屏障环境下SPF大小鼠的饲养管理

王昌军 单娇 逄春华 刘小卓 李新 常凯

摘要：目前虽有大量文献就大小鼠的饲养及屏障系统运营管理进行讨论，但较为笼统，对详细的管理方法及动物饲养状态记录较少。本文根据笔者工作实际就大小鼠在屏障环境下的饲养管理做一简要探讨。

关键词：屏障环境；大小鼠；饲养管理

随着动物实验在各类科研以及教学中的普及使用率的上升，对实验动物的需求也在日益增长[1]，对SPF级动物需求也更为迫切。健康的实验动物是开展动物实验科学研究的基础，保持屏障环境内的清洁度是SPF级动物房正常运行的关键，目前虽有不少文献就大小鼠的饲养及屏障系统运行管理进行讨论，但较为笼统，对详细的管理方法及动物饲养状态记录较少。笔者在动物房工作多年，积累了丰富的工作经验，根据屏障环境的特点，建立了一套行之有效的屏障环境实验室运行管理规范。本文就大小鼠在屏障环境下的饲养管理做一简要探讨。

1 实验动物房基本情况

1.1 人员、物品、动物的流向

在目前屏障环境的管理中，人员进出屏障环境是影响环境细菌数量和细菌种类的主要因素之一，因此为了减少屏障环境受到污染，保证实验动物质量与实验准确性，必须加强对实验人员的管理[2]。动物房按照相关管理规定，制定了《人员管理程序》等相关制度，严格规范人员进出，要求所有进出屏障环境的实验人员均需要持有实验动物从业人员资格证，未经授权，外部人员不得随意进出动物房。对来访参观人员实行预约制度，并填写《人员进出登记表》。同时针对屏障环境内物品和实验动物的流向也做出了明确规定。详见图1。

1.2 动物房主要仪器设备

动物房目前在用仪器设备多达50台套，关键设备有屏障环境系统、IVC系统、锐思捷纯水系统、新华双扉高压灭菌器等。为确保仪器设备正常运转，动物房制定了《仪器设备操作规程》《实验动物设施卫生与消毒标准操作规程》《停电、停水、停气、火灾、设备故障应急处理操作规程》等规则制度，同时为确保SPF区环境洁净度，定期委托第三方公司对中央空调控制系统定期保养与维护，并及时更换滤膜、滤芯等主要配件。压力表、安全阀和呼吸器等设备，每年定期送青岛市特种设备检验检测研究院进行计量校验。目前动物房采用的是屏障环境中央控制系统，通过电脑设备可全面控制屏障环境内的门禁系统、报警系统、温湿度和压力等。图2为动物房IVC系统。

1.3 动物房环境卫生监测

环境指标的主要参数主要包括温度、湿度、噪声、光照、室内风速、氨浓度、室内换气次数、各区域压力差等[3]。根据动物实验要求，温度、湿度和压差需要每日记录，根据它们的数值变化，对屏障系统状态进行简单维护操作，如风阀或空气过滤器等。每半年一次委托外部第三方機构对动物房环境进行环境监测。同时为确保动物房内卫生，SPF区域动物饲料和饮用水均进行营养指标和微生物指标监测，主要包括水分及挥发物质、蛋白质、大肠杆菌、大肠菌群、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等项目，检测合格后方可进去饲喂大小鼠。

1.4 饲养笼盒及屏障内外消毒方法

动物房SPF区现有饲养笼盒488个，其中检疫观察笼盒100笼，大鼠笼盒100个，可饲养大鼠200只，小鼠笼盒288个，可饲养小鼠576只。为避免交叉污染，新采购或已使用的笼盒均需高压灭菌处理，将清洗过的笼盒放入双扉高压灭菌器，选择灭垫料程序，高压灭菌后传入消毒后室。对于笼盒内动物使用的饲料、实验酒精等不耐热的物品进入SPF区则采用传递窗紫外线消毒30 min传入。每次清洗工作完毕，将清洗工具（如拖把、抹布等）用有效氯或有效溴含量为250～500 mg/L的消毒液浸泡，作用15～30 min后，用清水冲洗、拧干，放置指定位置。

2 屏障环境下大、小鼠饲养要点

动物房饲养的鼠为大、小鼠ICR体系，在采购实验动物时，应向有实验动物生产许可证、信誉好、动物质量佳、有严格管理和一定规模的单位购入，目前采购供应商是济南朋悦实验动物繁育有限公司。当SPF动物抵达后，首先检查带空气过滤装置的运输箱密封情况，然后再对照运输箱上的标签，核对动物的信息与要求是否相符，此外，还要观察动物的健康状况，包括观察动物的精神状态、被毛、粪便等方面是否正常。为对实验动物进行区分，动物房采用染色法对实验动物进行标记，如被毛、四肢等处进行涂染，以染色部位、颜色不同来标记区分实验动物。同时对实验动物进行编号，编号原则为：动物品种+验收日期+笼号或者（笼号+序号）。

