粤西卷羽鸡与贵妃鸡禽白血病感染情况调查与防控建议

摘要：为掌握信宜市粤西卷羽鸡与贵妃鸡保种场禽白血病的感染情况，本试验于2023年8—11月份，采用ELISA检测方法对采自保种场的粤西卷羽鸡2 223份蛋清，191份全血与贵妃鸡3 284份蛋清，225份全血进行检测，结果显示，粤西卷羽鸡的禽白血病阳性率为8.4%，贵妃鸡的阳性率为2.7%。从检测数据可知，粤西卷羽鸡与贵妃鸡保种场的禽白血病阳性率较高，要及时剔除阳性个体，进一步加强该病的淘汰净化根除工作，有效控制疫病蔓延[1]。

关键词：信宜地区；粤西卷羽鸡；贵妃鸡；酶联免疫吸附；淘汰净化；防疫建议

禽白血病（avian leukosis）是由禽 C 型反转录病毒群中的病毒引起的禽类多种肿瘤性疾病的统称，在自然情况下以淋巴白血病最为常见，是致鸡肿瘤的主要疾病，对养鸡业危害巨大。根据病毒囊膜糖蛋白抗原差异[2]，禽白血病病毒（ALV）被分为 A、B、C、D、E、和 J等亚群。禽白血病病毒可通过垂直传播又可水平传播，它可引起患病鸡生长受阻、免疫抑制[3]，或混合感染其他病毒性或细菌性疾病而导致大批禽只死亡，给养殖户带来较大的经济损失。

由于禽白血病病毒的复杂性、亚群多样性及病毒基因组的高变异性，禽白血病造成机体免疫抑制或免疫耐受的分子机制仍未明确，至今也没有控制其感染的有效药物及疫苗，目前主要依靠种群净化加以控制[4]。

为了解信宜地区卷羽鸡及贵妃鸡带毒情况，本试验采用北京明日达科技有限公司生产的禽白血病病毒双抗夹心ELISA抗原检测试剂盒和禽白血病病毒抗体检测试剂盒（ALV－Ab）对鸡群进行检测调查，以期为粤西卷羽鸡与贵妃鸡保种场禽白血病的净化防控提供参考[5]。

1 材料与方法

1.1 样品采集

样品采集于粤西卷羽鸡和贵妃鸡保种场，其中贵妃鸡蛋清3 284份，贵妃鸡公鸡全血225份，卷羽鸡蛋清2 223份，卷羽鸡公鸡全血191份。

1.2 检测试剂盒及方法

采用北京明日达科技有限责任公司生产的禽白血病病毒双抗夹心ELISA抗原检测试剂盒和禽白血病病毒A/B亚型、J亚型、K亚型抗体检测试剂盒，按照说明书进行检测[6]。

全血进行病毒分离培养后进行禽白血病病毒抗体检测（公鸡全血检测结果由北京明日达科技有限公司检测技术人员提供）。

1.3 检测方法

1.3.1 样本的采集与处理

在病毒分离前，需要采集公鸡的血液样本。采集的鸡抗凝血样品应保存在 4℃环境下，采集的鸡血液样品应尽快处理并接种DF-1细胞，保存期限最长不超过6 h，否则应重新采样。将鸡抗凝血样品转移至灭菌离心管中，2 000 r/min离心2 min，备用。

1.3.2 接种细胞的准备

取生长状态良好的DF-1细胞，常规传代消化，调整细胞密度为1×105个细胞/mL，接种于24孔细胞培养板中，每孔接种1 mL。待细胞生长至占细胞贴壁面70%时，弃去孔中的培养基，并用磷酸盐缓冲液（PBS）清洗细胞面三次后，可用于样品的

接种。

1.3.3 鸡血浆样品的接种

将离心处理后的血液样品用移液器吸头轻轻旋转上层血浆，使处于中层的白细胞悬浮于血浆中，吸取 100μL 血浆接种到DF-1细胞培养孔中，另设阴阳性对照孔，样品孔做好标记，并在每个细胞培养孔中加入40μL 肝素钠溶液，防止血浆凝固。

1.3.4 细胞的维持培养

将接种样品后的细胞板放入细胞培养箱继续孵育3h后，弃去细胞培养孔中液体，用200μL灭菌PBS润洗细胞孔1 次，加入细胞维持培养液1 mL，继续培养

7-9 d，在细胞状态允许的条件下应尽可能延长细胞维持培养的时间，以利于 ALV 在细胞上的增殖。在24孔培养板靠边的样品孔中多加入0.3 mL细胞维持培养液，以补偿样品孔的水分蒸发。

1.4 酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测 ALVp27抗原

应按照NY/T680中规定的方法执行或采用符合NY/T680 要求的商品化试剂盒进行检测，并按照试剂盒说明书执行。

1.4.1 间接免疫荧光抗体反应（IFA）方法检测ALV抗原

按照 GB/T 26436 中规定的方法执行。

1.4.2 聚合酶链式反应（PCR）方法检测ALV核酸

应按照GB/T 26436中规定的方法执行。

2 检测结果及分析

2.1 检测结果（见表1）

2.2 检测情况分析

通过检测数据可知：卷羽鸡总阳性率为8.4%，贵妃鸡总阳性率2.7%。其中卷羽鸡白血病的感染率最高。从感染禽白血病病毒的亚群看，贵妃（公）鸡J和K型阳性率均为3.56%，卷羽（公）鸡A、J和K亚型阳性率为3.14%、14.14%和20.94%。其中K型的阳性率相对较高，表明K型是该场的主要感染型，需要进一步监测和净化[7]。

