广玉兰油对高脂血症大鼠调血脂作用及其机制的研究

汪正广， 吴常青， 汪春彦， 江 勤， 董六一*

(1.抗炎免疫药理学省部共建教育部重点实验室，国家中医药管理局中药药理三级实验室，安徽医科大学药理学教研室，安徽合肥230032;2.安徽医科大学第一附属医院，安徽合肥230032)

高脂血症可加速心、脑等器官的动脉粥样硬化(atherosclerosis，As)，引起冠心病、心肌梗死等疾病，故降低血脂是防治心脑血管病的有效措施［1］。广玉兰(Magnolia grandifore)又名荷花玉兰、洋玉兰，系木兰科木兰属乔木树种。其叶及花中含有挥发油、木兰花碱等多种化学成分，药理实验表明对正常或麻醉状态下的动物均有缓慢的降压作用［2-3］。其叶乙酸乙酯提取物中还含有黄酮类和酚类化合物，具有显著的抗氧化活性［4］。广玉兰油系从其种子中提取的含有多种不饱和脂肪酸、黄酮类及酚类化合物，本研究以高脂血症大鼠模型为研究对象，探讨广玉兰油的调血脂作用及其作用机理。

1 材料

1.1 实验动物 健康♂性清洁级SD大鼠，体重200～220 g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，合格证号:SCXK(沪)2008-0016。

1.2 药品及试剂 广玉兰油:安徽农业大学林学院提供(每1mg广玉兰油相当于8.9mg生药量)，批号:20090315;辛伐他汀:广东彼迪药业有限公司，批号:20090101;胆固醇(上海蓝季科技发展有限公司，批号060920);丙硫氧嘧啶(上海复星朝晖药业有限公司，批号 060901);胆酸钠(Sigma公司，批号066K1704);TG，TC，HDL-C，LDL-C 测定试剂盒:长春汇力生物技术有限公司，批号:20090518;SOD，GSH-Px，MDA试剂盒:南京建成生物工程研究所，批号:20090521。PON1(ELISA)试剂盒:上海沪峰生物科技有限公司，批号:20090515。

1.3 仪器 756P紫外分光光度计(上海光谱仪器有限公司);HH-420S数显恒温水箱(金坛市大地自动化仪器厂);TGL-16H高速离心机(珠海黑马医学仪器有限公司产品);FA/JA电子天平(上海精天电子仪器有限公司);SpectraMax 190酶标仪:Molecular Devices，USA;JEDR801D形态学图像分析系统Version6.0:捷达科技有限公司。

2 实验方法

2.1 大鼠脂代谢紊乱模型

2.1.1 动物模型的建立 上述SD大鼠适应喂养1周后，随机分为2组，一组作为正常对照组(10只)，另外一组作为造模组(70只)，2组均给予基础饲料。参照文献方法［5-6］制备高脂乳剂。造模组每天上午灌胃给予高脂乳剂0.01 mL/g体重，同时正常组灌胃等量生理盐水，连续用至第10天时，各组动物断尾取血，测血清TC，以造模组血清TC显著高于正常组为确定造模成功的指标。造模处理后，从模型组共选出50只造模成功的大鼠，即高脂血症大鼠。

2.1.2 分组给药及标本处理 除正常对照组外，模型组中高脂血症大鼠随机分为5组(每组10只)，分别为:模型组，辛伐他汀对照组(阳性药组)，广玉兰油50、100、200 mg/kg 3个剂量组。每天下午，正常组和模型组给等体积的饮用水，广玉兰油各剂量组分别给予广玉兰油50、100、200 mg/kg，阳性药组给予辛伐他汀20 mg/kg，连续灌胃给药20d。给药过程中，除正常组外，其余各组上午继续给予高脂乳剂(0.01mL/g)灌胃。每周称体重1次，随体重调整给药量。末次给药后，禁食12 h，乌拉坦腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，分离血清。取大鼠胸主动脉和肝脏部分组织，用10%福尔马林液固定后，常规石蜡包埋切片，采用苏木精-伊红(HE)染色，观察血管上As病变及肝脏病理组织学变化，并依据通用半定量肝脏病理评分标准［7］，对肝脏损伤进行积分，病理积分标准如下:肝脏水样变性积1.0分，脂肪样空泡形成积2.0分，炎性细胞浸润积1.0分，嗜酸性变积1.0分，坏死积3.0分。

