不同检验方法检验梅毒血清的比较研究

陈景云

黑龙江省牡丹江市第二人民医院检验科（157000）

梅毒是由梅毒螺旋体所致的慢性性传播疾病，是性传播疾病中危害最严重的一种，其主要通过性交、接吻、哺乳等方式进行传播。临床上对于梅毒螺旋体的确诊主要通过实验室检测，目前实验室常用的检测方法为不加热血清反应素实验（USR）、快速血浆反应素环状卡片实验（RPR）、梅毒螺旋体抗体被动颗粒凝集实验（TPPA）3种，本文选取牡丹江市第二人民医院2009年收集的126份梅毒血清标本进行实验对比，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

对牡丹江市第二人民医院2009年1月至12月间收治的126例梅毒患者的血清标本分别进行不加热血清反应素实验（USR）、快速血浆反应素环状卡片实验（RPR）、梅毒螺旋体抗体被动颗粒凝集实验（TPPA）平行检测。

1.2 试剂

USR试剂由厦门新创提供，PRP试剂由上海荣盛提供，TPPA试剂由日本富士瑞比欧株式会社提供。

1.3 检测方法

1.3.1 USR法

取待检血清0.05mL，加于玻片上的圆圈中，并分散到整个圆圈。用1mL注射器上专用针头吸取抗原，每份待检标本上滴加1滴，摇动玻片，4min后观察结果。

结果判定：阳性（4+～3+）：肉眼可看到大的或较大的块状物；阳性（2+）：肉眼可见小块状物，在显微镜下可见较大的块状物，悬液清亮；阳性（1+）；在显微镜下可见小块状物，均匀分布，为弱阳性；可疑（±）：颗粒分布不规则，或为细小的粗糙物；阴性（－）：颗粒细小，分布均匀。

1.3.2 RPR法

取待检血清0.05mL，加入卡片上圆圈内，并分散到整个圆圈。在每份血清上滴加一滴RPR抗原。旋转摇动器皿8min，立即用肉眼观察结果。

结果判定：阳性：可见明显黑色凝集颗粒或絮片。

1.3.3 TPPA法

①在微量反应板的第1孔加入标本稀释液100μL，从第2～4孔每孔加25μL。②用微量加样器取标本25μL至第1孔中，然后以2n的方式从第1孔稀释至第4孔。③用滴管在第3孔中滴入1滴（25μL）未致敏粒子，在第4孔中滴入1滴（25μL）致敏粒子。④用微量振荡器混合30s，加盖后于室温（15～30℃）下水平静置。2h后观察结果。

结果判定：阴性：粒子成纽扣状聚集，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形；弱阳性：粒子形成小环状，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形；阳性：粒子环明显变大，其外周边缘不均匀且杂乱地凝集在周围。

2 结 果

经3种不同检测方法平行检测126份梅毒血清，检测阳性率分别为：USR法73.8%（93/126），RPR法76.2%（96/126），TPPA法100%（126/126）。前二者之间比较差异不大（P＞0.05），前二者与后者比较差异均显著（P＜0.05），具有统计学意义。

3 讨 论

故近年来推出换代产品TPPA试验。TPPA以纯化的梅毒螺旋体抗原致敏惰性的人工明胶颗粒替代TPHA试验中的致敏红细胞，使结果更为稳定，敏感性和特异性也得到进一步提高[1]。TPPA检测的是梅毒螺旋体特异性抗体，包括IgM型和IgG型，可作为梅毒的确证试验，但不适合用作治疗效果的监测。RPR其反应效价与病变活动有关，据有关文献报道[2]。RPR抗原是吸附于活性炭的类脂质抗原。试验在特制的白色纸卡上进行。阳性反应时，在白色底板上出现黑色的凝集颗粒或絮片，结果容易判断。肉眼观察，不需用显微镜，更易掌握和推广。USR法采用的是改良的VDRL抗原。将该抗原用稀释液稀释后离心沉淀，于沉淀中加入EDTA、氯化胆碱和防腐剂。EDTA可使抗原在半年内不变性，氯化胆碱可起化学“灭活”作用（灭活补体）。后两者实验方法简单、方便、经济，对于梅毒的普查十分适合，但遇可疑病例仍须经TPPA检测确定。

[1] 王育瑛,赵文波.TPPA和RPR联合检测梅毒抗体的实验研究[J].浙江中医药大学学报,2009,33(4):488-489.

[2] 杨建兰,郎亦波.不同血清学诊断方法检测梅毒螺旋体的结果分析[J].临床和实验医学杂志,2009,8(5):90-91.