肠康舒组方药效初步研究

李小芳， 熊婷婷， 王 娇， 曹小勇， 李 珂， 边琳晶

(成都中医药大学药学院，四川成都611137)

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种原因不明的慢性结肠炎，其病程长、反复发作、难治愈，被世界卫生组织列为现代难治病之一。流行病学资料提示，UC的发病率不论在我国和国外都有逐年增高的趋势［1，2］。中医对溃疡性结肠炎的治疗历史悠久，本病与中医学的“大瘕泄”、“肠癖”、“痢疾”、“滞下”或“泄泻”诸证类似，湿是本病的主要病理因素，脾虚湿盛是其发病关键，脾虚夹湿热是本病的基本表现。人民卫生出版社2000年出版的《消化科专病中医临床诊治》将溃疡性结肠炎分为湿热蕴结、肝脾不调、脾胃虚弱、脾肾阳虚、气滞血瘀、阴血亏虚等型。《中药新药临床研究指导原则(试行)》(2002年中国医药科技出版社)把溃疡性结肠炎的中医证型分为湿热内蕴、脾胃虚弱、脾肾两虚、阴血亏虚、气滞血瘀等型。说明湿热蕴结和脾胃虚弱是溃疡性结肠炎等胃肠病的常见证型，应以清热燥湿、益气健脾方剂治疗。

《得配本草》是研究中药药对极具价值的重要参考书，该书中记载:“黄芪得枣仁，止自汗。配干姜，暖三焦。配川连，治肠风下血。配茯苓，治气虚白浊……”书中明确指出“黄芪配川连，治肠风下血”，可知在古代中医药实践中，将黄芪配伍黄连使用，临床可用于治疗“肠癖”、“滞下”、“便血”等。《医宗金鉴·外科心法要诀》卷六十三方记载的“黄连消毒饮”，方中将黄连、黄芪作为君臣药，用于治痈疽疮疡，红肿热痛等症。

在中医药对UC的临床治疗中，根据相关统计数据［3］，我们可以得出，各类药用药频率百分数为:清热药20.65% ＞健脾(益气)药18.27% ＞理血药16.93%＞敛涩药16.20%＞行气药10.53%＞祛湿药7.41%＞温寒药3.50%＞柔肝药2.61% ＞化积药2.32%＞补肾药1.58%。无论是口服还是局部给药方式，其健脾益气药和清热药出现的频率都很高，在UC的临床治疗中发挥着举足轻重的作用。因此，根据临床实际用药情况和处方精练的角度出发，选择健脾益气药和清热燥湿药的常用代表性药物黄芪和黄连组成肠康舒处方用于UC的临床治疗。

黄芪和黄连现代化学研究结果表明，黄芪中含皂苷、多糖、香豆素、黄酮等多种化学成分，其中黄芪皂苷含量约为0.26% ～0.88%，黄芪多糖达4% ～6%［4］;黄连根茎中含多种异喹啉类生物碱，以小檗碱含量最高，为5% ～8%［5］。黄芪皂苷具有抑制组胺引起的脑血管通透性增加、能清除自由基、抗生物氧化、双向免疫调节、抗炎等作用。黄芪多糖具有双向免疫调节、抑制细菌活性、抗病毒、改善局部血液微循环、降低炎症反应等作用［6］;黄连具有抗菌、抗腹泻、保护损伤黏膜、抑制溃疡、抗炎、抗肿瘤等作用［5］。

从以上分析可见，黄芪中皂苷、多糖，黄连总碱等成分所具有的药理作用，与目前西医认为UC是感染、免疫、遗传等多种因素综合作用所致，主要采用抗炎、抗菌和抑制免疫反应等方法相吻合，可能为黄芪、黄连起效的物质基础。因此，拟以黄芪皂苷、黄芪多糖、黄连总碱组合成新复方肠康舒。

为明确拟定处方的疗效，并进一步筛选出处方的最佳组合方式，最终确定以有效组分组成的肠康舒方，进行了如下实验。

1 材料和方法

1.1 药物及试剂

黄芪、黄连饮片(购买自成都五块石中药材市场);黄连总碱提取物(陕西森弗生物技术有限公司，批号:HLZJ080723，黄连总碱含量为98.86%)，黄芪皂苷提取物(陕西森弗生物技术有限公司，批号:HQT071017450，黄芪皂苷含量为52.14%)，黄芪多糖提取物(陕西森弗生物技术有限公司，批号:HQT071117550，黄芪多糖含量为71.34%);柳氮磺胺吡啶(SASP，上海三维制药有限公司，批号:200802C08)，2，4，6- 三硝基苯磺酸(TNBS，Sigma公司，批号:107K5008)，甲醛(成都科龙试剂有限公司)。

