河南省鹤壁市食源性和禽源性沙门氏菌耐药性研究

张秀丽,杨保伟,廖兴广,郭晓玲,炊慧霞

河南省鹤壁市食源性和禽源性沙门氏菌耐药性研究

张秀丽1,杨保伟2,廖兴广1,郭晓玲3,炊慧霞1

目的 了解河南省食源性和禽源性沙门氏菌菌型分布和耐药性的关系。方法随机采集生鸡肉和大型养鸡场不同鸡龄的鸡肛拭子标本,按照 GB/T4789.4-2008进行沙门氏菌的分离和鉴定,琼脂平板稀释法对分离株进行药敏测定,结果依照CLSI/NCCLS(2005版)进行判定。结果生鸡肉沙门氏菌检出率为81.5%;鸡肛拭子总体检出率为14.1%,其中种鸡检出率(18.4%)高于小鸡(15.3%),高于待宰成年鸡(2.0%)。不同鸡龄分离的沙门氏菌耐药谱明显不同,来自小鸡和成年待宰鸡的沙门氏菌耐药严重,而来自种鸡的沙门氏菌几乎不耐药;生鸡肉和鸡肛拭中沙门氏菌型别不同。食源性和禽源性沙门氏菌耐药谱明显不同,但均具有严重的多重耐药现象。结论河南省食源性和禽源性沙门氏菌菌型不同,耐药谱不同,但均存在严重的多重耐药现象,不同鸡龄检出沙门氏菌耐药谱存在较大差异,提示在鸡的饲养过程中,抗生素的不合理使用情况比较严重。

食源性;禽源性;沙门氏菌;菌型;耐药

沙门氏菌是影响食品安全的致病菌之一,广泛存在于自然界和温血动物体内,是一种重要的人兽共患性病原菌。近年来,由于抗生素在农业、畜牧业和临床治疗中的广泛使用及滥用,导致其耐药性增强,耐药谱加宽〔1〕。细菌抗生素抗性问题已成为全球关注的焦点〔2〕。为弄清禽源性和食源性沙门氏菌菌型分布和耐药性的关系,我们于2008年5月到2009年10月对河南省鹤壁市市售生鸡肉和鸡带染沙门氏菌情况进行了调查,并对分离菌株进行了药敏分析。

1 材料与方法

1.1 样品的采集与运送 生鸡肉样品:无菌随机采集当地居民主要购买点生鸡肉样品31份和鸡内脏(鸡肝、鸡胗、鸡心)34份共计65份,置于样品保存箱内(0℃～4℃),于6h内送实验室检验;鸡肛拭标本297份(其中成年待宰鸡49份,采自集贸市场,15～35日龄鸡150份、种鸡98份,均采自鹤壁市大型养鸡场):以无菌棉拭子插入活鸡肛门内2cm～3cm,旋转一圈,取出放入缓冲蛋白胨水10m L,立即放入样品保存箱内(0℃～4℃),于6 h内送检。

1.2 检验方法 按照 GB/T4789.4-2008〔3〕进行沙门氏菌的分离和鉴定,试验过程以沙门氏菌CMCC54007为阳性对照;琼脂平板稀释法对沙门氏菌分离株进行药敏测定,结果判定依照美国临床实验室标准委员会(CLSI/NCCLS)2005版〔4〕手册进行。每批试验均用大肠杆菌(A TCC25922)和金黄色葡萄球菌(A TCC29213)进行质量控制。试验选用W HO推荐的 12种抗生素,分别为头孢他定(CAZ)、四环素 (TET)、氯霉素 (CHL)、链霉素(STR)、庆大霉素(GEN)、卡那霉素(KNA)和丁胺卡那(AM I)、氨苄青霉素(AM P)、克拉维酸+氨苄青霉素(AMC)、萘啶酮酸(NAL)、环丙沙星(CIP)和磺胺甲基异口恶唑+TM P(SXT)。

1.3 试剂 缓冲蛋白胨水、TTB增菌液、SC增菌液、XLD琼脂为美国BD公司生产;CHROM agar沙门氏菌显色平板为法国科玛嘉公司产品,郑州博赛生物技术研究所分装;API20E试剂条法国梅里埃公司生产;M H琼脂为英国OXO ID公司产品;沙门氏菌诊断血清为泰国A&S公司生产。所有试剂和培养基均在有效期内使用并经过核查。

