如何提高冰冻病理切片技术探讨

侯丽欣

[摘要]目的：探讨如何提高冷冻切片技术的常见问题及处理方法。方法：按切片完整性、平整度、染色等指标进行冷冻切片观察并评价。结果：切片存在不完整，染色差，切片脱落，切片卷缩等问题。结论：预防冷冻切片中各种常见问题的出现，提高冷冻切片水平，可更好地发挥冷冻切片技术在病理诊断中的作用。

[关键词]冰冻病理切片；质量；处理方法

[中图分类号]R361+.1

[文献标识码1 B

[文章编号]1674-4721(2009)04(b)-073-02

冷冻切片是一项特殊的病理制片技术，冷冻切片的质量直接关系到手术中能否迅速作出正确的病理诊断。采用SHANDON.As620型冷冻机。它的速冻装置可以在几分钟之内下降至-50～-60℃之间，不仅缩短了制作时间，而且可以有效地保证良好的切片质量，从而提高了病理诊断的准确率。笔者从数千例的恒冷切片制作中.总结了一些影响冷冻切片质量的因素及处理方法。现介绍如下：

1操作方法

1.1取材

组织必须新鲜，尽可能不经水洗。取材时应避免组织挤压，防止人为假象，给诊断造成困难甚至误诊。组织块厚度应为2.5～3.5mm，并除去周围多余组织或脂肪，避开骨组织、钙化组织与线头，以免给切片造成困难，影响切片质量。不同的组织取材厚薄不一。如致密结缔组织和脂肪组织等要取薄一些；如较脆的组织，如肝、脑、淋巴结、肾、脾等要适当取厚一点。将取好的组织置于冷冻头上迅速放入-25℃冷冻机内的冷冻台上。

1.2温度设定

一般调至-18～-22℃。根据组织性质不同，冷冻温度的选择各异：脂肪组织或含有脂肪组织、乳腺肿块组织则以-25～-30℃为宜；实质性肿块组织温度适中-18～-22℃：淋巴结、肝、脑、肾、脾等组织温度要偏高，一般-16～-20℃。组织速冻时间一般以2～3min为宜。

1.3切片

冷冻切片与常规切片一样，刀角度的调节与防卷板的正确调整，是切制优良的冷冻切片最重要的因素，它直接影响切片的质量。SHANDON.As620型冷冻切片机刀座调整倾斜度范围小，主要是靠样品头方位变化来选择角度，调至所需角度后固定，不要轻易改变，否则影响切片速度和质量。

1.4固定

固定液的选择至关重要。它是制片染色的主要环节之一。笔者采用甲醇70ml+无水乙醇20ml+冰醋酸10ml的混合液，固定效果理想，固定时间以30s为宜。

1.5染色

将切好的切片放入固定液→取出稍干，加入二甲苯(透明)→无水乙醇(脱水)→95％乙醇→80％乙醇→苏木素(加温30～60 s)→水洗→1％盐酸酒精分化(10-20s)→水洗→兰化(加温)→伊红→80％乙醇→05％乙醇→05％乙醇→无水乙醇(脱水)→二甲苯透明→中性树胶封固。整个过程约10min，染色结果细胞结构清晰，色彩对比度鲜明。

2影响切片质量的原因及改进方法

2.1组织切片出现皲裂、破碎，组织块易脱落，切片出现冰晶和空隙

主要是冷冻速度不够快捷，组织取材太厚。切片时组织温度太低，动作力度过大等因素造成。因此组织取材要适中，为避免组织脱落，取好的组织底部及周围要及时入放适量的OCT，然后迅速放入冷冻机内。OCT不宜过多，否则会影响速冻时间而产生冰晶。为了防止组织脱落，达到速冻效果，有效降低冰晶的产生，对不同组织冷冻温度的选择各异：脂肪组织或含有脂肪组织、乳腺肿块，温度要偏低-25～-30℃：实质性肿块组织温度适中-18～-22℃；淋巴结、肝、脑、肾、脾等组织温度要偏高-16～-20℃。切片时操作要熟练，动作要轻柔。

2.2切片卷曲、折迭、垂直裂开、变窄或厚薄不均，或前进时不能切

主要与刀座的固定，刀的角度和防卷板的距离等因素有关。切片时要检查刀座和防卷板的螺丝是否紧固、刀的角度是否一致、组织是否稳固在标本座上，检查防卷板和刀之间的距离、提高防卷板的高度和调整防卷板与刀之间的角度。切片时要缓慢，不能太快，要保持刀的锋利和清洁，防止切片厚薄不均和变窄。正确的方法：操作要熟练，切片时进刀要缓慢，修平组织，暴露最大切面，然后把防卷板调至恰好与刀刃平行，使切片能顺利通过，从而达到连续切片，选最佳片附贴在载玻片上，贴片时载玻片不能压印在组织上，让组织片一端吸附后缓缓向下移，使片子附贴得更平整，达到无皱褶，无重叠。

2.3切片时组织溶化，粘贴防卷板上

这是因为防卷板含有残留油脂和冷冻温度不够。应用短毛刷清洁防卷板，并且加长冷冻时间。除切片因素外，组织固定也很重要，使用甲醇和乙醇，虽然渗透力强，固定迅速，不易脱片，但由于乙醇收缩力强，渗透不彻底，且有硬化作用，故加上冰醋酸能起到轻度膨胀、软化和均匀作用，并使细胞结构着色清晰，核染色对比度鲜明，起到互补作用，使组织达到更理想的固定和染色效果。

制作一张优良的切片是病理技术的永恒主题，是每位病理技术人员不懈的追求。制作一张优良的切片必须一环扣一环，环环要认真。影响切片质量的因素很多，包括取材、切片、固定、染色，而切片过程尤为重要。只有不断地探索和追求，才能不断提高切片质量。