10),35.6(C-11),30.5(C-12),39.7(C-13),38.3(C-14),32.4(C-15),37.0(C-16),30.0(C-17),42.4(C-18),35.2(C-19),27.7(C-20),32.3(C-21),39.2(C-22),6.3(C-23),14.2(C-24),17.5(C-25),20.2(C-26),18.2(C-27),31.3(C-28),34.9(C-29),31.6(C-30)。以上数据与文献[3]报道基本一致,故鉴定化合物1为木栓酮(Friedelin)。
2.2.2 化合物2:无色块状结晶(乙酸乙酯-石油醚),C30H52O;mp 283~284 ℃;1H-NMR(300 MHz,CDCl3)δ:3.73(1H,br s,H-3),0.93(3H,d,J=6.0 Hz,H-23),0.95(3H,s,H-24),0.86(3H,s,H-25),0.99(3H,s,H-26),1.01(3H,s,H-27),1.17(3H,s,H-28),1.01(3H,s,H-29),0.96(3H,s,H-30);13C-NMR(75 MHz,CDCl3)δ:15.3(C-1),32.4(C-2),72.3(C-3),48.7(C-4),37.4(C-5),41.3(C-6),17.7(C-7),52.7(C-8),37.9(C-9),60.9(C-10),35.1(C-11),30.2(C-12),37.9(C-13),38.8(C-14),32.4(C-15),36.6(C-16),30.2(C-17),42.4(C-18),35.1(C-19),27.8(C-20),35.6(C-21),39.2(C-22),11.1(C-23),15.9(C-24),17.8(C-25),18.2(C-26),19.6(C-27),31.6(C-28),31.3(C-29),34.5(C-30)。以上数据与文献[4]报道基本一致,故鉴定化合物2为表木栓醇(Epifriedelanol)。
2.2.3 化合物3:无色块状晶体(氯仿),C30H50O;mp 222~223 ℃;飞行时间质谱(TOF-MS)m/z:425[M-1]+;1H-NMR(300 MHz,CDCl3)δ:5.52(1H,dd,J=3.0,8.0 Hz,H-15),3.18(1H,dd,J=5.0,15.2 Hz,H-3),2.03(1H,br d,J=12.6 Hz,H-16b),1.91(1H,br d,J=12.2Hz,H-16a),1.07(3H,s,H-26),0.96(3H,s,H-23),0.93(3H,s,H-28),0.91(3H,s,H-25),0.89(3H,s,H-27),0.89(3H,s,H-30),0.83(3H,s,H-28),0.80(3H,s,H-24);13C-NMR(75 MHz,CDCl3)δ:37.5(C-1),27.5(C-2),78.6(C-3),38.3(C-4),55.1(C-5),18.3(C-6),40.9(C-7),38.5(C-8),48.3(C-9),37.1(C-10),17.3(C-11),33.3(C-12),37.5(C-13),157.6(C-14),116.4(C-15),37.2(C-16),35.4(C-17),48.8(C-18),36.3(C-19),28.9(C-20),33.2(C-21),35.3(C-22),28.3(C-23),15.2(C-24),15.3(C-25),25.4(C-26),20.8(C-27),29.5(C-28),32.9(C-29),29.4(C-30)。以上数据与文献[5]报道基本一致,故鉴定化合物3为蒲公英赛醇(Taraxerol)。
2.2.4 化合物4:白色片状晶体(丙酮),C32H52O2;mp 268~270℃;TOF-MS m/z:467[M-1]+;1H-NMR(300 MHz,CDCl3)δ:5.53(1H,dd,J=3.7,8.0 Hz,H-15),2.04(3H,s,Ac-CH3),2.02(1H,dt,J=3.0,13.5 Hz,H-19),1.90(1H,dd,J=4.8,12.5 Hz,H-18),1.09(3H,s,H-26),0.95(3H,s,H-25),0.95(3H,s,H-29),0.91(3H,s,H-24),0.91(3H,s,H-27),0.88(3H,s,H-30),0.86(3H,s,H-23),0.82(3H,s,H-28);13C-NMR(75 