全自动血型分析仪与微板法在ABO血型筛查中的应用研究

杨宇 辽宁省健康业产业集团阜新矿总医院输血科 （辽宁 阜新 123000）

内容提要： 目的：探究全自动血型分析仪与微板法在ABO血型筛查中的应用价值。方法：选择本院2022年1月～2023年4月收集到的献血者进行课题研究，80例献血者均作研究对象，采集所有研究对象乙二胺四乙酸二钾抗凝样本80份，分别开展微板法检测和全自动血型分析仪检测，对血型筛查检测结果、ABO血型正反定型现象、O细胞凝聚不规则抗体出现情况进行对比，分析不同检测方法的临床应用价值。结果：全自动血型分析仪对样本亚型漏检率偏低，O细胞凝聚率偏高，但两种方法检出率差异不明显（P＞0.05）；全自动血型分析仪ABO亚型、正反定型不符率、抗体降低率略高，正常性血型率偏低，但组间数据差异不显著（P＞0.05）；全自动血型分析仪对O细胞凝聚不规则抗体的检出率明显高于微板法（P＜0.05）。结论：全自动血型分析仪和微板法均能够用于ABO血型筛查过程中，但前者筛查有效性和安全性更高，可以更好地检出不规则抗体，应用前景更加广阔。

人体输血治疗在临床治疗中并不少见，受输血的免疫刺激影响，机体可产生外源红细胞抗原的血型抗体，红细胞抗体与相关抗体相互结合后，会发生机体溶血现象，直接影响患者输血安全性，降低输血治疗效果，甚至会对血型定型和交叉配血筛查工作带来不良影响[1]。通常在输血治疗前，会对ABO和RhD血型进行鉴定，人体血型的主要调控基因在于血型基因，借助血型抗原展现遗传多态性特征，实际血型鉴定过程中，受多种因素（如ABO亚型、不规则抗体、抗体减弱等）的影响，ABO血型正反定型可能存在差异，影响临床准确鉴定血型[2,3]。U型微板法检测血型的操作相对复杂繁琐，经济成本高，容易受到客观人为因素的干扰，目前，输血技术逐渐成熟，血型筛查检验工作在临床中逐渐走向快速化、自动化、标准化，使得全自动血型分析仪备受临床关注[4]。为了进一步分析全自动血型分析仪和微板法在ABO血型筛查中的应用可行性，本文以2022年1月～2023年4月收集到的献血者为样本进行课题研究，现报道如下。

1.资料与方法

1.1 临床资料

本次研究在本院中开展选择2022年1月～2023年4月本院收集的献血者，总计80例，其中男性38例，女性42例，年龄23～51岁，平均（34.37±4.02）岁。采集每位研究对象乙二胺四乙酸二钾抗凝2mL作为研究样本，采集样本12h后完成血型筛查鉴定工作。医学伦理委员会审核相关课题资料，批准且大力支持；所有研究对象知晓研究目的，表示配合，签署知情同意书。

1.2 方法

对所有抗凝样本进行离心处理，时间15min，转速控制3000转/min，之后分别开展微板法和全自动血型分析仪检测。

微板法检测：结合微孔板红细胞凝聚法的相关原理，应用U型微孔板和全自动式加样仪器予以加样操作，即把50μL血清和50μL 4%红细胞向每个孔位内注入，完成正定型操作，每个孔位内注入50μL ABO反定型红细胞和50μL ABO反定型血清，完成反定型操作，加样处理之后，在医用低速率离心器内放置U型微孔板，调整转速1700r/min，实行离心操作，时间3min即可，然后放在振荡孵育仪器内震荡，震荡时长4min，速率120次/min，震荡后需要静置3min，借助620nm波长酶标仪比色，阴性临界值不足0.6，处在不凝聚状态中，阳性临界值超过0.8，处在凝聚状态中，灰区临界值0.6～0.8。

全自动血型分析仪：参照微孔板红细胞凝聚法的相关原理，全面按照全自动血型分析仪说明书进行装卸，自动式读码，加样孵育，经电脑数据传输、处理以及CDD图分析处理，对试验结果进行判读和打印等操作。在加样仪器内放置抗A、抗B、抗D、抗A细胞、抗B细胞、抗O细胞和盐水，并在孔位内注入1.6%红细胞、抗A、抗B、抗D和盐水，容量均是25μL，完成正定型操作，对血清进行2倍稀释处理，取20μL+30uLABO反定型红细胞向孔位内注入，完成反定型操作。完成加样操作后，将样本放置在36°C～38°C环境中，孵育1h，借助全自动血型分析仪对相关参数进行判读，如SPC、LIA、P/C，其中SPC是主要参数，阴性即SPC值＞10，处于不凝固状态，阳性即SPC值＜10，处于凝固状态，临界点即SPC值=10，比较可疑。如果两种方法对同一样本的正反定型检测结果存在差异，需进一步开展试管法、吸收放散法或者微柱凝胶法深入检测。

以上仪器或试剂来源信息如下：上海血液生物医药有限公司抗A 单克隆血型定型试剂（20150710）；上海血液生物医药有限公司抗B单克隆血型定型试剂（20150711）；上海血液生物医药有限公司人ABO 反定型用红细胞试剂（20165319）；石家庄四药有限公司0.9%生路盐水；美国Beckman Coulter Pk7300全自动血型分析仪和梯度V型底微板10×12；瑞士Hamilton公司Microlab STAR全自动加样仪；河北白洋淀离心机厂医用低速离心机；德国BMG Labtech公司THERMPO star震荡孵育仪器；奥地利Anthos公司Zenyth 340rt酶标仪。

