高效液相色谱法测定柚子农药残留

蒋轩 张英明 罗丹 黄翠莉

柚子作为最大的柑橘类水果，在我国已经有3000多年的栽培历史，品种也越来越丰富，凭借酸甜适中、含糖量高、易存储等特点，一直享有“天然罐头”的美誉。新鲜柚子虽然好吃，但是柚子皮很容易有农药残留，对人体健康造成潜在风险。因此，开发一种高效准确的方法用于柚子中农药残留的测定具有重要意义。目前，高效液相色谱法被广泛应用于农产品中农药残留的分析，具有较高的灵敏度，而且分离效果好，操作简单。本文应用高效液相色谱法测定柚子农药残留，能满足对柚子农药残留检测的需求。

1.材料和方法

1.1材料与试剂

在研究中，随机选择了3个不同的市场，并从每个市场购买了1千克的柚子样品，将这些样品带回实验室后，使用匀浆机对其进行匀浆处理，将处理后的样品装入密封袋中。为了保持样品的新鲜度和稳定性，将密封袋放置在超低温冰箱中（-70℃）备用。

辛硫磷99.7%、吡虫啉98.5%、多菌灵99.5%和除虫脲98.8%标准品；甲酸、甲醇、乙腈为色谱纯；纯净水、无水硫酸钠、正己烷、弗罗里硅土、粉末活性炭、甲苯等为分析纯。

1.2仪器设备

液相色谱质谱联用仪；冷冻高速离心机；电子天平ME104E/02；HZQ-Q恒温振荡器；Milli-Q超纯水纯化系统；中性氧化铝柱（500mg/3mL）。

1.3试验方法

1.3.1配制溶液

由于光照可能导致光敏性农药分解或降解，从而影响溶液的浓度和准确性。因此，这些溶液要避光、低温保存，以减缓可能的化学反应速率，确保溶液的稳定性。有效期为30天。

（1）配制标准储备液。精准性称量1.1中标准品，并在其中滴加乙腈溶液，充分搅拌进行溶解，转移到100mL容量瓶中定容，配制成质量浓度为500mg/L的标准储备液。

（2）配制标准中间液。取配制的标准储备液1mL，利用乙腈定容到10mL，配制成质量浓度10mg/L 的标准中间液。

（3）甲酸溶液。首先准备500mL的水，然后取出0.5mL的甲酸，缓慢地滴入500mL的水中，充分搅拌。

（4）乙腈溶液。首先准备400mL的水，然后取出600mL的乙腈，缓慢地倒入400mL的水中充分搅拌。

1.3.2样品处理

精准称取25g柚子样品，将其放入容量为50mL的离心管中，加入20mL乙腈，先进行2分钟高速匀浆，然后在常温状态下静置5分钟，之后加入6gNacl，充分震荡1分钟。置于冷冻高速离心机中，设置转速为4000r/min，实施5分钟离心操作。将上清液10mL通过移液管吸取后，置于梨形瓶中的中性氧化铝柱中进行净化收集流出液，应用1mL乙腈淋洗中性氧化铝柱，洗出在柱中残留的杂质。然后中性氧化铝柱中的溶液放入40℃氮气中，通过气流将溶液吹干，直到溶液接近干燥状态，以此去除溶剂并浓缩样品。接下来，将适量的甲醇加入梨形瓶中的中性氧化铝柱中，与样品进行溶剂交换。根据需要，将溶液体积调整到5mL进行定容，然后将溶液通过0.45?m微孔滤膜过滤，以去除残留的固体颗粒或杂质，最后实施高效液相色谱测定操作。

1.3.3样品净化

采取规格为30cm×15mm的玻璃层析柱进行样品净化操作，在净化之前，先应用15mL的正己烷预淋洗湿润玻璃层析柱，进而将厚度为4cm的无水硫酸钠、4g弗罗里硅土、0.8g粉末活性炭混合物、厚度为4cm的无水硫酸钠依次加入玻璃层析柱中，然后应用3：1的乙腈：甲苯混合液作为淋洗液，使用20mL进行洗脱处理，收集洗脱液，将其放置旋转蒸发仪中，设置温度为35℃条件下，然后开启仪器，直至近干后冷却应用甲醇定容。

1.3.4测定条件

（1）使用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱，规格为4.6mm×250mm，粒径为5.0?m。

