非小细胞肺癌患者血清sTim-3和SPINK1水平与三维适形放疗效果及预后的关系*

胡婷婷, 鲁洪岭, 刘倩, 孙云川

(河北省沧州中西医结合医院 肿瘤放化疗科, 河北 沧州 061000)

非小细胞肺癌是临床上常见的恶性肿瘤,早期症状不明显,当患者呼吸困难时,患者病情已经发展至晚期[1-2]。其能通过静脉血或淋巴液往机体任意部位进行转移,严重威胁患者的健康[3]。三维适形放疗在临床中是一种与CT结合的高精度治疗非小细胞肺癌的方法,将肿瘤组织最大限度的集中照射,对非小细胞肺癌的疗效显著[4]。可溶性T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(soluble T cell immunoglobulin mucin molecule 3,sTim-3)是一种免疫抑制因子,通过介导效应T细胞凋亡以及增强调节性T细胞介导的免疫机制,促进与肿瘤相关的巨噬细胞M2极化抑制抗肿瘤免疫,从而促进肿瘤生长以及炎症因子分泌,例如sTim-3可参与非小细胞癌进展[5-7]。丝氨酸蛋白酶抑制剂Kazal1型(serine protease inhibitor Kazal1 type,SPINK1)是抑制胰蛋白酶在胰腺中的活化,防止器官“自我消化”[8];还能通过MAPK信号通路,使细胞生长受到磷酸化表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)受体蛋白刺激,在肿瘤发展过程中自分泌生长因子,例如SPINK1可参与非小细胞癌发生发展[9-10]。因此,本研究主要探讨血清sTim-3、SPINK1与非小细胞肺癌患者三维适形放疗疗效及预后的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2019年11月—2021年10月于本院接受治疗的70岁以上且初治的不能接受手术以及拒绝手术治疗的非小细胞肺癌患者作为研究对象,纳入标准:(1)经过CT影像学以及病理检查确诊为非小细胞肺癌;(2)入组前患者均未进行化、放疗;(3)有完整的临床、病理资料;(4)研究对象及家属详知研究内容并自愿签署同意书。排除标准:(1)合并恶性肿瘤者;(2)合并肝脏和肾脏衰竭患者;(3)精神疾病不能配合治疗者。共纳入患者102例,肿瘤直径≤3.0 cm 和>3.0 cm 者分别为55例和47例,肿瘤淋巴结转移(tumor node metastasis,TNM)分期Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期分别为58例和44例,分化程度中、高分化者56例、低分化46例,腺癌57例、鳞癌45例。本研究已获医院伦理委员会批准(2022-057)。

1.2 研究方法

1.2.1一般临床资料收集 收集患者的一般临床资料,包括年龄、性别、吸烟史、饮酒史、肿瘤直径、TNM分期、分化程度以及病理类型。

1.2.2血清sTim-3和SPINK1的检测及分组 采集患者入院第2天早晨起来空腹外周静脉血5 mL,3 500 r/min离心20 min,留上清液,置于-80 ℃冰箱保存待检;采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清sTim-3、SPINK1水平,对应的ELISA试剂盒购自上海奥威生物科技有限公司(货号分别为EH6609M、EH6463M),按照配套说明书进行检测。根据血清sTim-3、SPINK1中位数分别将患者分为sTim-3低和高水平组、SPINK1低和高水平组。

1.2.3三维适形放疗 首先明确患者的脏器运动、肿瘤形状和大小等,再评价结构的剂量、关键器官以及靶体积,脊髓量<40 Gy,患者仰卧且上举抱头,固定体膜,使用CT模拟定位增强扫描,之后确定危及的器官,勾画并重建靶区,从而制定相应的治疗计划。其中肿瘤区(tumor area,GTV)>1 cm,主要包含纵膈、肺门和原发灶阳性淋巴结,临床靶区(clinical targets,CTV)则是将GTV扩大0.6～0.8 cm,计划靶区(plan the target,PTV)则是在CTV的基础上横断面外放0.5～1.0 cm,然后设定5个共面或非共面的视野,进一步优化治疗计划,剂量线95%包绕PTV,X射线照射(6 MV),1次/d、2 Gy/次,5次/周。

