沂州木瓜外植体灭菌技术研究

王梅 姜峰 陈火星

（1.济源市农业科学研究所，河南济源，454650；2.山东费县农业局；3.济源市公路局）

沂州木瓜外植体灭菌技术研究

王梅1姜峰2陈火星3

（1.济源市农业科学研究所，河南济源，454650；2.山东费县农业局；3.济源市公路局）

利用沂州木瓜新长出10 d左右的嫩茎，采用不同消毒剂、灭菌时间对沂州木瓜进行初代培养试验，结果表明，沂州木瓜外植体的消毒在75%酒精10 s和0.1%升汞1.5 min的条件下效果最佳。

沂州木瓜 外植体 组织培养

木瓜栽培已有2 000多年的历史，沂州木瓜为我国北方木瓜中别具特色的可食性珍品。沂州木瓜适应性强，病虫害少，耐粗放管理，极具观赏价值，是园林绿化的理想树种[1]，也是我国特有的珍稀水果之一，有很高的食用价值和药用价值。沂州木瓜常规繁育主要采用播种、扦插和嫁接[2～5]，繁育速度较慢，为了加快该优良品种的推广进程，研究沂州木瓜的快繁技术具有重要意义。由于沂州木瓜获得无菌培养物有一定难度，所以本试验利用沂州木瓜嫩茎作为外植体进行组织培养，从而筛选出沂洲木瓜微体快繁的最佳灭菌时间及消毒剂，总结沂洲木瓜的外植体技术，以期为加快发展沂州木瓜组织培养奠定基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

沂州木瓜来源于河南省济源市农业科学研究所。

1.2 试验方法

①沂州木瓜外植体不同消毒剂试验 将沂州木瓜新长出10 d左右的嫩茎去掉叶片，置于小烧杯中用流水冲洗20 min，然后在无菌室的超净工作台上用75%酒精漂洗10 s，再分别用0.1%升汞消毒液浸泡7 min，15%次氯酸钙，10%溴水消毒；共3个处理，每处理3次重复。

②不同消毒剂消毒时间试验 将沂州木瓜新长出10 d左右的嫩茎去掉叶片，置于小烧杯中用流水冲洗20 min，然后在无菌室的超净工作台上用75%酒精漂洗10 s，再分别用0.1%升汞消毒液浸泡6，5，2，1.5，1 min；共5个处理，每处理3次重复。

1.3 培养条件

培养温度为（25±2）℃，日光灯照射时间12 h/d左右，光照强度为2 000 lx左右。

2 结果与分析

2.1 沂州木瓜外植体不同消毒剂的使用效果

外植体的消毒在组织培养中是十分重要的，是建立无菌培养的第一步，不同植物，甚至同一株植物不同部位的组织带菌种类和程度都不同，它们对不同种类、不同浓度消毒剂的敏感度也不一样。消毒剂的使用既要把材料上的病菌杀灭，又要易被蒸馏水冲洗掉或自行分解，而且不会损伤或轻微损伤组织，影响其生长。

将沂州木瓜新长出嫩茎去掉叶片，流水冲洗20 min，然后用3种消毒剂进行处理，效果见表1。从表1可以看出，这3种消毒剂效果都不是很好，75%酒精10 s，0.1%升汞7 min无污染现象，但将沂州木瓜新长出嫩茎全部杀死，说明虽然0.1%升汞消毒效果好，但是对植物体的毒害性比较大，这与王利民等[6]研究结果相似，说明灭菌时间过长。在多种植物组织培养过程中，都可以用0.1%升汞来消毒，且效果较好，但消毒时间要适当控制。用次氯酸钙、溴水消毒虽然有一定的成活率，但污染率较高，分别达56.7%和76.7%。

2.2 不同消毒时间对外植体灭菌效果的影响

由表2可以看出，对外植体采用常规灭菌措施时，在用75%酒精漂洗10 s基础上，再用0.1%升汞处理6 min，虽然污染率仅有3.8%，但是材料褐化严重，外植体萌发成活率仅为6.7%，80%以上外植体被升汞杀死。0.1%升汞处理5 min，污染较小，材料没有褐化的情况，但成活率仅为52.5%。0.1%升汞处理2 min，污染较小，材料没有褐化的情况，成活率为55.0%。0.1%升汞处理1.5 min，污染稍大，但材料没有褐化的情况，且成活率为59.5%。0.1%升汞处理1 min，虽然没有褐化的情况但污染较严重，成活率不高。因此对木瓜外植体的灭菌处理在用75%酒精漂洗10 s的基础上，应选择0.1%升汞处理1.5 min，效果较好。其次为0.1%升汞处理2 min。