1.2 实验动物

SD大鼠，♀♂各半，体重200～250 g;四川省中药研究所实验动物中心提供。

1.3 仪器

高效液相色谱仪(日本岛津)，显微电镜(BX51，OLYMPUS)，切片机(HM335E，MICROM)，石蜡包埋机(EG1160，LEICA)。

1.4 大鼠UC模型制备

1.4.1 造模试剂的配制 5%三硝基苯磺酸(TNBS)与无水乙醇以体积1∶1配成25 mg(TNBS)/mL(混合液)，备用。

1.4.2 造模 健康200～250 g SD大鼠实验前禁食24 h，乙醚麻醉，用大号灌胃针头(16号)涂抹少许凡士林直接插入大鼠体内，灌胃针头头部光滑不会刺伤大鼠结肠。用2 mL注射器缓慢注入相应体重比例的造模剂(80 mg/kg)，然后再注入一段长约0.3 mL的空气，尽可能清除黏附在注射器与灌肠管壁上的药液;造模后，倒提大鼠尾部30 s，然后大鼠仰卧归笼，自然清醒，自由饮食，每天观察精神、皮毛、大便、活动、饮食、存活等情况。

1.5 评价指标

计算肠重系数及病理学检查:于造模完成后1周处死大鼠，取结肠8 cm，沿纵轴剪开，冰生理盐水反复冲洗，吸干水分，称重，用10% 甲醛固定，石蜡包埋，切片(4 μm)，常规 HE染色。光镜下观察。肠重系数(%)=结肠重/大鼠体重×100%;组织学损伤评分标准如下:溃疡:分三级，0-无，1-小溃疡(小于 3 mm)，2-大溃疡(大于 3mm);炎症:0-无，1-轻度，2-重度;肉芽组织:0-无，1-有;病变深度:0-无，1-黏膜下层，2-肌层，3-浆膜层;纤维化:0-无，1-轻，2-重。

1.6 统计学处理

贵州若想大力发展自身农机技术，就必须做到因势利导、因地制宜，根据不同区域的自然禀赋作出分类指导发展决策，创造新的耕作制度与经济条件，坚持走技术化路线，用创新技术弥补地缘缺陷，率先鼓励某些有条件的区域大力发展农机化，尽可能提升省内农机化平均水平。

2 实验方法与结果

2.1 处方的药效学试验

2.1.1 分组及给药 健康SD大鼠48只，♀♂各半，随机分成6组，每组8只，依次为正常组、模型组、阳性对照组、肠康舒煎液高、中、低剂量组。灌肠给予对应药物3 d，正常组、模型组给予相同体积的生理盐水，第3天给药后，除正常组外，其余组按1.4.2项下方法造模。造模的第2天起，正常组和模型组灌肠给予同体积生理盐水，普通饲养;其余组灌肠给药，每日1次，连续7 d，各组大鼠灌肠量为0.5 mL/100 g。给药剂量见表1。

表1 各组给药剂量

2.1.2 结果 见表2

表2 肠康舒水煎液对大鼠UC模型的影响结果(±s，n=8)

表2 肠康舒水煎液对大鼠UC模型的影响结果(±s，n=8)

注:与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

正常组 8 同体积生理盐水 0.312 5±0.036 1** 0±0组别 动物数/只剂量/(g生药/kg大鼠)肠重系数/%组织学损伤评分**模型组 8 同体积生理盐水 0.717 1±0.077 6 5.86±3.08阳性组 8 0.3 g/kg SASP 0.548 6±0.085 4* 3.38±2.26*高剂量组 8 黄芪4 g黄连4 g 0.595 7±0.135 1 4.0±1.41中剂量组 8 黄芪2 g黄连2 g 0.553 8±0.084 0* 3.25±2.12*低剂量组 8 黄芪1 g黄连1 g 0.493 7±0.075 9**2.25±1.91**

实验结果表明，与正常组比较，模型组肠重系数、结肠溃疡面积、炎症程度、病变深度和纤维化程度等指标均存在显著性差异(P＜0.01)，表明该模型模拟成功。肠康舒水煎液中剂量组、低剂量组、阳性对照组与模型组比较，均能显著减小肠重系数、结肠溃疡面积，减轻病变深度、炎症和纤维化程度。这表明，肠康舒方中、低剂量组对UC大鼠均具有良好的治疗作用，其中低剂量组各指标有显著性差异，因此拟以低剂量作为处方量(即黄芪6 g，黄连6 g)。

2.2 处方拆方及最优组合筛选实验

在2.1项实验确定的处方量的基础上，取健康SD大鼠64只，♀♂各半，随机分成8组，每组8只，依次为正常组、模型组、阳性对照组、黄芪组、黄连组、黄芪-黄连3 ∶1组、1 ∶1组、1 ∶3组。按1.4.2项下造模、给药，进行实验，统计相关指标，考察不同处方对结肠病变的治疗效果，结果见表3。

实验结果表明，芪连1∶1组、芪连3∶1组与模型组比较，均能显著减轻肠重系数、炎症程度，缩小溃疡面积，降低病变深度和纤维化程度。阳性组、黄连组可减轻肠重系数，有缩小溃疡面积、降低病变深度和纤维化程度，并有减轻炎症的趋势。综合以上各指标的比较结果可见，单用黄芪或黄连的疗效不及两者合用;在两者的不同比例组中以1∶1和3∶1两组疗效最佳，明显优于1∶3组。而1∶1组的整体治疗效果又略优于3∶1组。因此，综合考虑选择黄芪-黄连1∶1为的最佳处方。即优选的处方为黄芪6 g、黄连6 g。

