小儿分泌性中耳炎耳积液中CD44和TLR4表达与腺样体肥大的相关性

赵颜颜, 张素娜, 胡浩磊, 张鹏臻, 赵佳, 李硕, 李谊△

1中国人民解放军联勤保障部队第九八八医院耳鼻咽喉头颈外科(河南郑州 450007); 2河南中医药大学第一附属医院耳鼻喉科(河南郑州 450052)

分泌性中耳炎是一种非化脓性中耳炎症性疾病,是最常见的儿科疾病之一,也是儿童听力损失的最常见原因[1]。该病主要表现为内鼓室内腔积液,并伴有耳鸣、耳痛、耳肿胀、听力损失症状,对儿童的交流和行为模式产生负面影响[2]。目前分泌性中耳炎的发病机制尚不明确,可能与咽鼓管功能障碍、免疫应答、细菌感染、胃食管反流等因素有关,而腺样体肥大是导致咽鼓管功能障碍的主要因素,它可能机械地阻塞咽鼓管,其腺样体肥大部位可能作为生物膜形成细菌的储存库,导致向咽鼓管和中耳逆行感染[3]。据报道,分泌性中耳炎发生后患儿机体内大多会出现炎症反应及免疫调节功能紊乱现象。分化簇44(CD44)是一种多功能分子,其通过改变中耳黏膜生长和中性粒细胞募集在中耳炎发病机制中起重要作用[4]。Toll样受体4(TLR4)在中耳黏膜中的上皮细胞表达,也通过浸润白细胞表达,在调节急性炎症中发挥重要作用[5]。因此本研究选取80例小儿分泌性中耳炎患儿为研究对象,探究患儿耳积液中CD44和TLR4表达水平与腺样体肥大的相关性,以期为临床上诊治此病提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 纳入本院2022年1月至2023年1月收治的80例小儿分泌性中耳炎患儿为观察组,选取同期接受健康体检的100例健康儿童为对照组。其中观察组男42例,女38例;年龄2～8岁,平均(4.03±1.02)岁;腺样体肥大53例,腺样体正常27例;急性51例,慢性29例;对照组男51例,女49例;年龄2～8岁,平均(4.10±0.98)岁。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院伦理审查委员会批准(988YY2021067LLSP)。

纳入标准:(1)符合儿童分泌性中耳炎指南中的诊断标准[6],病程≤3个月为急性,病程>3个月为慢性;腺样体肥大判定标准:行鼻咽X线侧位片检查,结果显示腺样体阴影部分最凸出的点至枕骨斜坡平行线垂直距离与硬腭后缘至翼板根部距离之比≥60%;(2)年龄2～8岁;(3)患儿家属知晓研究并签署知情同意书。

排除标准:(1)耳痘病史;(2)鼓膜穿孔;(3)任何耳毒性药物的摄入史;(4)先天性耳畸形;(5)任何外耳疾病。

1.2 方法 外周血及耳积液中CD44、TLR4表达水平的测定:清晨抽取对照组和观察组患儿静脉全血5 mL,低分子肝素抗凝固,保存备用。另外在耳内镜监视系统下在患儿骨膜紧张部做穿刺,取0.5 mL中耳积液,保存备用。利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测对照组儿童外周血和观察组患儿外周血、耳积液CD44、TLR4水平,严格按照试剂盒说明书进行检测,ELISA试剂盒购自天根生化科技有限公司。

1.3 统计学方法 所有数据均使用SPSS 25.0软件完成统计分析。计数资料用例(%)表示,组间比较采用2检验;计量资料用表示,组间比较采用独立样本t检验或方差分析;耳积液中CD44与TLR4表达水平的相关性分析采用Pearson法;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析小儿分泌性中耳炎耳积液中CD44、TLR4表达对腺样体肥大的预测价值。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CD44、TLR4在对照组儿童外周血及观察组患儿外周血、耳积液中的表达水平比较 CD44、TLR4在观察组患儿外周血、耳积液中的表达水平相较于对照组儿童外周血中的表达水平显著升高(P<0.05);CD44、TLR4在观察组患儿耳积液中的表达水平相较于观察组患儿外周血中的表达水平显著升高(P<0.05),见表1。

