复方狗骨胶颗粒制备工艺研究 *

邱 田 王 芳 裴明莉 生家耀 张 燕

（1.滕州市中医医院骨伤科，山东 枣庄 277599；2.滕州市中医医院中药房，山东 枣庄 277599）

狗骨为近代中药虎骨的替代品［1］，药用记载首见于《名医别录》［2］之“狗骨灰，主下痢、生肌、敷马疮”。狗骨早期多以烧灰入药，外用治疗内外妇儿等疾患；自宋代开始用于治疗筋骨伤折疼痛，配制八骨散方、虎骨膏方等［3］，扩增狗骨补骨、温肾强筋等功效［4］。近年来，不乏狗骨胶［5］的复方制剂相关中成药，但对其临床科研研究基础较为薄弱［6］。本研究考察复方狗骨胶颗粒的最佳制备工艺，旨在为复方狗骨胶颗粒的产品开发提供数据参考。

1 处方选择

狗骨5000 g，犬科动物Canis FamiliarisL.的四肢骨，购买于滕州市大坞镇。熟地黄500 g，玄参科植物地黄Rehmannia glutinosaLibosch.的新鲜或干燥块根的炮制加工品，购自山东宁康中药饮片股份有限公司，产地河南。山萸肉500 g，山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalisSieb.et Zucc 的成熟果肉，购自山东宁康中药饮片股份有限公司，产地浙江。狗脊800 g，蚌壳蕨科植物金毛狗脊Cibotium barometz（L）J.Sm.的干燥根茎，购自枣庄嘉诚医药有限公司，产地云南。骨碎补800 g，水龙骨科植物槲蕨Drynaria fortunei（Kunze）J.Sm.的干燥根茎，购自枣庄嘉诚医药有限公司，产地四川。牛膝500 g，苋科植物牛膝（怀牛膝）Achyranthes bidentataBl.的根，购自安徽普仁中药饮片有限公司，产地河南。杜仲500 g，杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoidesOliv.的树皮，购自山东宁康中药饮片股份有限公司，产地云南。黄芪500 g，豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus（Fisch）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao 的根，购自山东一方药业有限公司，产地内蒙古。红花500 g，菊科植物红花Carthamus tinctoriusL.的干燥花，购自山东百味堂中药饮片有限公司，产地河南。丹参500 g，唇形科植物丹参Salvia miltiorrhizaBge.的干燥根及根茎，购自安徽普仁中药饮片有限公司，产地四川。山药500 g，薯蓣科植物薯蓣Dioscorea oppositaThunb.的干燥根茎，购自山东一方药业有限公司，产地河南。

辅料：95%乙醇（河南汉永酒精有限公司）、蔗糖（河南万邦实业有限公司）300 g，山药粉500 g。

2 仪器与设备

TQ-0.3 型多功能提取器（浙江森力机械科技股份有限公司），JH300GYF 型密度测定仪（上海浦春计量仪器有限公司），真空泵（医院智慧药房提供），DHG-9023A型烤箱（南北仪器有限公司），药筛1 号10 目、7 号120目（医院智慧药房提供），JP-FSJ 型球磨机（永康市久品工贸有限公司）。

3 制备工艺研究

3.1 剂型选择目前，常用的胶类中药的品种即《中华人民共和国药典：一部》所载药，只有阿胶、鹿角胶、龟甲胶。20世纪70年代即有学者研制狗骨胶，但未成新药。临床证明，胶类中药具有疗效显著、使用方便、体积小、便于携带等优点。近年来，课题组受相关研究资料、临床实践（滕州市中医医院名老中医张义明主任医师曾做过类似研究）及近年阿胶颗粒品种上市的启发，选择了狗骨胶颗粒作为制备研究的方向。

