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气血康口服液质量标准研究

2009-01-25康绍建陈阳友杜利云杨文芬

云南中医中药杂志 2009年9期

康绍建 陈阳友 杜利云 杨文芬

摘要:目的:建立气血康口服液质量标准。方法:定性鉴别采用薄层色谱法;含量测定采用高效液相色谱法。结果:薄层色谱鉴别(1):原标准为人参皂苷Rg1的鉴别,新标准增加人参皂苷Rb1、三七皂苷R1及黄芪甲苷的鉴别,经验证未见干扰;薄层色谱鉴别(2)为新增项目,粉葛薄层色谱鉴别以葛根素为对照,经验证未见干扰;含量测定色谱条件:采用汉邦(4.6×250mm,5μm)G8色谱柱,流动相:乙腈—水(19:81);检测波长为203nm;柱温30℃流速1mL/min。人参皂苷Rg1进样量在0.678μg~10.17μg范围内有良好的线性关系;回归方程y=279.47x—27.716(r=1.000),人参皂苷Rg1的平均回收率为97.54%,RSD=2.37%。结论:薄层色谱鉴别和含量测定方法操作简便,准确,重现性好,可用于控制气血康口服液质量。

关键词:气血康口服液;薄层色谱鉴别;HPLC,

中图分类号:R286.0文献标识码:A

文章编号:1007—2349(2009)09—0061—03

气血康口服液(原名为复方三七口服液)具有抗衰老,扶正培本,益气强心,健脾固本,滋阴润燥,生津止咳;并有提高机体免疫力,升高白细胞和血色素的作用。原为提高国家药品标准行动计划品种,后确认为2010年版《中国药典》收载品种。根据国家药品标准提高行动计划任务表要求:鉴别:增加葛根、黄芪、人参、三七的TLC鉴别;含量测定:增加三七的含量测定;本次标准修订的薄层色谱鉴别、新增薄层色谱鉴别项及新增含量测定均符合要求,可作为质量控制指标。

1仪器与试药

高效液相色谱仪:岛津2010A,色谱柱:汉邦(4.6×250mm,5μm)C18色谱柱;液相溶剂用水为纯净水经0.45/μm微孔滤膜滤过,乙腈为色谱纯,其他均为分析纯;人参皂苷Rg1对照品(110703—200726)含量测定用,按97.7%计、人参皂苷Rb1对照品(110704—200420)、三七皂苷R1对照品(110745—200415))、黄芪甲苷对照品(0781—200109)、葛根素对照品(752—200108)均购于中国药品生物制品检定所;气血康口服液:由云南白药集团文山七花有限责任公司提供(批号:20080701、20080702、20080703);气血康口服液薄层色谱鉴别空白阴性试样(缺三七、人参;缺黄芪;缺葛根)和含量测定空白阴性试样(缺三七、人参):均由云南白药集团文山七花有限责任公司提供。

2实验方法及结果

2,1薄层色谱鉴别取本品20mL,置蒸发皿中,水浴蒸至近干,加乙醇25mL温浸,滤过,滤液蒸干,残渣加水25mL使溶解,移入分液漏斗中,用正丁醇提取3次,每次10mL(勿剧烈振摇以免乳化),合并正丁醇液,用水洗2次,每次10mL,弃去水液,加氨试液25mL振摇提取,弃去氨试液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液。同法制得缺三七、人参和缺黄芪的阴性对照样品;另取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1及黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取上述溶液各1~3μL,分别点于同一高效硅胶H薄层板上,以三氯甲烷—甲醇—水(13:7:2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。置紫外光灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。色谱图见图1~图2。

2,2薄层色谱鉴别取本品20mL,用乙酸乙酯提取3次,每次20mL,合并乙酸乙酯提取液置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为供试品溶液。同法制得缺葛根的阴性对照样品;另取葛根素对照品,加甲醇制成1mL含1,5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取上述溶液各1μL~3μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷—甲醇—水(7:2.5:0.25)为展开剂,展开,取出,晾干。置紫外光灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。色谱图见图3。

