酶免法和胶体金法对丙肝抗体的检测结果比较分析

【摘要】目的：对比酶联免疫吸附法（酶免法）和胶体金法检测丙肝抗体的价值。方法：选择2023年8月—2023年12月919例参与检验的病例，对研究对象进行血液样本采集。对所采集的血样均分别进行酶免法检测和胶体金法检测，以丙肝病毒核酸检测结果为诊断的金标准，比较不同检测方式对丙肝抗体的阳性检出情况，此外比较不同检测方式的检测时间及重复采样情况。结果：金标准证实其中20份为阳性，阳性率为2.18%。酶免法与胶体金法的阳性检出率分别为95.00%与90.00%，对比差异无统计学意义（P>0.05）。胶体金法的检测时间为（8.84±1.21）min，明显短于酶免法的（31.15±4.26）min，差异有统计学意义（P<0.05）；胶体金法重复采样率为0.76%，低于酶免法的2.50%，对比差异有统计学意义（P<0.05）。结论：对于丙肝抗体检测，应用酶免法与胶体金法的阳性检出率均较高，但胶体金法的检测速度快，重复采样率低，因此可作为大规模筛查丙肝的首选方法。

【关键词】丙肝抗体；酶免法；胶体金法

Comparative analysis of enzyme immunoassay and colloidal gold method for detecting hepatitis C antibodies

WANG Shanshan， MA Yanwei

Department of Laboratory Medicine，Beilin District Disease Prevention Center， Xi’an City， Xi’an， Shaanxi 710001， China

【Abstract】Objective：To compare the value of enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and colloidal gold method in detecting hepatitis C antibodies.Methods：919 test cases were selected from August2023 to December 2023，and blood samples were collected from the study subjects.For the collected blood samples，enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） and colloidal gold method were used for detection.The results of hepatitis C virus nucleic acid testing were used as the gold standard for diagnosis to compare the positive detection of hepatitis C antibodies using different detection methods.In addition，the detection time and repeated sampling of different detection methods were compared.Results：The gold standard confirmed that 20 of them were positive，with a positive rate of 2.18%.The positive detection rates of enzyme-linked immunosorbent assay and colloidal gold assay were 95.00% and 90.00%，respectively，and there was no statistically significant difference in the comparison （P>0.05）.The detection time of colloidal gold method was （8.84±1.21） min，which was significantly shorter than （31.15±4.26） min of enzyme immunoassay method，and the difference was statistically significant （P<0.05）；The repeated sampling rate of colloidal gold method was 0.76%，which was lower than 2.50% of enzyme immunoassay method，and the difference was statistically significant （P<0.05）.Conclusion：For the detection of hepatitis C antibodies，both enzyme immunoassay and colloidal gold method have high positive detection rates.However，colloidal gold method has a fast detection speed and low repeat sampling rate，making it the preferred method for large-scale screening of hepatitis C.

【Key Words】Hepatitis C antibody； Enzyme immunoassay； Colloidal gold method

丙肝是一种因感染丙型肝炎病毒（HCV）导致的以肝脏损害为主的传染病，急性期的症状较轻，一般为疲乏、食欲减退、恶心等，早期检出率较低。而较高比例的患者可持续转变为慢性肝炎，并且还有一定概率进展为肝硬化以及肝癌[1]。随着生活水平的提高，人们对自身健康体检的重视度提高，此外，基于对传染病的预防干预，对丙肝的筛查也成为体检的重要项目。在丙肝的诊断中，检测丙肝抗体是重要的方式，而抗体的检测方法中，酶联免疫吸附法（酶免法）和胶体金法是两种常见方式[2]。酶免法通过使用特殊的酶标示剂来放大抗原抗体反应的信号，从而提高检测的灵敏度和特异性，该方式具有方便、灵敏等优点[3]。胶体金法则利用胶体金颗粒的特殊光学性质，将抗体或抗原标记在胶体金颗粒上，通过抗原抗体反应形成的复合物在检测样本中产生颜色变化，从而实现对目标物质的定性或定量检测，该方法具有操作简便、结果直观、敏感性高等优点，特别适用于大规模筛查和现场检 测[4]。针对丙肝抗体的检测，不同方式的应用效果存在争议，本次研究共纳入919份待检标本，对比分别采取酶免法和胶体金法的检测结果差异，以供参考借鉴，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2023年8月—2023年12月919例参与检验的病例，采集其血液标本进行检查。患者一般资料如下：男512例，女407例；年龄22～71岁，平均年龄（48.12±3.46）岁。纳入标准：患者均在前次检查未检出丙肝抗体；具有良好的意识及沟通交流能力。排除标准：合并肝肾等严重功能损伤者；恶性肿瘤、血液疾病或自身免疫疾病者；精神疾病及认知障碍者。