3.2 工艺路线的确定及选择依据

3.2.1 工艺路线本品拟作胶类颗粒剂，其基本工艺路线见图1。

图1 狗骨胶颗粒工艺路线示意图

3.2.2 处方药物的性质狗骨性平，甘温无毒，功效为健脾益肾、和络生肌、强腰壮骨［7］，主治风湿腰腿痛、骨质疏松、关节痛、股骨头坏死、骨折等症，化学成分主要为蛋白质和无机元素、氨基酸，氨基酸主要为脯氨酸、谷氨酸、赖氨酸、甘氨酸等，无机物主要为钙、磷、铜、锰等。

熟地黄味甘，性微温，归肝、肾经，功效为补血养阴、填精益髓［7］，主治内热消渴、骨蒸潮热、腰膝酸软、盗汗遗精、眩晕、耳鸣、血虚萎黄、心悸、怔忡、崩漏下血、月经不调、须发早白等症，化学成分主要为环烯醚萜类、紫罗兰酮类、苯乙醇类等多种类型化合物［8］。

山药味甘性平，归脾、肺、肾经，功效为益气养阴、补脾肺肾、固精止带［7］，主治脾虚乏力、食少、泄泻，肾虚尿频、遗精，肺虚咳喘等，化学成分主要为多糖、氨基酸、脂肪酸、山药素类化合物、微量元素、淀粉、蛋白质等，根茎中含有甾体、薯蓣皂苷、尿囊素、菲类及联苄类等［9-11］。

山萸肉味酸、涩，性微温，归肝、肾经，功效为补益肝肾、收敛固涩［7］，主治虚喘、盗汗、遗尿滑精、内热消渴、怔忡不宁、耳鸣眩晕、腰膝酸软等症，化学成分为环烯醚萜类、鞣质类、黄酮类、三萜类、芳香酚酸类、多糖类、甾体类、生物碱类、有机酸类、挥发油类等［12，13］。

狗脊味苦、甘，性温，归肝、肾经，功效为祛风湿、补肝肾、强腰膝［7］，主治腰背酸痛、风寒痹痛、手足麻木、半身不遂等症，化学成分为芳香族类、挥发油类、蕨素类、酚酸类、黄酮类、皂苷类、糖及糖苷类、氨基酸类化合物以及无机元素［14］。

骨碎补味苦性温，归肝、肾经，功效为活血续伤、补肾强骨［7］，主治肾虚腰痛、跌扑闪挫、筋骨折伤，化学成分为黄酮类、三萜类、苯丙素类、木脂素类等［15］。

牛膝味苦、甘、酸，性平，归肝、肾经，功效为活血通经、补肝肾、强筋骨、利水通淋、引火（血）下行［7］，主治腰膝酸痛、筋骨无力、痛经闭经、水肿、眩晕、吐血衄血等症，化学成分主要为三萜皂苷类、甾酮类及多糖类，有少量的生物碱、黄酮类等成分，还含有精氨酸等12种氨基酸以及生物碱类、香豆素类等化合物和铁、铜等微量元素。

杜仲味甘性温，归肝、肾经，功效为补肝肾、强筋骨、安胎［7］，化学成分为杜仲胶、松脂醇二葡萄糖苷、桃叶珊瑚苷、鞣质、黄酮类化合物等。

黄芪味甘性微温，归脾、肺经，功效为补气健脾、升阳举陷、益卫固表、利尿消肿、托毒生肌［7］，主治心悸气短、表虚自汗、乏力、食少便溏、体虚浮肿、子宫脱垂、疮疡溃后久不愈合等症，化学成分主要为皂苷类、多糖类、黄酮类、氨基酸类、生物碱类等［16］。

红花味辛性温，归心、肝经，功效为活血通经、祛瘀止痛［7］，主治跌打损伤、瘀滞肿痛，化学成分为红花醌苷、新红花苷、红花苷、红花黄色素和黄色素，另含红花油，油中包括棕榈酸、肉豆蔻酸、月桂酸、硬脂酸、花生酸、油酸等。