MHz,CDCl3)δ:37.1(C-1),23.0(C-2),80.5(C-3),37.3(C-4),55.2(C-5),18.3(C-6),33.2(C-7),38.6(C-8),48.8(C-9),37.3(C-10),17.1(C-11),36.9(C-12),37.6(C-13),157.5(C-14),116.5(C-15),33.3(C-16),36.2(C-17),48.4(C-18),40.9(C-19),29.2(C-20),35.3(C-21),37.3(C-22),28.3(C-23),16.5(C-24),15.4(C-25),25.5(C-26),29.5(C-27),29.4(C-28),32.9(C-29),20.8(C-30),170.4(C-31),20.8(C-32)。以上数据与文献[6,7]报道基本一致,故鉴定化合物4为蒲公英赛醇乙酯(Taraxeryl acetate)。
2.2.5 化合物5:棕色针状结晶(甲醇),C21H28O9;TOF-MS m/z:243[M-1]+;1H-NMR(300 MHz,CDCl3)δ:6.28(2H,m,H-13a,13b),5.66(1H,br s,H-15a),5.42(1H,br s,H-15b),5.08(1H,s,H-14a),4.93(1H,s,H-14b),4.63(1H,br t,J=5.8 Hz,H-3),4.46(1H,d,J=6.8 Hz,H-1 ′),4.33(1H,d,J=3.0 Hz,H-6),3.89(1H,m,H-8),3.87(1H,d,H-6 a′),3.67(1H,dd,J=12.0,3.4 Hz,H-6b′),3.22-3.41(4H,m,H-2′,3′,4′,5′),3.05(1H,br q,J=8.4 Hz,H-1),2.60-2.78(3H,m,H-5,7,9a),2.36(H,m,H-2a),2.25(1H,dd,J=15.0,2.5 Hz,H-9b),1.95(1H,m,H-2b);13C-NMR(75 MHz,CDCl3)δ:46.4(C-1),38.8(C-2),81.5(C-3),150.9(C-4),52.1(C-5),79.8(C-6),50.6(C-7),71.7(C-8),43.0(C-9),145.4(C-10),137.7(C-11),172.3(C-12),122.6(C-13),117.1(C-14),113.4(C-15),103.4(C-1′),75.3(C-2′),78.1(C-3′),67.0(C-4′),77.9(C-5′),62.9(C-6′)。以上数据与文献[8,9]报道基本一致,故鉴定化合物5为还阳参属苷E(Crepiside E)。
2.2.6 化合物6:黄色晶体(氯仿),C20H26O2;mp 147~148℃;1H-NMR(300 MHz,CDCl3)δ:0.90(6H,t,J=7.5 Hz,2 ×OCH2CH2CH2CH3),4.05(4H,t,J=6.5 Hz,2 × OCH2CH2CH2CH3),1.72(4H,m,2×OCH2CH2CH2CH3),1.45(4H,m,2×OCH2CH2CH2CH3),7.23(4H,q,aromatic),7.70(4H,q,aromatic)。以上数据与文献[10,11]报道基本一致,故鉴定化合物6为4,4′-二丁氧基联二苯(4,4′-dibutanoxy biphenyl)。
2.2.7 化合物7:白色固体(氯仿-甲醇),C16H32O2;mp 49~50℃;用碱化的溴甲酚绿显色反应阳性,显土黄色,显示化合物为有机酸。1H-NMR(300 MHz,CDCl3)δ:2.33(2H,t,H-2),1.63(2H,t,H-3),1.26~1.30(24H,m,H-4~15),0.88(3H,t,H-16);13C-NMR(75 MHz,CDCl3)δ:175.8(C-1),34.1(C-2),31.9(C-3),29.1~30.1(C-4~13),24.7(C-14),22.7(C-15),14.1(C-16)。以上数据与文献[12]报道基本一致,故鉴定化合物7为棕榈酸。
