GC/MS法测定茶叶中双甲脒及其代谢物残留量

袁东婕

摘 要：目的：建立GC/MS法测定茶叶中双甲脒及其代谢物残留量的分析方法。方法：在酸性条件下将双甲脒完全水解成2，4-二甲基苯胺，用正己烷-乙醚混合溶液提取，酸、碱液-液分配净化，通过气相色谱-质谱测定。结果：2，4-二甲基苯胺在0.02～1.00 μg·mL-1线性关系良好，相关系数（R2）为0.998 0，加标回收率为81.7%～86.9%，相对标准偏差为1.33%～2.45%，定量限为0.01 mg·kg-1。结论：该方法的实验步骤简单易操作，易于推广，适用于茶叶中双甲脒及代谢物的测定，可为目前茶叶中双甲脒及代谢物的监管提供有效的技术支撑。

关键词：GC/MS法；茶叶；双甲脒

Determination of Residual Levels of Amitraz and Its Metabolites in Tea by GC/MS Method

YUAN Dongjie

（Anhui Public Inspection and Research Institute Co.， Ltd.， Hefei 230051， China）

Abstract： Objective： To establish a GC/MS method for the determination of amitraz and its metabolites in tea. Method： Amitraz was completely hydrolyzed to 2，4-dimethylaniline under acidic conditions， extracted with a mixed solution of n-hexane-ether， purified by acid and lye， and determined by gas chromatography-mass spectrometry. Result： The linear relationship of 2，4-dimethylaniline in the range of 0.02～1.00 μg·mL-1 was good， the correlation coefficient （R2） was 0.998 0， the recoveries were 81.7%～86.9%， the relative standard deviation was 1.33%～2.45%， and the limit of quantization was 0.01 mg·kg-1. Conclusion： The method is simple， easy to operate and easy to popularize. It is suitable for the determination of amitraz and metabolites in tea， and can provide effective technical support for the supervision of amitraz and metabolites in tea.

Keywords： GC/MS method; tea; amitraz

双甲脒是一种广谱性甲脒类杀虫剂，属于中等毒性杀螨剂。其主要在果树、蔬菜、茶叶、棉花、大豆和甜菜等作物生产中应用，对木虱类、部分鳞翅目害虫卵、蚧、蚜、棉铃虫、红铃虫、牛羊蜱螨及蜂螨等有一定的防治效果。但是，双甲脒及其代谢物对人的皮肤和黏膜有刺激性，对人体的中枢神经系统能产生抑制作用[1-5]。

茶叶是一种天然、绿色、健康的饮品，不仅具有提神清心、清热解暑、消食化痰、抗癌、抗氧化、消炎和消除自由基等药理作用，还具有美容保健、延年益寿和减肥等保健作用，已经成为人们日常生活的必需品。而茶叶的质量安全问题如农药残留问题成为人们关注的焦点。我国《食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量》（GB 2763—2021）[6]对茶叶的部分农药最大残留限量有一定要求，但针对茶叶中双甲脒及其代谢物的限量标准未进行相应规定。然而，在茶叶种植过程中双甲脒常作为杀螨剂用于茶树的种植过程中，这给茶叶的食用安全带来了潜在风险。

目前，针对双甲脒及代谢物测定的相关标准有《蔬菜、水果、食用油中双甲脒残留量的测定》

（GB/T 5009.143—2003）[7]、《食品安全国家标准 蜂王浆中双甲脒及其代谢产物残留量的测定 气相色谱-质谱法》（GB 23200.103—2016）[8]、《出口蜂王浆中双甲脒及其代谢产物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法》（SN/T 2574—2019）[9]、《食品安全国家标准 牛奶中双甲脒残留标志物残留量的测定 气相色谱法》（GB 29707—2013）[10]及《蜂蜜中双甲脒残留量的测定 气相色谱-质谱法》（农业部781号公告—8—2006）[11]，但这些标准中介绍的方法主要适用于蔬菜、水果、食用油、蜂蜜蜂王浆和牛奶等。针对茶叶中的双甲脒及其代谢物的测定方法还没有相关的国家或行业标准。基于此，本文建立了测定茶叶中双甲脒及其代谢物的残留量的气相色谱质谱法，该方法主要是在酸水解和碱化的作用下，将双甲脒转化为2，4-二甲基苯胺，用正己烷-乙醚混合溶液提取，酸、碱液-液分配净化，气相色谱-质谱法测定。该方法为茶叶中双甲脒及代谢物的测定提供了技术支撑。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

2，4-二甲基苯胺标准品（1 000 ?g·mL-1），天津阿尔塔科技有限公司；正己烷、乙醚、丙酮，均为色谱纯；盐酸、氢氧化钠，均为分析纯；实验室用水为超纯水。

1.2 仪器与设备

GCMS-QP2010 U1tra气相色谱质谱联用仪，日本岛津；分析天平，平梅特勒-托利斯（仪器）上海有限公司；离心机，上海安亭科学仪器厂；套式恒温器，浙江新华医疗器械厂；XW-80A微型旋涡混合仪，上海沪西分析仪器厂有限公司。

1.3 实验方法

1.3.1 仪器条件

色谱柱型号：TG-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；

进样体积：1.0 μL；流速：1.0 mL·min-1；不分流进样；色谱柱柱温：50 ℃保持2 min，以10 ℃·min-1升至160 ℃，保持1 min，以30 ℃·min-1升至280 ℃，保持8 min；离子源类型：EI；离子源温度：230 ℃；传输线温度：280 ℃；进样口温度：250 ℃；扫描模式：SIM模式；定性离子（m/z）：120、77；定量离子（m/z）：121。