丹参味苦性微寒，归心、心包、肝经，功效为活血调经、祛瘀止痛、凉血消痈、除烦安神［7］，主治月经不调、经闭痛经、疮疡肿痛、胸腹刺痛、心烦不眠、心绞痛，化学成分为丹参酮类、丹酚酸类、挥发油类、多糖类和含氮化合物等。

3.3 生产条件本品为胶类颗粒制剂，其中还包括部分中药材的提取物。在制备生产中，除应具有相应的鲜狗骨的浸泡［17］、清洗、除垢、切锯等必要的设备外，还应备水蒸气夹层锅，过滤设备，中药的提取、浓缩设备以及制粒设备，如喷雾干燥及沸腾床干燥设备和分装包装设备。

3.4 狗骨胶液提取条件的筛选

3.4.1 正交试验设计选取3 个影响狗骨胶液制作的重要因素，包括制作温度（A）、制作时间（B）、配比（C），进行三因素试验设计。将中药狗骨平均分成9 份，指标是狗骨胶液的得率，通过试验结果，确定最优狗骨胶液的制作方案。正交试验因素及水平见表1。

表1 L9（34）正交试验因素与水平

3.4.2 验证试验结果与分析对最优制作进行放大试验，得出A2B1C1组合与A2B1C2组合的结果无明显差异。见表2。鉴于时间成本和用料成本考虑，确定最优制作方案为A2B1C1，并以最优制作方案制作10 份狗骨胶液，即S1～S10。

表2 验证试验结果

3.4.3 正交试验结果分析以狗骨胶液得率作为指标评价狗骨胶液的制作方案，以综合加权评分法计算，方差分析见表3，试验结果分析见表4。

表3 正交试验方差分析

表4 正交试验结果分析

由表3、表4得出结论，影响指标的三大因素制作温度（A）、制作时间（B）、配比（C）对狗骨胶液制作方案的影响大小依次为A＞C＞B，最优制作方案应为A2B1C2，即制作温度115 ℃、制作时间16 h、配比1∶7。根据方差分析结果，制作温度对狗骨胶液的制备影响有统计学意义，制作时间与配比对狗骨胶液的制备影响无统计学意义。鉴于时间成本和用料成本，优先考虑最佳方案为A2B1C1，即制作温度115 ℃、制作时间16 h、配比1∶6。

综上所述，本品的制备工艺路线可确定如下：

（1）狗骨胶液的制作：①原材料处理：取新鲜狗骨的四肢骨5000 g，清水冲洗2次，并去除附着的筋肉，置入水容器中浸泡3 d，每日换水1 次，直至附骨上的筋肉完全腐烂脱落，切碎或锯成3～5 cm长的短节，再用1%～2%的碳酸氢钠液（山东海化集团有限公司）洗去油脂，用清水冲洗3次，至水pH为中性。②提取胶液：加入6倍量的清水于提取罐内，加热115 ℃提取16 h，应随时加水使狗骨与水的比例为1∶6，过滤提取滤液。③制作备用A液：连续提3次，合并3次提取液，放置沉淀24 h用白布过滤，三次提取液于夹层锅中115 ℃浓缩至相对密度为1.30。

（2）中药提取膏的制备：①选取中药：称取熟地黄、山萸肉、牛膝、杜仲、黄芪、红花、丹参各500 g，狗脊、骨碎补各800 g。②水煮醇洗法提取：加入4 倍量的冷水浸泡2 h，于夹层提取锅中提取2 h，过滤得到滤液；药渣继续加入3 倍量的冷水，再提取2 次，将3 次滤液合并，放置24 h沉淀、过滤。③制作中药提取B膏：低温100 ℃内浓缩至相对密度为1.00，加2倍量的95%乙醇搅拌，沉淀24 h，过滤出滤液，回收乙醇并浓缩相对密度为1.30。

（3）合并A 液B 膏：取A、B 稠膏合并，加山药粉500 g、蔗糖300 g混匀，用90%的乙醇适量制成软材，通过1号筛（13～14目）制成颗粒，低温干燥，分装。