成活率随着HgCl2处理时间的增加而先增加后降低，表明过长时间的HgCl2接触会损伤外植体[7]。因此对沂州木瓜外植体的处理比其他植物更难掌握，时间太短，污染难以控制；时间太长，对组织产生毒害导致芽的萌发困难。本试验结果表明，外植体萌发采用75%酒精处理10 s，再用0.1%升汞1.5 min

3 小结与讨论

对于从田间直接采取的沂州木瓜外植体，由于携带大量的微生物，在进行组织培养时，如何成功的对其灭菌，是进行后续研究的前提[8]。同时由于茎段比较幼嫩，在灭菌过程中极易被灭菌剂损伤，造成外植体无法萌发。为了保证成功地进行培养，在筛选最佳灭菌措施时，不仅要考虑无污染率，更应考虑灭菌后材料的萌发率[9]。既要保证较低的污染率，又要得到较低的褐变率。另外，污染率不但与消毒时间有关，而且和操作过程中的每个环节及外植体的带菌程度、外植体结构等因素都有关；而褐变率也不只是与消毒时间有关，也与外植体基因型、幼嫩程度、残留消毒液多少等因素有关，因此，在实际应用中，可根据外植体幼嫩程度，适当延长或缩短消毒时间。本试验中，沂州木瓜外植体的灭菌处理在75%酒精10 s基础上，选择0.1%升汞1.5 min，效果较好。的灭菌处理，可达到59.5%的成活率。

表1 几种消毒剂对沂州木瓜外植体的消毒效果

表2 0.1%升汞不同灭菌时间对外植体的灭菌效果

图1 0.1%升汞不同消毒时间对外植体污染率和成功率的影响

[1]管恩桦，王瑞良，张雷，等.适合园林绿化的果树品种——沂州木瓜[J].烟台果树，2008（2）：35-36.

[2]周根土.宣木瓜丰产栽培技术[J].经济林研究，2003，21（4）：85-86.

[3]刘大勇，于万俊，赵翠华，等.曹州木瓜早实丰产栽培技术[J].烟台果树，2003（1）：45.

[4]佟金红，许金兰，许国臣，等.木瓜引种栽培试验初报[J].河北林业科技，2003，2（4）：3-5.

[5]刘贵利，徐同印.皱皮木瓜的栽培技术[J].时珍国医国药2003，14（5）：319-320.

[6]王利民，周毅，陈龙友，等.植物组织培养中消毒剂的运用[J].贵州师范大学学报：自然科学版，2002，20（1）：15-17.

[7]赵贤慧，刘庆华，张德锋.红金银花组织培养外植体灭菌的研究[J].江苏林业科技，2007，34（1）：23-25.

[8]李群，杜文平.植物组织培养中控制污染技术研究[J].四川林业科技，1999，20（4）：22-26.

[9]王子成，李忠爱，邓秀新.柑橘成年态茎段外植体消毒方法研究[J].河南大学学报：自然科学版，2005，35（2）：57-60.

Studies on the Selection Technology of Yizhou Pawpaw Explants

WANG Mei1,JIANG Feng2,CHEN Huoxing3
(1.Jiyuan Institute of Agricultural Sciences,Jiyuan,Henan 454650;2.Shandong Fei County Bureau of Agriculture; 3.Jiyuan Highway Bureau)

The 10 d new buds of Yizhou pawpaw were used as the explants.These explants were cultured primarily with different disinfectors and different sterilizing time.The results showed that it was the best for the explants to treat with 75%alcohol for 10 s and 0.1%HgCl2for 1.5 min.

Pawpaw;Explant;Tissue culture

10.3865/j.issn.1001-3547.2009.24.006

王梅（1984-），研究实习员，主任，主要从事花卉苗木栽培技术及组织培养技术研究，电话：13838905692，0391-6609532。E-mail：wangmei6868@126.com

2009-11-03