1.2 方法

患者的样本采集，均是安排专业采血人员按照规范及无菌原则采血。主要是经静脉途径采集4mL血液样本，置于真空采血管中。将采集的样本及时送至实验室进行检验，检验前血样置入离心机以3000r/min速度持续离心10min分离血清，分离后立即检测，检测完成后将剩余血清分离，置于-20℃冰箱保存。

酶免法：检测方式应用来源上海科华生物工程股份有限公司提供的ELISA检测试剂盒。室温下将试剂静置30min取出板条同时设置对照孔，其中阴性2孔、阳性2孔（分别加入100uL阴阳性对照），空白1孔。按微孔板的顺序，分别进行试剂样品编号，将100uL的样本稀释液加入相应微孔内，取10uL的待测样本血清加入至各孔混匀后进行封板，在37℃环境中持续温育60min，在取出后借助洗板机持续清洗5遍。各孔均加100uL酶结合物混匀，封板，37℃温育30min，取出后以洗板机持续清洗5遍。将显色剂A、B液各50uL加入至各孔混合均匀，在37℃避光环境下显色30min，各孔同时加50uL终止液混合均匀，酶标仪波长450/630nm，获得各孔的OD值。阳性标准：OD值/临界值≥1.0。

胶体金法：检测试剂由英科新创（厦门）科技股份有限公司提供，加入分离出的血清10uL滴加至加样处，滴加2滴（约100uL）样本稀释液稀释，稀释15min后观察检测线、对照线显色情况。检测线、对照线分别出现红色条带视为阳性；测试区无红色条带，仅对照区出现红色条带视为阴性；对照线未出现红色条带则说明试剂失效并需重新检测。

1.3 观察指标

阳性检出率。以丙肝病毒核酸检测结果为诊断的金标准，对比不同方式检测丙肝抗体阳性情况。阳性率=阳性例数/标本数量×100%。（2）检测时间和重复采样。对比不同方式检测花费的时间，统计不同方法需要重复采样检测的例数。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析。计数资料采用（%）表示，进行x2检验，计量资料采用（x±s）表示，进行t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同检测方式阳性检出率比较

金标准方式，对于919份样本，检出阳性样本20份，检出率为2.18%。对于丙肝抗体检出情况，酶免法与胶体金法的阳性检出率较高，对比差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

2.2 不同检测方式检测时间和重复采样比较

胶体金法检测时间短于酶免法，重复采样率低于酶免法，对比差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

3 讨论

丙肝是传染性疾病，人群中普遍易感，感染的人群通常早期无典型症状，并且很多感染者也可经体内抗丙肝病毒抗体清除感染源预防疾病。而病毒感染后引起丙肝者，疾病持续进展则可引起慢性肝炎甚至肝癌，这种比例也很高。根据世界卫生组织（WHO）的统计结果显示，2015年全球大约7100万人受丙肝病毒感染，且大量慢性感染者可出现肝硬化或者肝癌，而每年死于丙肝及相关肝硬化、肝癌死亡的人数在40万以上[5]。基于丙肝的高流行性情况，做好疾病预防工作具有重要意义，而具体预防方式上，进行实验室检查是主要的方案。

