春石斛兰组培关键技术研究

张 琼 曾燕楠 张宁宁 朱儆元 高年春

摘要:通过表面杀菌剂的筛选、无菌种子播种技术研究、增殖、壮苗生根培养基及炼苗基质的筛选,建立一套组培快繁春石斛兰的技术体系,实现工厂化生产的目标。

关键词:春石斛兰;组织培养;无菌播种;增殖;生根;壮苗;工厂化

中图分类号:S682.31文献标识码:ADOI编码:10.3969/j.issn.1006-6500.2009.05.022

Foundation of System on Tissue Culture of Dendrobium nobile

ZHANG Qiong, ZENG Yan-nan, ZHANG Ning-ning, ZHU Jing-yuan, GAO Nian-chun

(Nanjing Institute of Agricultural Sciences, Nanjing, Jiangsu 210046, China)

Abstract:Tissue culture techniques of Dendrobium were researched in this paper. Through filtrating surface antiseptic, In vitro rapid propagation and regeneration,filtrating the multiplication media and rooting media, the system for techniques tissue culture of Dendrobium nobile was set up.

Key words: Dendrobium nobile; tissue culture; multiplication; radication; factorys

春石斛兰(Dendrobiumnobile)是兰科石斛属植物。具有花朵密集繁茂,花形千姿百态,色彩艳丽丰富的特点。它的切花及盆栽优良品种在国际花卉市场上倍受青睐,成为人们装点居室、会议厅的精品,是一种正处于发展中的具有较高经济价值和观赏价值的花卉植物。国内市场上,一盆四拼组合的优质春石斛兰价格曾高达1 000元,国际市场上则更加昂贵,市场空间巨大。但常规的分株繁殖速度慢,满足不了市场需求,大大地限制了推广速度。采用组织培养及其快繁技术,建立一套经济高效的组培快繁体系,对解决春石斛兰种苗的供需矛盾具有重要意义。

1材料和方法

1.1供试材料

试验在南京市农业科学研究所组织培养中心进行,供试材料有从深圳蕙鑫科技有限公司引进的星光、友谊使者,南京市农业科学研究所具有自主知识产权的杂交品种春石斛1号及经过20 Gy辐照过的春石斛4号。以星光、友谊使者的茎头(见1.2.1)及春石斛1号、春石斛4号半成熟种子为外植体进行组培试验。

1.2方法

1.2.1茎头表面灭菌试验星光、友谊使者新萌发的嫩茎除去叶片,保留叶鞘,用洗洁精清洗浸泡10 min,再用软毛刷仔细清洗并流水冲洗30 min。分成5组,每组20个。以用75%酒精灭菌作对照,另外4组分别用75%酒精灭菌后再用0.1%升汞、0.2%升汞、10%的次氯酸钠和15%的次氯酸钠消毒,无菌水冲洗干净,剥取茎段接种到6-BA和NAA分别是3.0 mg/L和1.0mg/L的诱导培养基上。

1.2.2种子消毒试验取春石斛1号、春石斛4号的半成熟、未开裂种荚,先用75%的酒精进行表面消毒,再用0.2%的升汞杀菌10 min,无菌水冲洗干净,小心地撕开种荚,取出棉絮状的微型种子,摊开在加入激素的MS培养基上。在22～25℃, 1 000～2 000 lx的环境下培养50 d。以长成的丛芽为外植体进行组织培养。

1.2.3激素对组培苗的影响待诱导出的不定芽长到1 cm以上,切下接入添加不同配比激素的MS培养基中,6-BA和NAA浓度配比分别为0.5 mg/L ∶0.1 mg/L ,0.5 mg/L ∶0.2 mg/L,1.0 mg/L∶0.1 mg/L,2.0 mg/L∶0.2 mg/L,1.0 mg/L∶0.2 mg/L,2.0 mg/L∶0.1 mg/L。在22～25℃,光照1 000～2 000 lx的环境下培养。