（2）流动相试验：试验过程中选择的流动相分别是①甲醇：水=75：25（V：V）②乙腈：水=75：25（V：V）③甲醇：水= 65：35（V：V）④甲醇：水= 85：15（V：V），之后设置检测条件为流速1.0mL/min，波长为280nm。依据检测结果可得出，尽管②为流动相时可检测出四种农药残留，但是有两种无法分开。之后经过检验后得出，②为流动相时吡虫啉与多菌灵的峰值时间相接近，只差0.086分钟。而选择甲醇：水为流动相时，①的峰形较为对称，保留时间比较均匀，而且没有托峰。为了进一步判定流速的选择，在试验过程中，针对①流动相设置流速为0.5mL/min、1.0mL/min、1.5mL/min，得出色谱图，从中可以得出流速为0.5mL/min时保留时间较长，而且峰形不够对称；流速为1.5mL/min时保留时间较短，但是分开效果较差，峰形也不对称；流速为1.0mL/min时，保留时间较短，分开效果良好，峰形也较为对称。

（3）测定条件确定：依据上述结果可得出，流动相及其流速对保留时间、分离度等影响较大，而且保留时间较短时，分开效果最佳，峰形也最对称，没有托峰、峰尾的情况出现。因此，测定条件确定为使用甲醇和水的混合物作为流动相，混合比例为甲醇：水= 75：25（V：V），设置流速为1.0mL/min，检测波长280nm，设置进样量为10?L，设置柱温为30℃。

2.结果与分析

2.1检测波长确定

使用三维检测器对所测定的4种农药进行扫描，结果顯示225nm处辛硫磷的吸收较大，且基线噪音小，色谱峰信噪比处于理想状态，因此选择225nm作为辛硫磷的检测波长；吡虫啉在270nm处的吸收较大，基线噪音小，因此选择270nm为辛吡虫啉的检测波长。采取同样方式对多菌灵和除虫脲的检测播放进行分析，发现前者为210nm、后者为254nm的波长比较合适。

2.2线性关系

分别应用移液枪吸取标准中间液0.02mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL于容量瓶中，定容至10mL，制成0.1?g/mL、0.5?g/mL 、1.0?g/mL 、2.5?g/mL 、5.0?g/mL、10.0?g/mL 的标准品样液，将配置好的这些样液按照浓度依次装入样品瓶中，应用高效液相色谱仪进行检测，根据上述的测定条件进行测定，测定结果以因变量峰面积（y）和自变量浓度（X）绘制成标准曲线，使用最小二乘法计算回归方程及相关系数，如表1所示，发现这四种农药在0.02-0.30mg/mL的线性关系良好，而且相关系数均维持在0.999以上。

2.3检出限和定量限

根據线性范围最低的质量浓度进行进样操作，将检测限和定量限的信噪比分别设置为3：1和10：1，得出这4种农药的检出限和测定限，结果如表2所示。

2.4回收率和精密度

选择新鲜的柚子作为空白样，并在其中分别添加0.2、0.5、1.0mg/mL的辛硫磷标准品、吡虫啉标准品、多菌灵标准品和除虫脲标准品，根据回收率测定方法，通过添加平行样，可以计算加标回收率和精密度，以评估方法的准确性和重复性。结果显示，平均回收率在83-105.8%之间，RSD在0.5-3.4%之间，如表3所示。从这可以看出，这4种农药的回收率比较高，而且标准偏差值较小。以此可以得出，应用高效液相色谱法对柚子农药残留进行测定，精确度和精密度较高。

结论

本文选择柚子作为研究对象，通过合理选择材料与试剂，明确溶液配制方法，做好样品处理和净化工作，确定测定条件，构建了一种用于柚子辛硫磷、吡虫啉、多菌灵、除虫脲四种农药同时测定的高效液相色谱法，使用乙腈溶液作为溶剂，通过高效液相色谱仪进行测定，并采用外标法进行定量分析，获取较高的试验灵敏度、精准度。总的来说，高效液相色谱法在柚子农药残留测定中具有高效性和简便性，易上手操作，十分适合辛硫磷、吡虫啉、多菌灵、除虫脲等农药残留的检测。

基金项目

本文系2022年度广东质检院内部科技项目“柚皮宴”预制菜食品安全关键指标标准化应用研究（2022GQI09）阶段性成果之一。

*通讯作者

蒋轩（1989.02-），男，汉族，湖南祁阳人，硕士研究生，中级工程师；研究方向：食品及食品相关产品安全检验与风险监测。