1.3 观察指标

对两种方法血型检测结果进行统计，对比血型错误率、亚型漏检率、O细胞凝聚率，同时对ABO血型正反定型和O细胞凝聚不规则抗体现象进行密切观察，并对比。

1.4 统计学分析

研究样本的统计工具选用SPSS26.0，计量资料符合正态分布，用（±s）描述，行t检验；计数资料的描述方法采用百分率，行χ2检验；P＜0.05为组间数据存在统计学差异。

2.结果

2.1 血型检测结果分析

两种方法尚未出现血型检查错误现象，全自动血型分析仪对样本亚型漏检率偏低，O细胞凝聚率偏高，但与微板法检查结果相比，差异并不显著（P＞0.05）。见表1。

表1.两种方法的血型检测结果比较[n(%)]

2.2 ABO血型正反定型检测结果分析

相较微板法，全自动血型分析仪ABO亚型、正反定型不符率、抗体降低率略高，正常性血型率偏低，但经过统计分析，组间数据差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2.两种方法ABO血型正反定型检测结果比较[n(%)]

2.3 O细胞凝聚不规则抗体检查结果分析

全自动血型分析仪对O细胞凝聚不规则抗体的检出率显著较微板法更高（P＜0.05）。见表3。

表3.两种方法对O细胞凝聚不规则抗体检查的结果比较[n(%)]

3.讨论

临床危重疾病救治过程中，常常采用输血治疗，应用意义重大，而有效输血的基本条件是准确鉴定血型。对于健康人群来说，血液内不规则抗体存在人数也不少，正是因为不规则抗体的出现，患者溶血性输血反应发生概率显著提升，鉴于此种原因，临床需要在输血治疗前，积极筛查血型与不规则抗体情况，确保患者安全输血[5]。

现阶段，试管法、微板法、全自动血型分析仪等均是临床血型筛查鉴定的重要手段，其中试管法应用在ABO血型和RhD血型检测工作中，精准度较高，但鉴定样本量较大，难以迅速完成筛查工作，规范性特征并不突出，甚至可能因人为客观因素造成检验结果偏差，增加临床漏诊机会[6]。微板法即半自动检测法，可以对大批量样本进行检测，但反应介质盐水经过室温环境，会出现轻微凝聚现象，增加抗体检测难度，导致血型鉴定结果存在异常；相较之，全自动血型分析仪法极具自动化、规范化、标准化特征，经自动化模式下的血型分析仪器开展血型鉴定工作，可减轻检验人员的工作量，监控状态下开展相关检测工作，流程十分规范，可监督性突出，与此同时，血型反定型温度维持在36°C～38°C，可在很大程度上降低机体免疫球蛋白M型冷抗体呈现不同正反定型现象的发生机率，可以对大批量检测样本进行筛查，处理速度比较快，能够良好筛查和判定ABO血型和RhD血型及不规则抗体，操作简单便捷，不会因人为因素而出现异常现象，良好弥补微板法的检测不足，大大提高临床检测准确性，降低血型鉴定的错误率和漏检率[7]。另外，全自动血型分析仪实际检测过程中，仅需二分之一试管法和微板法检测试剂容量即可完成鉴定工作，明显节约检测成本，不会过度增加社会和患者经济负担[8]。除此之外，全自动血型分析仪具有一体化模式特征，加样、分配试剂、离心震荡、图像分析、图像处理和扫描、数据输出等检验流程规范明确，不会引起交叉污染问题，减少检验人员的工作量，降低其工作强度，亦可保证整体血型筛查效果[9]。

在本次研究中，微板法血型错误率0，亚型漏检率3.75%，O细胞凝聚率8.75%，全自动血型分析仪血型错误率0，亚型漏检率1.25%，O细胞凝聚率20.00%，组间差异并不明显（P＞0.05）；微板法ABO亚型检出率10.00%，正反定型不符率18.75%，抗体降低率5.00%，正常性血型率6.25%，全自动血型分析仪ABO亚型检出率13.75%，正反定型不符率23.75%，抗体降低率7.50%，正常性血型率5.00%，对比显示差异并不显著（P＞0.05）；O细胞凝聚不规则抗体检测中，微板法共计检出不规则抗体13例，占比16.25%，全自动血型分析仪检出不规则抗体31例，占比38.75%，提示全自动血型分析仪检出率高于微板法（P＜0.05）。显然全自动血型分析仪相比微板法在ABO血型不规则抗体筛查中的意义重大。微板法检测介质盐水的应用，会增加稀有抗体或弱凝集抗体的检出难度，相较之，全自动血型分析仪反定型温度科学设定，可良好避免免疫球蛋白M型冷抗体所致的正反定型不同现象，提高诊断精确性，良好筛查不规则抗体。与赵鼎铭等[10]试验组O细胞凝聚不规则抗体检出率38.00%高于对照组16.00%（P＜0.05）研究结果基本一致。

总而言之，全自动血型分析仪和微板法均可筛查ABO血型，但全自动血型分析仪筛查安全性更高，可精确检出不规则抗体。