1.3.2 标准溶液配制

准确吸取1.0 mL 2，4-二甲基苯胺标准物质于

10 mL棕色容量瓶中，用丙酮定容至刻度，得到浓度为100 μg·mL-1的标准储备液。根据需要用丙酮配制系

列浓度为0.02 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1、0.50 μg·mL-1和1.00 μg·mL-1的标准使用溶液。按照

1.3.1仪器条件对标准系列溶液进行测定。

1.3.3 样品前处理

称取粉碎均匀的试样2 g（精确至0.01 g）于

150 mL圆底烧瓶中，加入2.0 mol·L-1盐酸溶液

30 mL，于旋涡混合器上混匀。装上回流冷凝装置，120 ℃加热回流2 h，停止加热，在室温下继续通冷却水15 min，移至冰浴中冷却15 min。将水解液转移到50 mL具塞离心管中，先加10 mL正己烷-乙醚（2+1，体积比）混合溶剂，再加4 mL氢氧化钠溶液，涡旋混匀，在冰浴中冷却5 min，以4 000 r·min-1离心3 min。将上层有机相转移到另一个50 mL具塞离心管中。水相用2×10 mL正己烷-乙醚（2+1，体积比）混合溶剂萃取2次，合并上层有机相。用

2×5 mL盐酸溶液萃取2次，合并盐酸提取液并定容至10 mL，分取5 mL盐酸提取液于10 mL具塞离心管中，加入2 mL正己烷-丙酮（2+1，体积比）混合溶剂，2 mL氢氧化钠溶液萃取1次，离心分层，上层有机相供气相色谱-质谱测定，外标法定量。

2 结果与分析

2.1 仪器方法的选择

针对食品中双甲脒及其代谢物的检测方法主要有2种。①将双甲脒在酸性条件下完全水解成2，4-二甲基苯胺，直接测定2，4-二甲基苯胺含量；②抑制双甲脒的水解，用双甲脒和其代谢物的标准溶液来定量双甲脒及其代谢物的含量，但该方法多在气相色谱-串联质谱法（Gas Chromatography - Tandem Mass Spectrometry， GC-MS/MS）或超高效液相色谱-串联质谱法（Ultra Performance Liquid Chromatography - Tandem Mass Spectrometry， UPLC-MS/MS）上应用。《蔬菜、水果、食用油中双甲脒残留量的测定》（GB/T 5009.143—2003）中是将双甲脒水解成2，4-二甲基苯胺，用正己烷提取，酸碱反复液-液分配净化，用七氟丁酸酐将2，4-二甲基苯胺衍生成2，4-二甲基苯七氟丁酰胺，ECD-GC测定。该方法中标液和提取液均需进行柱前衍生化，且衍生化步骤烦琐，标液与样液的衍生化反应须一致，否则会导致结果无可比性、准确度不高以及重现性差，进而容易造成较大的实验误差。本文在酸性条件下将双甲脒完全水解成2，4-二甲基苯胺，然后用GC-MS法进行定性定量测定。该方法的准确度高，重复性好，不仅能有效避免衍生化反应不一致带来的误差，还能更好地避免GC方法带来的假阳性现象。

2.2 标准曲线的建立

按照1.3.1仪器条件对标准系列溶液进行测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。结果表明，2，4-二甲基苯胺在0.02～1.00 μg·mL-1线性关系良好，线性方程为y=61 772.278 722x-

938.709 505，相关系数（R2）为0.998 0。另配制浓度为0.005 μg·mL-1的标准使用液，按照上述1.3.2的仪器条件平行测定20次，计算信噪比，以3倍信噪比计算其检出限为0.003 mg·kg-1，以10倍信噪比计算其定量限为0.01 mg·kg-1。2，4-二甲基苯胺的总离子色谱图见图1，质谱图见图2。

2.3 回收率及精密度

称取粉碎均匀的空白试样，分别加入含2，4-二甲基苯胺0.3 ?g、2.0 ?g和4.0 ?g的标准溶液，每个浓度做6个平行样，按照上述1.3.3试验方法进行处理分析，计算回收率和精密度。由表1可知，2，4-二甲基苯胺的加标回收率为81.7%～86.9%，相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD）为1.33%～2.45%，回收率和精密度均符合《实验室质量控制规范 食品理化检测》（GB/T 27404—2008）[12]要求。

2.4 实际样品测定

利用本文建立的方法对2023年抽取的70批次茶叶进行双甲脒及其代谢物含量的测定，结果发现有1批次检出2，4-二甲基苯胺，但低于定量限（0.01 mg·kg-1）。实验结果表明市面上销售的茶叶中双甲脒及其代谢物的残留量较低。

3 结论

本文建立了GC/MS法测定茶叶中双甲脒及其代谢物残留量的方法。结果表明，2，4-二甲基苯胺在0.02～1.00 μg·mL-1线性关系良好，相关系数（R2）为0.998 0。该方法的实验步骤简单易操作，易于推广，方法的回收率和精密度均满足GB/T 27404—2008要求，适用于茶叶中双甲脒及代谢物的测定，为目前茶叶中双甲脒及代谢物的监管提供了有效的技术支撑。

参考文献

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[10]农业部，国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准 牛奶中双甲脒残留标志物残留量的测定 气相色谱法：GB 29707—2013[S/OL].（2013-09-16）[2024-01-03].http：//down.foodmate.net/standard/sort/3/38211.html.

[11]中华人民共和国农业部.蜂蜜中双甲脒残留量的测定 气相色谱-质谱法（农业部781号公告—8—2006）[EB/OL].（2006-12-16）[2024-01-03].https：//www.doc88.com/p-1952343397345.html.

[12]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.实验室质量控制规范 食品理化检测：GB/T 27404—2008[S/OL].（2008-05-04）[2024-02-14].https：//www.doc88.com/p-3774861932234.html.