1.2.4基本培养基的筛选本试验进行了基本培养基的筛选,将增殖苗接入不含激素的不同基本培养基MS、LS、R2、B5、N6中,筛选壮苗的基本培养基。

1.2.5生根试验待壮苗25 d后,丛生芽达到2 cm以上,转入生根培养基。选取健壮的增殖苗,从每株苗的基部分开,接入N6加不同浓度配比的IBA、IAA、NAA生根培养基中诱导生根。

1.2.6驯化炼苗试验石斛兰组培苗对环境条件要求较高,常规移栽成活率较低,因此,在移植之前必有一个炼苗过程。当生根苗长到4 cm以上时,即可开始出瓶炼苗。先将生根苗连瓶移到炼苗场,适应1 d之后打开瓶盖,10 d后出瓶。出瓶时要小心仔细,尽量减少根部损伤。选用了泥炭、水苔、珍珠岩、泥炭+珍珠岩和水苔+泥炭不同基质。

2结果与分析

2.1茎尖表面灭菌试验

不同杀菌剂和浓度对外植体杀菌效果见表1。结果表明,0.2%升汞杀菌8 min效果最好。

2.2激素对石斛兰增殖倍数和成苗率的影响

表2为生长素、细胞分裂素对石斛兰类生长的影响,及最佳配比。结果表明,6-BA和NAA浓度分别为0.5 mg/L 和0.2 mg/L的MS增殖培养基增殖效果最好,生长速度快,叶色浓绿,成苗率高。

2.3壮苗培养基的筛选试验

以MS为基本培养基的增殖培养基增殖快,叶色绿。但有一个很大的缺点,就是分枝太多,易倒伏,根系向上,苗向下长,很不容易成苗。所以,我们进行了基本培养基的筛选,结果如表3所示,N6基本培养基对石斛兰壮苗效果较好。

2.4生根试验

研究发现,IBA为0.5 mg/L的生根培养基生根量和生根率最高(表4)。当根系长至0.5 cm即可进入驯化练苗阶段。

2.5驯化炼苗试验

从表5中可以看出,水苔是石斛兰炼苗的最好基质。4个品种的石斛兰在水苔培养基中的成活率都远远超过其他基质。栽培之后的管理是保证组培苗移栽成功的关键,既要防病,又要控制好温、湿度及光照,稍有不慎就会造成很大损失。在管理过程中要格外注意水分的控制,开始几天不能浇水,以刺激根系的生长。接下来也不可大水漫灌,要用喷壶细心的慢慢喷,每天至少喷4次,雨天停止喷水。1个月后,种苗基本成活,新根系长出,抽出新叶才能浇水。

3小结

(1)石斛兰组培的难点是外植体增殖、无菌种子播种、生根壮苗和炼苗驯化,这些关键技术对于石斛兰苗的工厂化生产意义重大。外植体的增殖倍数的高低、原球茎的多少,都关系着能否以最快的速度,繁殖出优质的石斛兰种苗。无菌播种能够快速大量的繁殖来自同一枚种荚的种苗,有利于优良品种的快速扩繁。生根壮苗技术也是石斛兰组培的关键,如果生产的苗弱或者状态不佳,有可能造成全军覆没的严重后果。

(2)扩繁一定数量的石斛兰组培苗后,必须提高练苗成活率。石斛兰看似抗逆性强,几天不浇水也不会干死。但是一旦缺水就会停止生长,无法恢复。一次浇水过多,几天后就会发黄、烂根。因此,石斛兰的炼苗技术对管理者的管理水平要求很高,稍有不慎,就会使前期的工作白白付之东流。

(3)在幼苗期,要抹去基部多余的侧芽,留1~2个健壮的芽继续生长。每隔10 d要施肥1次。隔周喷药防病。只要管理精细,方法得当,石斛兰一定会茁壮成长,为我们创造很高的经济价值。

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