血清LAPTM4B-35及DKK1联合低剂量超声造影在肝肿瘤良恶性诊断中的应用价值

徐 鹏,于德洋,董茹婷,王 宁,王 磊

0 引 言

肝肿瘤是消化系统最常见的疾病,根据其特点可分为良性和恶性,肝癌是最常见的恶性肝癌,其发病率居世界第六位,死亡率居第三位[1]。在大多数情况下,良性肝肿瘤不会扩散到身体的其他部位,而且不会对健康造成严重威胁,而肝癌疾病进展迅速,严重威胁患者的生命健康[2]。对于肝肿瘤患者,尽早确定肿瘤的性质,有效地区分良性和恶性肿瘤,对于制定治疗方案和提高生存率具有重要意义。低剂量超声造影是一种无创成像技术,可通过注射造影剂,实时连续动态地观察肿瘤的血液灌注,以增强人体内的血流逆流信号,在诊断和鉴别良性和恶性肝肿瘤方面具有重要意义[3]。虽然低剂量超声造影提高了肝癌诊断效能,但由于成本高、对小肿瘤不敏感、特异性不高等缺点,其应用受到限制[4]。因此,迫切需要选好检测方便、廉价、无侵入性且可重复的血清生物标志物,提高肝肿瘤的诊断效能。LAPTM4B-35位于Q22号染色体上,可促进细胞的增殖、迁移、侵袭,以及化学耐药性等,导致细胞的恶性转化和肿瘤生成,与胆囊癌、大肠癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、子宫内膜癌、胃癌等多种癌症的进展密切相关[5]。DKK1是典型的wnt信号通路的分泌抑制剂,在细胞增殖、迁移、凋亡中起着重要作用,其失调导致骨质疏松症、阿尔茨海默病、糖尿病、癌症等多种疾病的发生、发展[6]。然而,目前LAPTM4B-35、DKK1在肝肿瘤血清中的表达以及联合低剂量超声造影在肝肿瘤良恶性诊断中的应用价值,尚不清晰。因此,本研究通过检测良恶性肝肿瘤血清中LAPTM4B-35、DKK1的表达水平并联合低剂量超声造影在肝肿瘤良恶性诊断中的应用价值,为肝肿瘤的早发现和对症治疗提供一定的参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集2021年1月至2022年8月青岛市中心医院急诊创伤外科进行治疗的160例肝肿瘤患者作为研究对象。根据病理学结果,将患者分为良性组(n=74)和恶性组(n=86)。纳入标准:①恶性肝肿瘤符合《原发性肝癌诊疗规范》[7]诊断标准;②初次进行治疗,入组前未进行放、化疗治疗患者。排除标准:①其他部位恶性肿瘤;②造影剂过敏患者;③凝血功能障碍患者;④免疫系统缺陷患者。收集所有肝肿瘤患者年龄、性别、BMI、吸烟史、饮酒史、高血压、糖尿病等一般资料。本研究通过青岛市中心医院伦理委员会批准(批准号:20201125),患者均签署知情同意书。

1.2低剂量超声造影采用Philips iU22超声诊断仪进行超声造影检查,观察病变组织位置、大小、形态等基本情况,选取病灶最佳切面,将探头固定进行超声造影,注射造影剂,开启计时器,观察患者病灶内灌注过程以及回声变化情况,进行超声造影时间-强度曲线分析。分析并记录始增时间、始增强度、达峰时间、峰值加速时间、峰值强度、120 s回声强度等。

1.3血清样本收集所有肝肿瘤患者清晨空腹,静脉采血约3～5 mL于干燥试管,离心半径为12 cm,时间为10 min,分离血清后,放入-20 ℃冰箱中保存,待检。

1.4检测血清中LAPTM4B-35、DKK1表达水平利用Varioskan LUX多功能酶标仪(美国赛默飞公司),使用DKK1酶联免疫试剂盒(货号:ml057577,上海酶联生物科技有限公司),于450nm波长处,检测血清中DKK1的表达水平。参考庞泳等[8]的方法,采用ELISA夹心法分析肝肿瘤患者血清中LAPTM4B-35的水平,利用上述多功能酶标仪测定492 nm处光密度值A492。

2 结 果

2.1 一般资料比较良性组与恶性组年龄、性别、BMI、吸烟史、饮酒史等差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 入组肝肿瘤患者一般资料比较

2.2肝肿瘤患者血清LAPTM4B-35、DKK1表达水平比较恶性组患者血清LAPTM4B-35、DKK1表达水平均高于良性组(P<0.05)。见表2。

表2 入组肝肿瘤患者血清LAPTM4B-35、DKK1表达水平比较

2.3肝肿瘤患者低剂量超声造影参数比较恶性组达峰时间低于良性组(P<0.05),峰值强度高于良性组(P<0.05)。见表3。

表3 入组肝肿瘤患者低剂量超声造影参数比较

2.4多因素Logistic回归分析肝恶性肿瘤的影响因素以发生肝恶性肿瘤为因变量(恶性=1,良性=0),以LAPTM4B-35、DKK1、达峰时间、峰值强度(连续变量)为自变量进行多因素Logistic回归分析,结果显LAPTM4B-35、DKK1、达峰时间、峰值强度是发生肝恶性肿瘤的影响因素(P<0.05)。见表4。