表1 CD44、TLR4在对照组儿童外周血及观察组患儿外周血、耳积液中的表达水平比较

2.2 CD44、TLR4在观察组不同质地耳积液中表达水平比较 CD44、TLR4在观察组浆液性耳积液中的表达水平相较于黏液性耳积液中的表达水平显著降低(P<0.05),见表2。

表2 CD44、TLR4在观察组不同质地耳积液中的表达水平比较

2.3 CD44、TLR4表达水平与观察组中耳炎急慢性的关系 CD44、TLR4在观察组慢性中耳炎患儿耳积液中的表达水平相较于急性中耳炎耳积液中的表达水平显著降低(P<0.05),见表3。

表3 CD44、TLR4在观察组急慢性中耳炎中的表达水平比较

2.4 CD44、TLR4表达水平与观察组患儿腺样体肥大的关系 CD44、TLR4在腺样体肥大中耳炎患儿耳积液中的表达水平相较于腺样体正常中耳炎耳积液中的表达水平显著升高(P<0.05),见表4。

表4 CD44、TLR4表达水平与观察组患儿腺样体肥大的关系

2.5 小儿分泌性中耳炎耳积液中CD44、TLR4水平之间相关性 小儿分泌性中耳炎耳积液中CD44和TLR4表达水平呈正相关(r=0.516,P=0.000),见图1。

图1 CD44、TLR4水平相关性分析

2.6 小儿分泌性中耳炎耳积液中CD44、TLR4表达对腺样体肥大的预测价值 ROC曲线显示,CD44、TLR4诊断腺样体肥大的曲线下面积(area under curve, AUC)分别为0.812、0.764,CD44、TLR4二者联合诊断腺样体肥大的AUC为0.867,高于二者单独诊断腺样体肥大的AUC(z=2.271、7.853,P<0.05),且二者联合诊断敏感度、特异度分别为88.70%、80.40%,具有较高诊断价值。见表5、图2。

图2 CD44、TLR4预测腺样体肥大的ROC曲线

表5 各项指标对腺样体肥大的诊断效能

3 讨论

中耳炎是最常见的儿童疾病之一,也是儿童听力损失的最常见原因,它可能表现为急性中耳炎,伴有中耳黏膜骨膜炎症的体征和症状迅速发作,或表现为伴积液的中耳炎(分泌性中耳炎),其特征是鼓膜腔内有液体,无急性耳部感染体征[7]。分泌性中耳炎的确切发病机制尚不清楚,但已有研究表明其病因是多因素的,目前确定了两个非常重要且相互关联的因素,即腺样体肥大和咽鼓管功能障碍[8]。腺样体是一种产生抗体的淋巴组织,位于鼻咽上部的后部,靠近咽鼓管的开口处,它在儿童时期生长,在3～7岁的儿童中显得最大,并在青春期开始消退,7岁以下的儿童由于鼻咽和鼻腔开口的体积相对较小,更容易出现腺样体肿大的症状[9]。当其出现腺样体肥大现象后会阻塞咽鼓管,由于咽鼓管是鼻咽和中耳一个通道,如果存在梗阻、通畅异常或纤毛功能差,气体被吸收,耳内压力变得不平衡,导致中耳鼓膜腔内的液体特异性漏出,最终导致此病发生[10]。与成人相比,儿童发生中耳感染的风险通常更高,因为他们的咽鼓管在解剖学上更窄且水平放置,并且神经肌肉功能不发达,更容易导致感染转移和压力功能障碍的倾向[11]。因此研究小儿分泌性中耳炎与腺样体肥大之间的关系至关重要。