2.1.3 指标测定 采用氧化酶法测定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C;采用黄嘌呤氧化酶法测定血清SOD的含量，硫代巴比妥酸(TBA)法测定血清MDA的含量，采用ELISA法测定血清中PON1的活性。

2.2 统计学分析 统计学处理用SPSS 11.0统计软件进行统计，数据以±s表示，采用单因素方差分析和t检验，以P＜0.05为有统计学意义。

3结果

3.1 广玉兰油对高脂血症大鼠血脂的影响 与正常组相比，模型组TC、TG、LDL-C均显著升高(P＜0.01)，HDL-C显著下降(P＜0.01);与模型组相比，辛伐他汀组与广玉兰油中，高剂量组均能显著降低高脂血症大鼠TC、TG、LDL-C(P＜0.05或P＜0.01)，显著升高HDL-C(P＜0.01)。提示广玉兰油具有显著的降低血脂的作用，见表1。

表1 广玉兰油对高脂血症大鼠血清脂质水平的影响(±s，n=8)

表1 广玉兰油对高脂血症大鼠血清脂质水平的影响(±s，n=8)

与正常对照组比较，△△P＜0.01;与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

组别 剂量/(mg/kg) TG/(mmol/L) TC/(mmol/L) HDL/(mmol/L) LDL/(mmol/L)正常对照组-0.79±0.49 3.94±0.90 3.09±0.41 0.17±0.04模型对照组 - 1.43±0.30△△ 18.50±5.28△△ 0.94±0.17△△ 7.21±2.29△△广玉兰油 200 0.83±0.35** 8.36±4.60** 2.40±0.60** 4.53±2.29*100 1.08±0.59** 10.47±7.70* 2.80±0.83** 6.43±2.85 50 1.30±0.34 13.71±5.86 2.52±0.80** 5.64±2.90辛伐他汀 20 1.07±0.42** 12.11±4.99* 2.04±0.61** 2.46±1.17**

3.2 广玉兰油对高脂血症大鼠血清PON-1、SOD、GSH-Px活性及MDA含量的影响 与正常组相比，模型组大鼠血清中PON-1、SOD和GSH-Px活力明显下降(P＜0.01)，血清中MDA含量明显升高(P＜0.01)。与模型组相比，辛伐他汀组，广玉兰油组均能显著升高血清中PON-1、SOD和GSH-Px活力(P＜0.05或P＜0.01)，显著降低血清中MDA含量(P ＜0.05)，见表2。

表2 广玉兰油对高脂血症大鼠血清中PON-1、SOD和GSH-Px活性及MDA含量的影响(±s，n=8)

表2 广玉兰油对高脂血症大鼠血清中PON-1、SOD和GSH-Px活性及MDA含量的影响(±s，n=8)

与正常对照组比较，△△P＜0.01;与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

组别 剂 量/(mg/kg) PON-1/(IU/mL) SOD/(kU/L) GSH-Px/(kU/L) MDA/(μmol/L)正常对照组-560.4±64.7 61.6±3.5 384.0±44.9 5.65±1.63模型对照组 - 240.6±61.8△△ 54.5±6.3△△ 299.1±80.0△△ 8.93±2.64△△广玉兰油 200 558.7±79.0** 60.9±2.2* 414.7±41.6** 6.29±1.38*100 444.7±119.6** 57.4±5.0 483.7±48.0** 6.76±1.46*50 366.9±82.6* 58.6±3.5 409.0±30.6** 6.69±1.55*辛伐他汀 20 367.4±114.8* 62.7±2.5* 433.6±59.8**7.56±0.89

3.3 广玉兰油对高脂血症大鼠肝脏的保护作用正常对照组大鼠肝组织结构完整、清晰，肝细胞索排列整齐，呈放射状，肝窦正常，胞核结构清晰。模型组大鼠肝细胞普遍发生脂肪变性，肝细胞肿大变圆，胞浆疏松，内含大的脂肪滴，中央静脉周围或汇管区灶性脂变及成片组织脂变，少数可见有肝细胞碎屑样坏死和炎细胞浸润;广玉兰油组和辛伐他汀组的肝脂肪变性程度明显减轻，脂滴数量减少，肝细胞体积变小，脂肪空泡显著减小。肝脏损伤积分结果显示，广玉兰油各剂量组和辛伐他汀组与模型对照组比较均差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01)，见表3。