表4 多因素Logistic回归分析肝恶性肿瘤的影响因素

2.5血清LAPTM4B-35、DKK1联合低剂量超声造影对肝恶性肿瘤的诊断效能联合检测诊断肝恶性肿瘤优于血清LAPTM4B-35、DKK1、低剂量超声造影各自单独预测(Z两者联合-LAPTM4B-35=5.116、Z两者联合-DKK1=4.986、Z两者联合-达峰时间=4.657、Z两者联合-峰值强度=4.214,P<0.05)。见表5,图1。

图1 血清LAPTM4B-35、DKK1联合低剂量超声造影诊断肝恶性肿瘤的ROC曲线

表5 血清LAPTM4B-35、DKK1联合低剂量超声造影对肝恶性肿瘤的诊断效能

3 讨 论

肝癌是最常见、最致命的肝肿瘤,在全世界范围内的发病率日益上升,每年报告约75万个新增病例,超过75%的病例发生在亚太区域,每年约有50万人死于肝癌,其中50%以上发生在中国[9]。因此,尽早地判断肝肿瘤的良、恶性,以采取合理的治疗措施,对患者死亡率的降低具有重要意义。肝恶性肿瘤在早期阶段一般无症状,容易导致误诊,准确的鉴别诊断对于治疗和评估预后很重要,可以避免不必要的干预,提高治疗效果[10]。肝实质由肝动脉和门静脉供血,但典型肝癌通常仅由肝动脉供血,可利用低剂量超声造影评估肝血流,进而诊断良恶性肝肿瘤[11]。研究表明,影像学指标联合血清生物标记物,可以提高早期肝肿瘤诊断的准确性,降低误诊率[12]。本研究发现,恶性组达峰时间显著低于良性组,峰值强度显著高于良性组,提示低剂量超声造影在区分肝良恶性肿瘤方面具有重要价值。

LAPTM4B-35是一种新发现的致癌基因,最初是从肝细胞癌中鉴定出来,已被证明与多种癌症有关[13]。Fan等[14]发现,LAPTM4B-35在不同类型唾液腺细胞中的表达水平存在差异,在高组织学等级和高级临床阶段的唾液腺样囊性癌细胞中高表达,可作为唾液腺样囊性癌的诊断标志和个体化治疗的靶点。Kotowski等[15]发现,头颈鳞状细胞癌中LAPTM4B-35的表达显著升高,且可以促进癌细胞的增殖、迁移等生物学行为,与肿瘤分期、淋巴结转移等临床病理特征相关,与预后不佳有关,可以作为一个新的预后标志物。Yang等[16]发现,胰腺导管腺癌肿瘤组织和血清样本中LAPT4-B-35表达显著增加,能很好地区分胰腺导管腺癌与健康对照和慢性胰腺炎,具有较高的诊断和预后评估价值,可作为作为胰腺导管腺癌的肿瘤标记物。庞泳等[8]发现,LAPTM4B-35在肝细胞癌组织和血清中显著高表达,肝癌细胞以外排体形式释放LAPTM4B-35蛋白到外环境中,其表达水平可作为诊断肝细胞癌的血清学标志物。本研究发现,恶性组患者血清LAPTM4B-35表达水平均显著高于良性组,提示LAPTM4B-35可能通过肝肿瘤细胞增殖、迁移等生物学行为,导致肝恶性肿瘤细胞的恶性增殖。

DKK1是一种分泌性糖蛋白,在骨、胎盘、前列腺、脾脏、结肠等在多种人体组织中表达,参与多种生理、病理进程[17]。Li等[18]发现,DKK1是恶性多发性骨髓瘤的标志,常出现在严重骨病患者的骨髓瘤微环境中,但在正常组织中表达受限,DKK1高表达通过拮抗Wnt信号引起下游基因的表达,进而导致多发性骨髓瘤患者耐药性的产生。Sui等[19]发现,DKK1表达升高与大肠癌患者的复发相关,降低了大肠癌不匹配修复中的细胞浸润,DKK1高表达对大肠癌细胞死亡蛋白1阻断反应较差有关,抑制了患者抗肿瘤免疫反应。Iguchi等[20]发现,DKK1在肝癌组织中的表达过度,高表达促进了肿瘤的扩散、迁移和入侵,其表达与临床病理参数显著相关,且与肝癌的侵袭性和预后差有关。Wu等[21]发现,肝癌患者的肿瘤和血清中DKK1表达较高,与肝癌的肿瘤大小、埃德蒙森-施泰纳等级、静脉浸润和肿瘤侵袭密切相关,且阳性患者长期预后较差,DKK1是预测肝癌患者经导管动脉化疗栓塞治疗疗效和长期预后的重要生物标记物。本研究发现,DKK1在恶性组患者血清中的表达水平较高,提示DKK1可能通过拮抗Wnt信号通路,介导肝癌扩散、迁移、入侵,其水平对诊断良恶性肝肿瘤具有重要意义。进一步多因素Logistic回归分析,结果显LAPTM4B-35、DKK1、达峰时间、峰值强度是发生肝恶性肿瘤的影响因素,ROC曲线显示,LAPTM4B-35、DKK1、低剂量超声造影联合检测诊断肝恶性肿瘤优于其各自单独预测,提示LAPTM4B-35、DKK1可作为诊断肝肿瘤的生物标志物,联合低剂量超声造影可以提高对肝肿瘤良恶性的诊断效能,以便及早检测出疾病,并采取合适的治疗措施。

综上所述,肝肿瘤恶性组血清LAPTM4B-35、DKK1表达水平显著升高,联合低剂量超声造影在肝恶性肿瘤的诊断中具有较高的应用价值。然而,LAPTM4B-35、DKK1参与肝恶性肿瘤的具体机制仍需进一步探究。