2.2.8 化合物8:白色粉末,C20H42O;mp 64~66℃;溶于乙酸乙酯、丙酮、甲醇;1H-NMR(300 MHz,CDCl3)δ:2.01(1H,s,OH),3.51(2H,t,H-20),1.43(2H,t,H-19),1.25(32H,s,H-3~18),1.35(2H,m,H-2),0.89(3H,t,H-1);13C-NMR(75 MHz,CDCl3)δ:14.2(C-2),22.9(C-3),32.0(C-3),29.6(C-4),29.7(C-5~17),25.6(C-18),32.2(C-19),62.8(C-20)。以上数据与文献[13]报道基本一致,故鉴定化合物8为正二十烷醇。
2.2.9 化合物9:无色针状晶体(乙酸乙酯),与β-谷甾醇对照品进行对照,混合熔点不下降;在多种溶剂系统中进行薄层层析检测,Rf值一致,且显色相同,故确定为β-谷甾醇(β-sitosterol)。
2.2.10 化合物10:白色粉末,与胡萝卜苷标准品进行对照,混合熔点不下降;在多种溶剂系统中进行薄层层析检测,Rf值一致,且显色相同,故确定为胡萝卜苷(Daucosterol)。
3 讨论
兔儿风属植物作为一种常用的民间草药,在我国南方许多地区均有药用。现代药理及临床应用表明,本属植物有很好的抗炎、抗病毒作用。从已有的化学成分方面的研究看出,兔儿风属植物多含有三萜和倍半萜内酯类成分,而倍半萜内酯有很好的抗肿瘤活性,因此针对本属植物在这一方面的研究有待进一步深入。
本研究采用硅胶柱色谱及重结晶的方法对细穗兔儿风干燥全草的乙醇提取物进行分离纯化,通过理化常数测定以及波谱分析分离鉴定了10个化合物的结构,分别为4个三萜、1个倍半萜内酯、2个甾体、2个脂肪烷/酸和1个联苯类化合物。化合物1~10均为首次从兔儿风属植物中分离得到,其中化合物3、4、5、6为首次从该属中分离得到。本研究可对开发利用兔儿风属植物资源在创制中成药新品种及综合利用等方面提供科学依据。
[1]中国科学院昆明植物研究所.云南植物志[M].第13卷.北京:科学出版社,2004:625.
[2]云南省普洱市民族传统医药研究所.云南思茅地区中草药选[M].普洱:云南省思茅地区出版社,1971:360.
[3]刘建群,吴继梅,寇晓莉,等.扁担杆的化学成分研究[J].中药材,2008,31(10):1505.
[4]袁久志,孙启时.麻栎叶的化学成分研究[J].沈阳药科大学学报,1999,16(1):60.
[5]石 妍,李 帅,李红玉,等.翻白叶树根化学成分的研究[J].中国中药杂志,2008,33(16):1994.
[6]杨秀伟,邹 磊,吴 琦,等.芙蓉菊化学成分研究[J].中国中药杂志,2008,33(8):905.
[7]杨福全,欧庆瑜,俞惟乐.驴驴蒿的化学成分研究[J].中国中药杂志,1994,19(3):166.
[8]Miyase T,Ueno A,Noro T,et al.Studies on sesquiterpene glycosides from Crepis japonica[J].Chem Pharm Bull,1985,33(10):4451.
[9]Didier F,Christophe G,Jean-Claude D,et al.Sesquiterpene lactone glycosides from Lapsana communis L.subsp.communis[J].Phytochemistry,1999,51(8):999.
[10]Joji N,Takahiko I,Tamotsu Y.Macro Rings.V.syntheses of tetraoxaparacyclophanes containing two biphenyl nuclei[J].Bull Chem Soc Japan,1973,46(1):263.
[11]Lennart E,Bertil H.Studies on electrolytic substitution reactions. Ⅻ.synthesis of 4-alkoxy-4′-cyanobiphenyls-a class of liquid crystals-Via andic cyanation of 4,4′-dialkoxybiphenyls in emulsion systems[J].Acta Chem Scand B,1977,31:813.
[12]刘 海,周 欣,赵 超,等.吉祥草化学成分研究[J].中国药房,2009,20(12):914.
[13]刘 译,杨 勇,马廷升,等.马蹄莲化学成分研究[J].中国药师,2007,10(9):849.