3.4 广玉兰油对高脂血症大鼠主动脉组织病理学的影响 光镜下可见，正常对照组大鼠胸主动脉壁结构完整，层次清晰，内膜连续光滑，中层平滑肌层均匀无萎缩;模型组大鼠胸主动脉血管壁内皮脱落，内膜增厚，内皮下间隙增宽，内弹力板断裂，斑块内含有大量泡沫细胞、巨噬细胞，纤维组织增生，中膜平滑肌明显萎缩;广玉兰油组及辛伐他汀组可见血管内皮细胞部分脱落，结构较完整，有少量脂质沉积，少见内弹力板断裂(见图1)。提示广玉兰油对实验性高脂血症大鼠的动脉粥样硬化的发生发展有一定的抑制作用。

表3 各组高脂血症大鼠肝脏组织损伤积分表(±s，n=8)

表3 各组高脂血症大鼠肝脏组织损伤积分表(±s，n=8)

与模型组比较，*P ＜0.05，**P ＜0.01。

组别 剂量/(mg/kg)肝组织损伤积分正常对照组--模型对照组 - 6.13±1.25广玉兰油 200 3.75±1.04**100 4.13±0.83**50 4.63±1.41*辛伐他汀 20 3.63±1.19**

图1 广玉兰油对高脂血症大鼠主动脉病理组织学的影响(HE染色)

3.5 广玉兰油对高脂血症大鼠对肝脏组织TNF-α蛋白表达的影响 TNF-α蛋白阳性细胞表现为胞浆或胞核呈棕黄色或深棕黄色颗粒。与正常对照组比较，模型组肝脏组织中TNF-α蛋白表达显著增加(P＜0.01)。广玉兰油各剂量组和辛伐他汀组肝脏组织中TNF-α蛋白表达较模型组显著减少(P＜0.01或 P ＜0.05)。见图2、3。

图2 广玉兰油对高脂血症大鼠肝脏组织中TNF-α蛋白表达的影响(免疫组化染色，×40)

图3 广玉兰油对高脂血症大鼠肝脏组织中TNF-α蛋白表达的影响

4 讨论

高脂血症是中老年人的常见病、多发病，由体内脂质代谢紊乱所致，是导致动脉粥样硬化和冠心病等心脑血管疾病发生的重要危险因素［8］。高脂血症和脂肪肝的发生发展与机体的脂质过氧化损伤有关［9］，血脂升高使机体自由基产生和清除平衡被破坏，大量的氧自由基可减弱脂蛋白脂酶的活性、升高TG和降低HDL，进一步加重脂质代谢紊乱。本实验结果显示，广玉兰油能明显降低高脂血症大鼠TC，TG，LDL-C，升高 HDL-C，并显著降低高脂血症大鼠血清 MDA水平、升高血清中 PON-1，SOD和GSH-Px酶的活性;另外，广玉兰油能明显改善脂肪肝损伤和主动脉血管粥样硬化病变，提示广玉兰油可有效纠正高脂血症动物的脂质代谢紊乱、脂肪肝和血管动脉粥样硬化的发生和发展，这可能与广玉兰油通过提高机体抗氧化能力，抑制脂质过氧化反应有关。

血清脂质过氧化反应可诱导炎症因子及炎症反应［10］，TNF-α 作为一种细胞因子，在正常情况下主要是由脂肪组织产生，有研究表明，TNF-α是脂肪肝发生发展中一个关键的因子［11］。当肝内的游离脂肪酸增多，游离脂肪酸可通过加强TNF-α等细胞因子的毒性，引起线粒体功能不全，肝细胞损伤［12］，本实验结果显示，广玉兰油能明显降低高脂血症大鼠肝组织TNF-α的表达，降低炎症因子水平，减轻炎症反应，延缓脂肪肝的进程。

总之，广玉兰油能明显调节高脂血症大鼠脂质代谢紊乱，减少动脉粥样硬化病变及脂肪肝的发生，其调血脂机制可能与提高抗氧化能力和抑制炎症反应有关。

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