2,2气血康口服液的含量测定2,2,1系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:乙腈—水(19:81);检测波长:203nm;理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算,应不低于3000。2,2,2对照品溶液及供试品溶液的制备对照品溶液制备取人参皂苷Rg1对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含人参皂苷Rg1对照品0.7mg溶液,摇匀,即得。

供试品溶液制备取本品约30mL,混匀,滤过,精密量取10mL于分液漏斗中,用水饱和正丁醇10mL、10mL、10mL提取3次,合并正丁醇液,用氨试液5mL、5mL洗涤2次,收集正丁醇液水浴蒸干,残渣用适量甲醇溶解,转移至10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,即得。2,2,3测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,测定,即得。色谱图见图4和图5。2,2,3阴性对照试验阴性对照样品溶液的制备取处方中除三七、人参外的其他药味,按处方剂量及制法和工艺要求制备缺三七、人参阴性对照样品溶液。照试验所得方法进行测定,结果表明,在与人参皂苷Rg1对照品相同的保留时间位置,未见干扰峰出现,表明处方中其他药材和辅料对人参皂苷Rg1的测定无干扰。与供试品溶液对照,未见明显峰缺失。见液相色谱图6。2,2,4线性关系考察

精密称取人参皂苷Ra对照品6,78mg,置10mL量瓶中,加流动相溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,吸取对照品溶液1、2、5、10、15μl进样按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值(mAuXs)为纵坐标,进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线,计算回归方程:y=279.47x一27.716,r=1。结果表明人参皂苷Rg1进样量在0.678μg~10.17μg范围内有良好的线性关系。符合要求。2,2,5精密度试验精密吸取人参皂苷Rg1对照品溶液(0.6829mg/mL)各10μL,按试验所得方法重复进样5次,测

定峰面积值。各次测得的峰面积值分别是2683159、2682968、2686880、2641316、2639333,平均值为2666731,RSD为0.91%,符合要求。2,2,6重复性试验取批号为20080701的气血康口服液6份,按试验所得方法试验,测得样品峰面积并计算含量,试验结果表明:RSD为0.72%,符合要求。2,2,7稳定性试验取对照品溶液及供试品溶液,分别于0、1、2、4、6、8h测定6次,以峰面积计算RSD值,对照品溶液峰面积RSD为1.81%,供试品溶液峰面积RSD为1.82%;结果表明对照品及供试品溶液在8h内稳定。2,2,8加样回收率试验采取全程加样法。取已知含量的供试品(批号:20080701,人参皂苷Ra含量0.6267mg/mL)6份,每份5mL,精密加入人参皂苷Rg1对照品溶液(0.5082mg/mL)各5mL,按试验所得方法试验,试验结果表明,本方法回收率在95%~105%之间,平均回收率为97.54%,RSD为2.37%,符合要求。2,2,9样品含量测定取气血康口服液3批样品,按试验所得方法试验,测定人参皂苷Rg1含量,每批3次。结果见表1。

3讨论

原部颁标准中药成方制剂第十三册WS3--B--2573--97中无[含量测定]项,根据气血康口服液的处方,选择方中的三七、人参中的有效成分人参皂苷Rg1为含量测定指标。最初拟选择三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1作为含量测定指标成分,通过试验发现,在15cm C18柱上,用乙腈一水的不同梯度洗脱均难以使这几种成分完全分离;在25cm C18柱上,用乙腈—水(0--35min,19:81;35—55min,29:71;55--70min,29:71;70—100min,40:60)梯度洗脱可以将几种成分分开,但人参皂Rb1:出峰时间在80min右左,这样不适用大生产中--产品质量控制,且处方中三七、人参、黄芪均含类似物质,测定时相互干扰大,供试品溶液中三七皂苷R1、人参皂苷Re含量低,若作控制产品质量的指标也起不了太大的现实意义。因此结合以上这些实际情况,最终放弃进行多组分测定,选择耗时短、分离较好的人参皂苷Rg,为气血康口服液含量测定指标性成分。对气血康口服液中人参皂苷Rg1含量测定的分析方法验证结果表明,该测定方法简便、准确、可行。