丙肝抗体检测是用于筛查和诊断丙肝的重要检测方法，通过检测丙肝抗体能够帮助确定一个人是否曾经感染过HCV。检测的血液中是否存在针对HCV的抗体。如果结果是阳性，说明曾经感染过HCV，但并不一定意味着目前仍然有活跃的病毒感染。而如果抗体检测结果为阳性，通常需要进一步的检测，丙肝病毒核酸检测，通过进一步的检测以确定是否存在持续的病毒感染，这样可以评估感染是急性还是慢性的，以及病毒的量和类型[6]。对检测及筛查的结果分析，使得传染病防控工作人员也能够更好地了解丙肝的流行情况，有助于制定有效的公共卫生策略和预防措施。而在对丙肝抗体的检测方法上，常用的检测方式主要包括酶免法和胶体金法两种。在丙肝抗体酶免法测定中，首先将丙型肝炎病毒抗原固定在固相载体上，然后将待测样本中的抗体与固定抗原结合。接着加入酶标示剂，使其与结合在固相载体上的抗体结合。最后加入酶的底物，样本中的抗体如果与固定抗原结合，就会催化底物发生化学反应，产生颜色或荧光。通过观察颜色或荧光的强度，可以判断样本中是否存在丙型肝炎病毒抗体[7]。丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒（胶体金法）是专门用于检测人体内的丙型肝炎病毒抗体的诊断工具。该试剂盒基于胶体金技术的原理，通过特定的抗原与抗体反应，实现对丙型肝炎病毒感染的快速、可视化检测。胶体金法在医疗卫生领域具有广泛的应用价值，可用于医院、诊所、实验室等场所，为医生提供快速、准确的诊断依据，同时也可用于大规模人群筛查，有助于控制丙型肝炎病毒的传播[7]。

本次研究中，对比两种检测方式丙肝抗体阳性检出率，不同检测方法的检出率对比无差异，说明酶免法和胶体金法阳性检出率均较高，检出率基本一致。而在检测时间上，胶体金法时间更短，且胶体金法检测重复采样例数更少。这说明胶体金法用于丙肝抗体的检测，检测方式所需时间短，检测方式根据显色的情况判定结果阳性或阴性，相比酶联法得出结果的时间更短，这样对于大规模丙肝筛查更有利，因为每例样本检测时间短，能够在短时间获得具体结果，为丙肝的进一步识别提供参考。而胶体金法较少的重复采样例数，也可以避免反复采样给筛查人员带来的困扰，使得检验人员的满意度得到提高，这样也为大规模的筛查丙肝提供重要帮助，实现对丙肝的有效防范干预。

综上所述，在对丙肝疾病的诊断上，采取酶免法与胶体金法进行丙肝抗体的检测，两种方式对丙肝抗体的阳性检出率均较高，但相比之下，应用胶体金法检测花费时间更短，且重复采样情况也更少，因此若是需进行丙肝大规模筛查，可选择胶体金法作为首选检测方式。

参考文献

[1] 魏利霞.酶免法和胶体金法检测丙肝抗体的结果比较[J].现代医用影像学，2018，27（4）：1350，1354.

[2] 高源.ELISA与GICA在丙肝病毒抗体检测中的对比[J].中国保健营养，2019，13（15）：374.

[3] 武国超.分析化学发光法和酶联免疫法在丙肝病毒抗体检测中的价值[J].中国医疗器械信息，2021，27（11）：155-156.

[4] 张良，杨蕊.ELISA实验中微量加样量对检测丙肝抗体的影响研究[J].基层医学论坛，2019，23（16）：94-95.

[5] 陈剑锋，常乐，刘虹，等.两种化学发光免疫分析试剂用于血液筛查丙肝抗体的检测性能评价[J].中国输血杂志，2021，34（2）：123-127.

[6] 靳秀英.酶联免疫吸附试验法检测丙肝抗体联合丙肝核心抗原在丙型肝炎诊断中的作用[J].中国药物与临床，2020，20（1）：131-132.

[7] 崔莉，梁亦洁.酶免法和胶体金法检测丙肝抗体的结果比较[J].糖尿病天地，2019，16（7）：116-117.