2 结 果

2.1 生鸡肉(含内脏)和鸡带染沙门氏菌阳性率共检测65份生鸡肉,阳性53份,阳性率81.5%;鸡肛拭子297份,阳性42份,阳性率14.1%,见表1。2.2 生鸡肉和鸡带染沙门氏菌菌型分布 从生鸡肉中分离出53株沙门氏菌,分布在10个血清型别中,结果见表2。从鸡肛拭标本中分离出5个型别的沙门氏菌,见表3。

2.3 不同鸡龄带染沙门氏菌耐药性 我们测定了来自于种鸡18株、15～35日龄小鸡24株(分离自23份鸡肛拭)和成年待宰鸡1株共43株的沙门氏菌对12种药物的敏感性,不同鸡龄分离的沙门氏菌耐药谱明显不同,来自小鸡沙门氏菌耐药率多数在80%以上(除AM I、AMC和SXT);来自成年待宰鸡的菌株对5种药物耐受;来自种鸡的沙门氏菌耐药轻微,仅对TET和 KAN的耐药率稍高,为52.9%,其余的均在11.8%以下。

表1 鸡肛拭和鸡肉沙门氏菌检出率Table 1 Detection rate of Salmonella in chicken anal swab and chicken meat

表2 鹤壁市生鸡肉中沙门氏菌菌型分布(n=53)Table 2 Distribution of Salmonella serotype in fresh chicken meat in Hebicity(n=53)

表3 鹤壁市鸡肛拭中沙门菌菌型分布(n=43)Table 3 Distribution of Salmonella serotype in chicken anal swab in Hebi city(n=43)

2.4 禽源沙门氏菌和食源性沙门氏菌的耐药性比对 对分离自生鸡肉的53株和鸡肛拭的43株沙门氏菌进行了12种药物敏感试验,整体表现为耐药,结果见图1;来源于生鸡肉和鸡肛拭的共同血清型肠炎和印第安纳沙门氏菌对12种药物敏感试验结果见图2、图3。

2.4 禽源沙门氏菌和食源性沙门氏菌的多重耐药性比对 来源于生鸡肉沙门氏菌53株,2耐以上菌株 37株,占 69.8%;5耐以上菌株 31株,占58.5%;11耐菌株3株,占5.7%。来源于鸡肛拭的43株沙门氏菌,2耐以上菌株24株,占55.8%;8耐以上菌株23株,占53.5%;11耐以上菌株5株,占11.6%,有1株舒卜拉沙门氏菌出现对12种抗生素的耐受。来源不同但血清型别一致的沙门氏菌如肠炎和印第安纳沙门氏菌共37株,但多重耐药谱相同的仅1株。

3 讨 论

沙门氏菌作为人和动物共患病原菌,可以引起人沙门氏菌病和鸡白痢,也可潜伏在人和动物体内,使其成为健康携带者〔5〕。在沙门氏菌生态循环的生物圈中,食物是人感染沙门氏菌的重要媒介。采样中市场调查发现,一些农贸市场和大型机械屠宰厂用的屠宰机器和清洗用具,在屠宰后从不进行清洗和消毒,这样感染沙门氏菌的鸡通过屠宰污染机器和用具,再通过污染的机器和用具传染到其他鸡酮体和环境;现在市场的不合理销售方式也增加了相互污染的机会,提高了生鸡肉沙门氏菌污染率。现场调查饲养户得知,种鸡的饲养环境清洁度高,饲养精心,饲料添加剂和预防用药少;肉鸡生长周期短,一般40～42d出笼,饲料添加剂和各种各样的用药是必不可少的,药物的选择性压力是造成细菌耐药的主要原因。从图1可以看出,河南省食源和禽源性沙门氏菌均产生了严重的耐药,整体耐药率均为100%,但二者对不同药物的耐受程度不同,在12种药物中,禽源沙门氏菌有9种药物耐受程度超过了食源沙门氏菌,特别是 CAZ和 AM I,耐受率均在50%左右。具有共同来源的2个型别沙门氏菌印第安纳和肠炎,对12种药物的耐受表现不同,食源性印第安纳有8种抗生素耐受率高于禽源性,而食源性肠炎沙门氏菌除SM Z外均低于禽源性。