表3 肠康舒水煎液不同配比对大鼠UC模型的影响(±s，n=8)

表3 肠康舒水煎液不同配比对大鼠UC模型的影响(±s，n=8)

注:与模型组比较，＊P＜0.05，**P＜0.01。

组别 动物数/只剂量/(g生药/kg大鼠)肠重系数/%组织学损伤评分正常组 8 同体积生理盐水 0.315±0.05** 0.286±0.756**模型组 8 同体积生理盐水 0.653±0.081 7.125±1.727阳性组 8 0.3 g/kg SASP 0.495±0.079* 4.125±2.696*黄芪组 8 2 0.593±0.153 5.750±2.659黄连组 8 2 0.488±0.09* 4.125±2.588*芪连1:1组 8 黄芪1黄连1 0.479±0.049**2.75±2.605**芪连1:3组 8黄芪0.5黄连1.5 0.508±0.130 5.125±4.291芪连3:1组 8黄芪1.5黄连0.5 0.418±0.101**3.5±3.024*

2.3 有效组分及药材组方的药效学对比验证实验

通过文献的查阅，黄芪中黄芪皂苷与多糖类成分，黄连中小檗碱具有多途径的抗炎和免疫调节作用，可能为肠康舒方起效的物质基础。因此，为了减少服用量，便于制剂成型，使成品质量稳定可控，拟以有效组分为原料进行组方。

拟采用两种UC模型对以有效组分和药材为原料的两处方的药效进行对比研究，以进一步验证原处方的药效，明确有效组分组方的药效，并对比以药材有效组分和药材水煎液组合的两处方的疗效差异，在此基础上确定以有效组分组方的合理性。

2.3.1 处方中有效组分剂量的选择依据 由于药材中有效组分含量受药材品种、产地、采收、加工等多方面因素的影响而差异很大。为在同等量有效物质的前提下，对比两处方的疗效差异。分别采用紫外分光光度法和高效液相法对本次实验用同批黄芪水煎液中黄芪皂苷、多糖的含量以及黄连水煎液中小檗碱含量进行了测定［7-9］，以此含量为标准来确定处方中有效组分量，测定结果见表4、表5。

表4 黄芪水煎液中黄芪皂苷、多糖的含量测定结果

表5 黄连水煎液中小檗碱的含量测定结果

2.3.2 肠康舒方抗三硝基苯磺酸损伤的实验研究

健康SD大鼠40只，♀♂各半，随机分成5组，每组8只，依次为正常组、阳性组、模型组、肠康舒水煎液组、肠康舒有效组分组。按1.4.2项下方法给药、造模，进行实验观察，统计相关指标，综合考察各不同处方对结肠病变的治疗效果，结果见表6。

表6 肠康舒对三硝基苯磺酸损伤大鼠的影响(±s，n=8)

表6 肠康舒对三硝基苯磺酸损伤大鼠的影响(±s，n=8)

组别 动物数/只剂量/(g生药/kg大鼠)肠重系数/%组织学损伤评分正常组 8 同体积生理盐水 0.323±0.045** 0±0**阳性组 8 0.3 g/kg SASP 0.503±0.068**3.375±2.615**模型组 8 同体积生理盐水 0.619±0.101 6.625±1.061水煎液组 8 黄芪1黄连1 0.501±0.071**3.429±3.457*有效组分组 8多糖23.8 mg皂苷2.03 mg小檗碱50.4 mg 0.49±0.087**1.286±1.704**

实验结果显示:水煎液组、有效组分组、阳性组与模型组比较，均能显著减轻肠重系数、炎症程度，缩小溃疡面积，降低病变深度和纤维化程度。有效组分组与水煎液组比较，各项指标无明显差异，这表明有效组分组与水煎液组对三硝基苯磺酸造成的大鼠结肠病理变化的治疗效果无明显差异。

3 讨论

3.1 在肠康舒的组方中，仅选择了补气药和清热燥湿药的代表药味组成处方，未将具有清热解毒、活血止血、行气止痛等作用的药味选入。故拟将其临床应用定位为UC轻、中型发作，仅出现腹泻、腹痛等炎性反应或上述症状伴轻微便血者，用于UC各型发作间歇期的维持治疗，以防止UC的复发。

3.2 针对目前中医治疗UC一般以临床随证组方为主，其疗效受医者水平的影响较大及煎剂的饮片受产地、采收、加工、贮存多种因素影响等问题，笔者在中医药理论的指导下，结合临床治疗经验，根据UC的病因病机，吸收化学、药理研究成果，以药效实验对复方起效的物质基础进行了筛选验证，简化了处方，减少了服用量，利于中药现代制剂的开发。

3.3 在后续研究中，将综合设计UC相关药理药效实验，采用多种动物模型，根据UC发病特点，增加相应考察指标，从更高水平(如分子、细胞水平)等对处方组成及药效进行更为系统的研究，以充分证明肠康舒组方的科学性，疗效的可靠性。同时，进行急性毒性试验和长期毒性试验，对药物的安全性进行全面的评价。

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