1.2.4随访及疗效的评价 患者出院后对其进行12个月的电话随访,记录患者生存状态和时间,当患者死亡时或到截止时间停止随访。同时根据文献判断疗效[11]:肿瘤完全消失,无新病灶出现且持续1个月为完全缓解;肿瘤最大直径和垂直直径乘积缩小≥50%,病情无加重且持续1个月为部分缓解;肿瘤最大直径和垂直直径乘积缩小<50%或者增大≤25%时为稳定;肿瘤最大直径和垂直直径乘积增大>25%时为进展;其中总有效率为完全缓解和部分缓解之和占总例数的百分比。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 一般临床资料

sTim-3高水平和低水平组、SPINK1高水平组和低水平组非小细胞肺癌患者之间的一般临床资料比较,差异无统计学意义(P>0.05,表1)。

表1 非小细胞肺癌患者的一般临床资料Tab.1 Comparison of general clinical data of non-small cell lung cancer patients

2.2 血清sTim-3、SPINK1与患者临床特征的关系

由表2可知,肿瘤直径>3.0 cm、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为低分化的非小细胞肺癌患者血清sTim-3、SPINK1表达高于肿瘤直径≤3.0 cm、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、分化程度为中高分化的非小细胞肺癌患者,差异有统计学意义(P<0.05);非小细胞肺癌患者不同性别、年龄和病理类型比较,差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3 血清sTim-3、SPINK1与疗效的关系

接受三维适形放疗后,血清sTim-3、SPINK1低水平组总有效率高于高水平组,差异有统计学意义(P<0.05,表3)。

表3 非小细胞肺癌患者血清sTim-3、SPINK1与疗效的关系Tab.3 Relationship between efficacy and serum sTim-3 and SPINK1 in non-small cell lung cancer patients

2.4 血清sTim-3、SPINK1与预后的关系

根据Kaplan-Meier法分析结果显示(图1),102例非小细胞肺癌患者随访12个月后存活57例、死亡45例,存活率为55.88%;sTim-3高水平组和低水平组患者生存率分别为50.98%(26/51)和60.78%(31/51),sTim-3高水平组生存率低于低水平组,差异有统计学意义(χ2=3.888,P<0.05);SPINK1高水平组和低水平组患者生存率分别为49.02%(25/51)和62.75%(32/51),且SPINK1高水平组患者生存率低于低水平组,差异有统计学意义(χ2=5.484,P<0.05)。

注：A为血清sTim-3与患者预后的关系,B为血清SPINK1患者预后的关系。

2.5 患者预后影响因素的COX回归分析

以患者12个月内是否死亡为因变量(是=1,否=0),以血清sTim-3、SPINK1、肿瘤直径、TNM分期、分化程度为自变量进行COX回归分析,各变量赋值见表4;单因素COX回归分析表明(表5),sTim-3、SPINK1、肿瘤直径、TNM分期、分化程度是非小细胞肺癌患者预后的影响因素(P<0.05);多因素COX回归分析表明(表5),sTim-3、SPINK1、TNM分期、分化程度是非小细胞肺癌患者预后的影响因素(P<0.05)。

表4 各变量赋值方式Tab.4 Assignment methods for each variable

表5 非小细胞肺癌患者预后影响因素的COX回归分析Tab.5 COX regression analysis of prognostic risk factors in patients with non-small cell lung cancer