此外，该养殖场白血病感染率高于国家1%的净化标准，从阳性数和阳性率来看，该场的禽白血病感染情况较为严重，需要加强防控措施，包括对禽类和动物的健康监测以及减少污染等措施[8]，以确定是否存在其他潜在问题。

3 快速检测的优点

3.1 准确性和可靠性是关键

禽白血病检测技术的准确性是防控疾病的关键。只有准确的检测才能为防控措施提供有力的依据。同时可靠性也至关重要，因为任何误诊或漏诊都可能给家禽产业带来不可估量的损失。因此，我们需要不断优化检测技术，提高检测准确性和可

靠性[9]。

3.2 快速简便的检测方法

在面对大规模家禽养殖时，快速简便的检测方法显得尤为重要。快速准确地检测疫病有助于防控部门及时采取科学合理的防控措施，给养殖户减少损失。同时，简便的操作方法也便于基层工作人员掌握和使用。因此，我们需要不断探索和开发快速简便的检测方法。

3.3 多种方法联合使用更具优势

由于每种检测方法都有其优缺点，因此采用多种方法联合使用较单一检测更具优势，提高检测的准确性和可靠性。例如，可以将病原学检测和血清学检测结合起来，或者将血清学检测和分子生物学检测结合起来，提高检测的准确率，以实现更全面的检

测效果[10]。

4 防控建议

禽白血病在地方品种鸡群中流行较广，及时接种疫苗，减少感染率和建立禽白血病净化种鸡群是防治本病最有效的措施。建议做好以下几点：

（1）定期监测是初步诊断手段。定期进行禽类和动物健康状态监测，包括血液检查、组织病理学检查等，以便及时发现和诊断禽白血病的手段之一。

（2）防止水平传播。种蛋及雏鸡必须来自无无疫病的鸡场；为避免交叉感染，不同月龄的雏鸡和成鸡实行分群饲养，雏鸡与成鸡分群，采用全进全出的饲养管理制度；饲料、用具分开，实行严格的消毒制度，经常进行喷雾消毒，及时处理粪便，切断禽白血病传播途径。

（3）严防垂直传播。对于禽类和动物繁殖场要加强检测淘汰措施，制定禽白血病净化方案，定期对种鸡和种蛋检测，及时淘汰阳性种鸡，逐步建立禽白血病净化种鸡群，防止禽白血病病毒通过免疫、受精或种蛋传播给下一代。

（4）严格生物安全措施。定期评估养殖场生物安全防护水平，确保各项防疫措施、制度有效执行。严禁混养不同动物。养殖场严格人员、车辆、物品的进出管理以及动物流动。供应优质全价饲料，为种鸡免疫系统的正常发育创造良好的饲料品质和卫生条件。同时引入无针头注射器，尽量减少免疫过程中的应激反应，增强家禽抵抗力。

（5）做好其他病种的免疫工作。如：马立克氏病、传染性法氏囊等疫病，这能引起免疫抑制，降低机体对禽白血病病毒的抵抗力，诱发禽白血病。

（6）在预防和控制禽白血病的过程中，应注重地区合作和信息共享。及时了解国内外禽白血病的流行趋势和防控策略，有助于提高养禽业的防控。

（7）在未来研究中，应关注ALV基因序列变异与禽白血病发病机制之间的关系，为开发新型防控药物和治疗方案提供理论支持。同时加强跨学科合作，推动禽白血病研究领域的不断发展。

5 结论

本次调查采用商品化 ELISA 试剂盒对粤西卷羽鸡和贵妃鸡保种场的血清和蛋清样品进行了ALV-A、ALV-J和ALV-K血清抗体和P27抗原的个体阳性率检测分析，结果表明卷羽鸡和贵妃鸡鸡群 ALV 感染普遍存在，感染的亚群及其阳性率各不相同，调查结果为信宜市开展禽白血病防控、净化提供一定的理论依据。鉴于目前对禽白血病无相关的疫苗进行免疫及特效的治疗药物，对 ALV 定期监测、淘汰阳性鸡是净化养殖场控制 ALV 传播的重要途径，建立净化的鸡场，以防止该病的传播。

参考文献

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[2] 王萍，陶林，陈洁波，等.麒麟鸡（卷羽鸡）16周龄体尺与屠宰性能测定及相关性分析[A].中国畜牧兽医学会家禽学分会第九次代表会议暨第十六次全国家禽学术讨论会[C].2024：67-68.

[3] 李昕键，李广伟，严一铭，等.2014～2015年广东省

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[4] 李乃宾，杜炳旺，杨芬霞，等.麒麟鸡（卷羽鸡）12周龄血液生理生化指标的测定与分析[A].第四届（2014）中国黄羽肉鸡行业发展大会[C].2024：99-100.

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[10] 沈海玉，许明，李尚民，等.地方特色蛋鸡配套系中禽白血病感染调查及病原的分离与鉴定[A].中国畜牧兽医学会家禽分会[C].2015：111-113.