研究表明,炎症在中耳炎的发展和发展中起着不可或缺的作用,中耳炎随着炎症细胞的增加而持续存在,其特征在于大量中性粒细胞和巨噬细胞渗入间质间隙,活检中炎症细胞的数量与疾病的严重程度密切相关[12]。CD44是一种广泛表达的细胞黏附分子,是细胞外基质成分的主要受体[13]。在炎症条件下,CD44在血管内皮、平滑肌和炎症细胞中被上调并被功能激活[14]。据报道低分子量透明质酸(HA)与CD44之间的相互作用可能在癌症相关炎症中起作用,促进与炎症相关的HA-CD44信号传导可能会促使巨噬细胞浸润并降低乳腺癌患者的生存率[15]。前人研究发现CD44参与介导噬中性粒细胞浸润为主的早期中耳炎炎症反应,可能是由于细胞黏附分子(CD44)促进了噬中性粒细胞与血管内皮的黏附与迁移,从而导致中耳炎炎症反应发生[16]。本研究分析CD44细胞在小儿分泌性中耳炎患儿耳积液中的表达水平,结果发现CD44在观察组患儿外周血、耳积液中的表达水平显著高于对照组儿童外周血中的表达水平;在观察组患儿耳积液中的表达水平显著高于观察组患儿外周血中表达水平显著升高;且其表达水平与耳积液性质、病情急慢性及腺样体大小密切相关,提示可能中耳炎发生后机体噬中性粒细胞黏附、迁移所致的炎症反应促进CD44细胞分泌。

TLR4是一种具有马蹄形细胞外结构域的单一跨膜蛋白,其中包含许多富含亮氨酸的重复序列[17]。TLR4不仅在免疫细胞(如巨噬细胞和树突状细胞)的细胞表面表达,还在调节急性炎症中发挥作用[18]。TLR能够识别发病机制和损伤相关的分子模式,促进非免疫白细胞的活化,在先天免疫系统中发挥重要作用,并触发微生物病原体中的促炎信号通路[19]。据报道TLR炎症通路是中耳炎的重要参与者,TLR水平升高会引起不同的下游信号级联反应,如c-Jun N端激酶(JNK),该酶负责产生许多促炎细胞因子并诱导细胞黏附、增殖、血管生成和凋亡,其导致转录因子活化B细胞的核因子κ轻链增强子(NF-κB)的晚期激活和诱导,促进下游促炎细胞因子和趋化因子的产生,进而加重中耳炎的严重程度[20]。本研究分析TLR4在小儿分泌性中耳炎患儿耳积液中的表达水平,结果发现TLR4在观察组患儿外周血、耳积液中的表达水平显著高于对照组儿童外周血中的表达水平;在观察组患儿耳积液中的表达水平显著高于观察组患儿外周血中表达水平显著升高;且其表达水平与耳积液性质、病情急慢性及腺样体大小密切相关,提示中耳炎发生后患儿机体可能会出现严重的免疫系统功能紊乱现象,TLR4基因可能被激活,表现为TLR4表达水平上调。此外,本研究中,CD44、TLR4二者联合诊断腺样体肥大的AUC为0.867,敏感度为88.70%,高于其单独诊断的AUC和敏感度,且特异度可达80.40%,提示二者联合可一定程度提高对腺样体肥大诊断的敏感度,增加对腺样体肥大诊断的效能。

综上所述,CD44、TLR4均在小儿分泌性中耳炎耳积液中的表达水平上调,且相较于腺体正常的患儿,腺体肥大的患儿耳积液中CD44、TLR4表达水平显著升高,与腺样体肥大密切相关,且CD44、TLR4二者联合诊断腺样体肥大的效能高于其单独诊断。但是本研究仅纳入本院收治患者,可能存在地域差异影响研究结果。

利益相关声明:所有作者均声明不存在利益冲突。

作者贡献说明:赵颜颜、张素娜、赵佳参与实验操作、论文撰写;胡浩磊、李硕、张鹏臻参与数据整理、统计分析;李谊负责研究指导、论文修改。