ＨＣＶ核心抗原在丙肝检测中的应用分析

何淑霞

【摘要】 目的 探讨HCV核心抗原在丙肝检测中的应用。方法 收集2005年10月至2008年10月本院门诊和住院HCV感染患者血清标本98份。本组病例均经HCVRNA检测为阳性，再进行抗-HCV、HCV-cAg检测了解检测结果及符合率。结果 HCV核心抗原阳性91例，符合率92.85%；抗-HCV阳性79例，符合率80.61%；HCV核心抗原与抗-HCV的HCVRNA符合率比较P<0.05有统计学意义。结论 通过本组数据观察分析HCV核心抗原检测与HCVRNA符合率92.85%，说明了HCV核心抗原检测技术反映了HCV复制的间接指标,预防窗口期感染，本方法简便、快捷、价廉,所需设备简单,可进行批量检测等优点。

【关键词】丙型肝炎;HCV;核心抗原;HCV RNA;抗-HCV;临床应用

丙型肝炎病毒(HCV)感染人体后,有将近一半的人会变为慢性肝炎^[1]，早期诊断仍是防止HCV 传播的有效手段。2001 年Ortho 公司推出了检测HCV 核心抗原(HCV-cAg)ELISA 试剂,通过大量临床考核评价,在抗-HCV阴性样本中,仍检出少量HCV-cAg 阳性病例,证明HCV-cAg 检出可比抗体早^[2]。为了进一步对HCV 核心抗原检测进行探讨，笔者对此进行了综合的检测比较，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料 收集2005年10月至2008年10月本院门诊和住院HCV 感染患者血清标本98 份。本组患者均经HCV RNA检测为阳性；98例患者男性50例，女性48例；急性丙型肝炎42例，慢性丙型肝炎56例。

1.2 试剂和仪器 抗-HCV试剂由厦门新创公司提供；HCV-cA g ELISA 试剂由湖南景达基因公司提供；HCV RT2PCR荧光定量试剂由上海科华公司提供。洗板机(ST236W)和酶标仪(ST2360)为上海科华实业有限公司生产PCR扩增仪(L igh t Cycler)。

1.3 方法

1.3.1 检测方法 HCV核心抗原测定：先加样品处理液对样品进行预处理30 min,将抗原抗体复合物中的结合抗原游离,采用ELISA技术,利用包被在酶标板固相载体上的单克隆抗体捕获,待测样本中的HCV抗原,然后加入与包被抗体识别不同抗原表位的酶标记的不同株单克隆抗体检测。利用Bio-TekELX800酶标仪,在450 nm 波长进行比色,测定各孔的OD值。临界值(CO)=阴性对照平均值+0.06,低于临界值为阴性,高于临界值为阳性抗-HCV抗体检测:采用间接ELI SA方法检测血清或血浆中丙型肝炎病毒的抗体。在微孔中预包被基因表达HCV抗原,与样品中的抗-HCV抗体反应,再加入HRP标记的羊抗人-IgG酶标抗体与之结合,然后加入底物TMB作用显色。利用Bio-Tek ELX800于450 nm波长下进行比色,测各孔OD值,临界值(CO)=阴性对照均值×2.8,样品OD值/CO≥1为阳性,样品OD值/CO<1为阴性。

1.3.2 观察内容 本组病例均经HCV RNA检测为阳性，再进行抗-HCV、HCV-cA g检测了解检测结果及符合率:(指相同项目不同方法均为异常或均为正常的样本比率之和。)

1.3.3 统计学方法 采用χ²检验。组间采用t检验。

2 结果

3 讨论

丙肝可以通过输血、静脉吸毒、密切接触等途径传播,而输血和注射是我国丙型肝炎重要的传播途径，目前的常用的检测方法，抗-HCV 抗体检测进行筛查和疾病的诊断,使输血后丙型肝炎的发生率大大降低^[3]，应用抗-HCV ELISA法还存在的一大缺陷是“窗口期”长,约为50 d左右,仍有漏检现象,抗-HCV 检测试剂盒无法检出^[4]还不能完全预防输血后HCV 感染的发生。

HCV RNA,被视为HCV 病毒复制的直接标志,可以缩短感染后血清阳转前的检测窗口期,以实现HCV 感染的早期诊断。PCR 法检测的影响因素较多,在样本收集、储存和检测方面都有严格的要求。而且要求昂贵精密的仪器、较高的实验技艺,试剂也比较昂贵,又容易出现交叉污染导致假阳性结果,使得PCR 技术的推广受到了极大的限制。

2001 年Ortho 公司推出了检测HCV 核心抗原(HCV-cAg)ELISA试剂临床考核证明HCV-cA g检出可比抗-HCV平均约早23~46 d^[5],通过本组数据观察分析HCV核心抗原检测与HCV RNA符合率92.85%，说明了HCV核心抗原检测技术反映了HCV复制的间接指标,预防窗口期感染，本方法简便、快捷、价廉,所需设备简单,可进行批量检测等优点。

参 考 文 献

［1］ 朱忠政,丛文铭.乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒在肝癌发生中的作用研究进展.中华肝脏病杂志,2003,11(9):5741.

［2］ Widell A,Molnegren V,Pieksma F,et al.Detection of hepatitis C coreantigen in serumor plasma as a marker of hepatitis C viraemia in the sero-logical window2phase.Transfusion Med,2002,12(2)107.

［3］ 潘卫,方芳.抗-HCV阴性献血员中丙型肝炎病毒RNA检测及序列分析.中国病毒学,1997,12(1):39-42.

［4］ 陈锋,江训良,邓兰军.1 203例泌尿生殖道衣原体和支原体感染检测及药敏分析.实用预防医学,2006,14(1):194-1961.

［5］ W idellA,Mo lnegren V,P iek sma F,et al.Detection of hepatitisC co re antigen in serum o r p lasma as a marker of hepatitis Cviraem ia in the sero logical w indow phase.T ransfusion M ed,2002,12(2):107-113.