3 讨论

非小细胞肺癌是人类最常见的肿瘤疾病之一,随着经济水平升高,人们生活方式发生改变,非小细胞肺癌发病率也逐渐升高,严重影响人们健康[12]。然而早期临床症状并不典型,大部分非小细胞肺癌患者在确诊时多处于中晚期,错过最佳治疗时间,治愈率低[13-14]。三维适形放疗在临床上广泛用于辅助治疗中晚期恶性肿瘤,主要是通过设计三维治疗计划,在治疗时采用多个视野照射非共面和共面,使射线的高剂量区域与肿瘤靶区形态一致,从而提高肿瘤照射剂量,达到保护肿瘤周围正常组织的目的[13]。而在临床寻找与非小细胞肺癌三维适形放疗疗效及预后有关的生物标志物尤为关键[14]。

sTim-3是一种通过整合素介导胞外域脱落释放出细胞的肿瘤细胞免疫逃逸因子,主要由7个外显子组成,在人类免疫细胞中表达[15];sTim-3上升可以控制自然杀伤性T淋巴细胞活性,从而降低机体中结核杆菌的吞噬以及清除能力,使得细胞免疫功能不足[16];sTim-3还参与多种癌症发生发展,在肝细胞癌患者血清中显著升高,其水平可以预测患者的长期生存预后[17]。有研究表明,sTim-3在肺结节患者血清中显著升高,与患者病情有一定关系[16];sTim-3在非小细胞非小细胞肺癌中显著升高,与TNM分期(Ⅲ期和Ⅳ期)、年龄相关,肺腺癌和肺鳞状细胞癌中sTim-3的表达均高于健康受试者,晚期组sTim-3血清水平也明显高于早期组[18]。本研究中,肿瘤直径>3.0 cm、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为低分化的非小细胞肺癌患者血清sTim-3表达高于肿瘤直径≤3.0 cm、TNM分期为I～Ⅱ期、分化程度为中高分化的非小细胞肺癌患者,与上述研究相似,说明sTIM-3参与非小细胞肺癌的发生发展。

SPINK1由胰腺腺泡细胞分泌,作为对抗腺泡和胰管中胰蛋白酶原过早活化的第一道防线,也称为胰腺分泌型胰蛋白酶抑制剂,其功能是抑制丝氨酸蛋白酶活性(如胰蛋白酶),参与炎症和细胞增殖,还与癌症发生发展有关[19];SPINK1与EGF结构相似,可与其受体结合后激活EGFR信号通路参与上皮间质转化[20];SPINK1在非小细胞肺癌组织中表达增加,可以作为非小细胞肺癌的潜在生物标志物[21];SPINK1在肺腺癌组织中上调,还是生存率低的独立预后因素[8]。本研究中,肿瘤直径>3.0 cm、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为低分化的非小细胞肺癌患者血清SPINK1表达水平高于肿瘤直径≤3.0 cm、TNM分期为I～Ⅱ期、分化程度为中高分化的非小细胞肺癌患者,与上述研究相似,说明SPINK1在非小细胞肺癌发生过程中起着重要的作用。

此外,本研究结果显示,在接受三维适形放疗后,血清sTim-3、SPINK1低水平组非小细胞肺癌患者总有效率高于对应的高水平组,表明高水平的sTim-3、SPINK1会促进非小细胞肺癌发展,影响三维适形放疗疗效,二者表达越高疗效越差;Kaplan-Meier法分析结果显示,sTim-3、SPINK1高水平组非小细胞肺癌患者生存率低于对应低水平组;COX回归分析表明,sTim-3、SPINK1、TNM分期、分化程度是影响非小细胞肺癌患者预后的危险因素,上述结果说明sTim-3、SPINK1高水平预示着预后不良,二者会促进非小细胞肺癌病情进展,揭示二者表达可指导临床医生评估患者预后,制定相应治疗方案。

综上所述,非小细胞肺癌患者血清sTim-3、SPINK1高表达与患者三维适形放疗疗效以及预后有关。本研究尚存在局限性,如未探索血清sTim-3、SPINK1对非小细胞肺癌的具体调控机制,样本量较少以及随访时间较短等,后续会扩大样本量和延长随访时间进一步深入研究。