来源于生鸡肉和鸡肛拭样品的沙门氏菌多重耐药比较严重,有研究结果显示〔6-7〕:多重耐药沙门氏菌株会通过食物链通过动物向人类传递,其耐药性获得的途径主要为基因突变、外排泵、耐药基因编码的钝化酶和灭活酶的产生、可移动的细菌遗传耐药基因元件及其转移。动物的不合理用药使其体内沙门氏菌产生耐药性,这种耐药通过食物传递给人类,人类的不合理或滥用药物又使细菌的耐药谱增宽,加剧细菌耐药性,因此应从动物和人类两方面引导抗生素的合理使用,双管齐下,才能更好的减缓抗生素耐药性变化的趋势,为人类健康发挥长久作用。

〔1〕朱力军.动物大肠杆菌的耐药变化趋势〔J〕.中国兽药杂志,2001,35(2):16-18.

〔2〕周贵民,张军民.我国细菌耐药性监测应注意的几个问题〔J〕.中华检验医学杂志,2004,27(10):5-6.

〔3〕中华人民共和国国家标准.食品卫生微生物检验沙门氏菌检验(GB/T4789.4-2008)〔S〕.中国标准出版社 ,2008.

〔4〕Performance standards for antimicrobial susceptibility testing,Fifteenth informational supp lement,CLSI/NCCLS document M 100-S15〔S〕.2005,25(1):34-37.

〔5〕Fernando C,Julian D.Horizontal gene transfer and the origin of speciescies:lessons from bacteria.Trends Microbiol〔J〕,2000,133:128-133.

〔6〕Chen S,Zhao S,White DG,et al.Characterization of multiple-antimicrobial-resistance Salmonella serovars isolated from retail meats〔J〕.App l Environ Microbiol,2004,70(1):1-7.

〔7〕杨保伟,盛敏,席美丽,等.沙门氏菌抗生素抗性机理研究进展〔J〕.微生物学通报,2008,35(9):1479-1484.

Antimicrobial resistance of food borne and poultry-borne Salmonella in Hebi City,Henan Province

ZHANG Xiu-li,YANGBao-wei,L IAO Xing-guang,GUO Xiao-ling,CUAN Hui-xia
(Henan Center for Disease Control and Prevention,Zhengzhou 450016,China)

The purpose of the study was to understand the relationship between antimicrobial resistance and sero type distribution of poultry-borne and food borne Salmonella in Henan Province.The sample of fresh chicken meat in the marketplace and anal swab of chicken in different ages in the native large-scale chicken farm were collected random ly,and the Salmonella was isolated and identified according to GB/T4789.4-2008.The antimicrobial susceptibility of Salmonella was tested using agar dilution,and the results were determined according to the standard of CLSI/NCCLS,2005(Clinical Laboratory Standard Institute).The 81.5%of fresh chicken and 14.1%of chicken anal swab were positive to Salmonella,and the detection rate of Salmonella in broiler breeders(18.4%)was higher than that in young chicken(15.3%)and in adult chicken that would be slaughtered(2.0%).Antimicrobial resistance profiles of chicken in different ages were obviously different:Salmonella isolates from adult slaughtered chicken showed heavily antimicrobial resistance,while Salmonella strains from broiler breeders were almost susceptible to antimicrobial.Serotypes of Salmonella from fresh chicken and chicken anal swab were different.Although multidrug resistance was common,the resistance spectrum were different and the antimicrobial resistance profiles of Salmonella isolated from food and poultry were obviously different.There were also significant differences in the antibiotic resistance profiles of Salmonella from chicken in different ages,which showed the using of antibiotics in chicken farming was unreasonable.

foodbo rne;poultry-bo rne;Salmonella;serotype;antimicrobial resistance

R378.2

A

1002-2694(2010)12-1134-03

张秀丽,Email:zhangxl@hncdc.com.cn

1.河南省疾病预防控制中心,郑州 450016;

2.西北农林科技大学食品科学与工程学院,杨凌712100;

3.鹤壁市疾病预防控制中心,鹤壁 458030

2010-04-04;

2010-09-23