文山百合鳞片芽诱导的影响因子研究

李黛，曾燕玲，张仁波

（遵义师范学院生物系，贵州遵义563002）

百合属植物除具有极高的观赏价值外，还具食用和药用价值，是我国卫生部审批通过的首批药食两用植物,不仅临床上有着广泛的应用，而且作为加工保健产品的原料也极具开发前景[1]。遵义地区务川县生产的百合粉早在明代初期就成为皇室御膳供品，在1938年就获贵州省轻工保健食品奖。1978年改革开放以来，务川县境内宣起了野生百合粉、百合干生产的高潮，其野生百合粉经华南热带农业大学测定，富含锌、磷、硒等11种微量元素和18种人体必需的氨基酸，产品供不应求。由于原料的需求量大，加之务川县境内野生百合的资源利用与开发的情况基本上是处于简单地收集百合鳞茎进行粗放型的初加工阶段，为一种“掠夺式”的采集[2]，因此，对务川县野生百合资源进行开发利用研究，将对务川以至整个贵州野生百合的可持续开发利用和经济的发展产生一定的影响。

文山百合（Lilium wenshanense L·J·Penget F.X.Li)作为培育百合新品种的种质材料[3]，为多年生宿根草本植物，在贵州省务川县有较多分布，其鳞茎白色，分节，淀粉含量较高，在务川县被用作野生百合粉生产的原材料之一。目前百合的种球繁育技术虽日渐成熟，但因其速度慢，繁殖系数低等缺点还是制约了百合鳞茎和切花的大规模生产。百合组培苗的培育具有繁殖系数高、周期短等优点，刚好弥补了种球繁育的不足。目前对百合组培快繁研究较多[4-9]，但对文山百合的组织培养研究仅见屈云慧等人在《植物生理学通讯》上有一篇报道[10]。本文介绍了笔者对文山百合鳞片诱导不定芽的研究。

1 材料与方法

1.1 材料

本实验所用的文山百合采自贵州务川县野生林下，种植于遵义师范学院植物园内。将鳞茎用自来水冲洗干净，然后从外到内等量分成外、中、内三层，再分别将外、中、内三层鳞片的上节和下节分开，并将鳞片下节切成下部和上部两部分后分放于不同的烧杯中，在自来水下流水冲洗60min左右，于超净工作台上用75%的酒精浸泡10s左右，然后用0.1%的升汞消毒15min，无菌水冲洗5次以上后备用。

1.2 方法

采用正交试验筛选诱导鳞片形成不定芽的最佳培养基以及用鳞片诱导不定芽的最佳着生位置和部位。所用基本培养基均为MS培养基，正交实验采用L9(3)4正交表，6－BA和NAA浓度、鳞片着生位置、鳞片部位四因素三水平的试验设计见表1。

将上述供试材料按正交试验方案接种到9种芽诱导培养基中，每个处理共接4瓶，每瓶接3块，每个处理重复3次，在温度为24－26℃，光照12h/d，光照强度1500－2000lx的培养室中培养60天后进行统计。

表1 L9(3)4正交试验表头设计表

2 结果与分析

2.16 －BA、NAA浓度对鳞片诱导芽的影响

将文山百合鳞片接种到9组培养基后约一周，白色鳞片转成了浅紫红色，10天后鳞片基部出现乳白色小突起，30天后，鳞片上的乳白色突起转成了绿色不定芽。50天左右长成1－2cm高的苗。文山百合鳞片诱导芽正交试验L9(3)4结果见表2。

对实验结果进行方差分析，结果见表3。

表2、表3显示：6－BA浓度的差异对文山百合芽诱导的影响为：1.0mg/L＞0.5mg/L＞0.1mg/L，其中以1.0mg/L为最好，差异达极显著水平，NAA浓度的影响为：0.5mg/L＝1.0mg/L＞0.1mg/L，但差异不显著。从苗的生长情况看，1号、4号、6号、8号培养瓶中苗的生长较好，其中6号和8号生长最佳，但有玻璃化现象，特别是6号的玻璃化现象较严重，1号和4号虽然较前两组稍差，但玻璃化现象不明显。从这四组培养基的激素配比来看，1号和4号的激素浓度较低，6号和8号的激素浓度配比较高，且1号、4号、8号和6号培养基中NAA：6－BA的比值为别为0.1、0.2、0.5、2，这似乎说明，随着激素浓度的增加，特别是NAA相对含量的增加，培养物玻璃化现象将逐渐加重。图1－9为9组培养基中鳞片诱导芽及芽的生长情况。

表2 鳞片诱导不定芽L9(3)4试验结果

表3 鳞片诱导芽试验结果的方差分析

2.2 鳞片不同位置和部位对鳞片诱导芽的影响

从表2和表3的结果和方差分析可知：不同着生位置和部位的鳞片对其芽诱导有一定的影响，从着生位置来看，外层鳞片诱导的平均鳞茎数最多，中层次之，内层最差；从部位来看，上节鳞片的下端诱导的平均鳞茎数最多，下节鳞片的上、下两端诱导的平均鳞茎数一样多，但差异均不显著。

3 讨论

从上述实验结果和分析可以看出：诱导文山百合鳞片形成不定芽，6-BA浓度以1.0mg/L最为合适，NAA由于为1.0mg/L时形成的不定芽成苗极缓慢，加之从节省药品考虑应以0.5mg/L最佳，因此，文山百合芽增殖的最佳培养基应为：

MS+1mg/L6-BA+0.5mg/LNAA，这与屈云慧等人[10]的结果相比稍有差异，其6-BA浓度由0.5mg/L提高到了1mg/L。文山百合由鳞片诱导不定芽，从本次实验看，每片鳞片平均最多可形成2.54个不定芽，可能是因为6号和8号培养物的玻璃化现象较严重，尽管在不定芽的生长过程中，玻璃化现象逐渐减轻，但在鳞片分化形成不定芽时玻璃化现象较严重影响了不定芽的数量，因此，如何克服文山百合鳞片诱导不定芽的玻璃化现象以增加不定芽的数量是一个值得研究的问题。此外，9号培养基中形成的鳞茎数也相对较多，并且无玻璃化现象发生，但不定芽分化出来后，生长很慢，两个月内难以形成苗，三个月后才逐步发育成苗。图9中已培养了三个月的9号培养中不定芽生长情况证实了这一点，从这组实验的激素配比来看，虽然NAA︰6-BA的比值不是太高，仅为1，但NAA和6-BA的绝对浓度均较其它组为高，这是否说明较高的激素浓度对不定芽生长成苗有一定的抑制作用，还有待进一步研究。

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