关格片中盐酸小檗碱的含量测定

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(长春中医药大学 药学院，吉林 长春 130117)

关格片是由苍术、砂仁、冬虫夏草、黄连、石韦等9味中药组成的复方制剂。具有降浊祛湿，温补脾肾的功效。用于治疗慢性肾功能衰竭，属于湿浊型者。症见肢体困重，食少纳呆，恶心呕吐，倦怠无力，腰酸膝软，脘腹胀满，口中黏腻，腰部冷痛，大便不实，舌苔厚腻，脉象沉细[1]。本品处方中主药黄连，其有效成分盐酸小檗碱含量的高效液相测定方法明确，且选定条件下精密度高、重现性好，所以选择以黄连中的有效成分盐酸小檗碱为含量测定指标是合理的。

1 仪器与试药

日本岛津-高效液相色谱仪，SPD-10Avp，浙大N 2000色谱数据工作站。盐酸小檗碱化学对照品(由中国药品生物制品检定所提供，批号：110805-200306，规格：供含量测定)。所用试剂均为色谱纯和分析纯。

2 蛇床子素含量测定

2.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品5 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 供试品溶液的制备[2]取本品10片，除去包衣，研细，取约0.6 g，精密称定，置125 mL磨口具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-盐酸(100∶1)溶液50 mL，称定重量，超声(功率150 W，频率40 kHz)处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇-盐酸(100∶1)溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3 阴性对照品溶液的制备 取不含黄连的处方，按制备工艺制成缺黄连的阴性对照品，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

2.4 色谱条件[3]色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(150 mm×4.6 mm)的色谱柱；流动相：乙腈-0.05 mol/mL磷酸二氢钠溶液(磷酸试液调节pH值至3.0)(27：73)为流动相检测波长：346 nm；流速：0.8 mL/min；柱温：25℃；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3 000。

2.5 线性关系考察 精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液2，5，10，15，20 μL，分别注入液相色谱仪，以进样量(μL)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，并绘制标准曲线，Y=1 843 459.405 X=45 289.676 2，r=0.999 6，盐酸小檗碱线性范围为0.199 8～1.998 mg。

2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液盐酸小檗碱10 μL，注入液相色谱仪，连续进样5次，依法测定，结果RSD分别为0.70%，表明仪器的精密度良好。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，进样10 μL，分别在0，1，4，8，12 h测定，结果所得5个数据的RSD为2.37%，表明盐酸小檗碱在供试品溶液中12 h内稳定。

2.8 重现性试验 取同一批样品共5份，按供试品溶液项下制备，依法独立测定，结果RSD分别为1.17%，表明该方法重现性良好。

2.9 回收率试验 取同一批样品(盐酸小檗碱6.664 28 mg/g)，共5份，分别精密加入对照品盐酸小檗碱适量，按供试品溶液的制备方法制成检测溶液，并依法测定，结果平均回收率为97.62%，RSD为0.84%，表明方法准确性较好，方法可行。

2.10 样品测定 取3批样品，每批2份，测定样品中盐酸小檗碱含量，结果3批样品中盐酸小檗碱的含量(mg/g)分别为6.388 9，6.720 2，7.418 75。

3 讨论

根据盐酸小檗碱的紫外吸收图及空白实验，选择测定波长为346 nm。含量测定在选择流动相的过程中，曾选择乙腈-0.05 mol/mL(磷酸二氢钠溶液(磷酸试液调节pH值至3.0)(30∶70)、乙腈-0.05 mol/mL磷酸二氢钠溶液(磷酸试液调节pH值至3.0)(28∶72)为流动相，但分离度均不佳；在上述流动相基础上，以乙腈-0.05 mol/mL磷酸二氢钠溶液(磷酸试液调节pH值至3.0)(27：73)为流动相，结果供试品分离效果较好，盐酸小檗碱峰与其它峰达到了良好的分离度(R>1.5)。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社,2005:213-214.

[2]郑虎占.中药现代研究与应用[M].北京:学苑出版社,2003:3979-4043.

[3]宋立人.现代中药学大辞典[M].北京:人民卫生出版社,2001:1715-1723.