2.1 小鼠饲养管理要点

小鼠体型小，胃容量更小，但性格比较活跃，喜欢啃咬物品，目前采取的是笼盒饲养方式，每盒最多5只，在饲喂过程中，应采取少量多次添加的方式。自饲料间领取适当用量的已辐照过的饲料，确认包装完好后，在传递窗内紫外消毒后，传入屏障内消毒后室暂存，开袋后应于一周内饲喂完，若略有剩余，应将其做无害化处理后丢弃。小鼠饮水必须保证每天换水，不能中断，更换时应清洗并消毒饮水瓶及吸水管，保证饮用水清洁。饮水瓶应符合无毒、无味，流水通畅，不漏水，便于动物吸取，保持饮水不被污染，便于清洗、耐化学或高温消毒的要求。发现有漏水迹象的水瓶及瓶盖，应及时剔除。

2.2 大鼠饲养管理要点

大鼠的饲养管理基本与小鼠相同。大鼠的饲养室要注意安静、避免噪声，强烈的噪声易引起大鼠狂躁不安[4]，易产生实验误差。

同时由于大鼠体型比较大，排泄物也多，产生的有害气体多（氨气、硫化氢等）。在饲养过程中要控制大鼠的饲养密度，勤换垫料，以每周更换两次为宜。

2.3 笼盒和笼具注意事项

笼盒一定要选择高品质、耐高温笼盒，以避免在高压过程中造成盒体变形、损坏等，本动物房采用聚乙烯塑料饲养笼，该笼盒可耐120 ℃高温，具有易清洁、使用寿命长的特点。

垫料是动物直接接触的铺垫物，有舒适、吸湿、保暖、可做窝等作用，首选不可食并舒适的刨花或锯末。应注意检查是否有异味、潮湿、发霉、粉尘等异样。自仓库领取需用量，适量铺垫于笼盒中，与笼盒一起经121 ℃、20 min，高温高压灭菌后使用，注意灭菌的干燥效果，及时反馈给灭菌器操作人员。垫料经高压灭菌处理后，保质期不超过一周，超过一周转移出屏障，弃用。

废弃垫料倾倒应在清洗间内进行，并用专用“废弃物收集袋”包装，统一存放在污物间，交由专人进行处理。

2.4 动物房设施消毒

加料、给水作业结束后，工作人员需将笼架上的垫料、饲料残渣用刷子或抹布扫清，消毒液擦拭消毒。对于箱式笼子，将动物取出放入灭菌过的新笼具，将垫料连同笼具一起经过污物走廊运至消毒后室，小型饲养箱垫料污物等装入塑料袋内，每周更换1～2次。地板上的污物、垫料、饲料残渣清扫干净，用消毒液擦拭两侧的门特别是门把，再用消毒液拖地。贮物间、二更、风淋、缓冲间和清洁走廊，用消毒药水拖地。把換出的物品推出污物走廊后，进行拖地、消毒。过氧乙酸的配制和使用方法见表1。

3 小结

青岛海关技术中心已建成动物房约600 m2，拥有SPF级动物饲养区300余m2和300余m2的普通动物饲养区，可饲养大、小鼠、豚鼠和兔子等实验动物，除了核心动物房外，还具有P2级生物安全实验室、细胞培养室和病理实验室等辅助实验室。目前可开展化妆品及固废等2大类10个项目的动物实验。

在工作实践中，总结了一套规范的、可操作性强的屏障环境实验室运行管理规范制度，最大限度地发挥屏障环境的功效。为确保试验质量，实验动物均从具备生产许可资质的济南朋悦实验动物中采购。但在实际饲养过程中，也存在一系列的小问题，比如说部分鼠出现被毛粗糙发绀、断尾现象，其约占饲养总数的10%，经综合分析研判，导致该种症状发生的原因是笼盒内湿度过低，为此加强巡查，要求值班人员及时查看中央控制系统温湿度参数指标，时刻关注独立通气笼盒（IVC）参数变化，降低换气次数，调高温湿度参数，为实验动物提供良好的生活环境，避免因环境不洁导致动物疾病发生。目前虽然动物房在动物饲养方面取得了一定的经验，但是也遇到了不少问题，在屏障环境下如何进一步完善管理，给实验动物提供更好的生活环境，其运行模式和管理方式都有待进一步探讨。

参考文献：

[1] 齐长永，刘永杰.SPF级大、小鼠生产规范化管理要素及实践[J].实验动物与动物实验，2012，30（4）：150-153.

[2] 吴克勤，陈涛，吴香新.浅析屏障环境实验室的管理[J].海峡药学，2014，26（8）：171-172.

[3] 李学勇，靳洪涛，刘欣.实验动物屏障设施管理中的几个关键问题[J].中国比较医学杂志，2008，18（1）：69-76.

[4] 秦芝蕾，张新创，左谦益. SPF 级实验动物屏障系统的建立及运营分析[J].当代畜牧，2012（3）：54-58.