高效液相色谱法测定地氯雷他定口溶膜的溶出度和溶出曲线

李国相，车颜婷，高迪，苗晓莉，张成宇，林彬，张威风，2，3，何淑旺，3*（.北京达因高科儿童药物研究院有限公司，北京 0076；2.山东大学，济南 25000；3.山东达因海洋生物制药股份有限公司，山东 威海 264300）

地氯雷他定是先灵葆雅公司于1988年开发上市的三环长效型第3代组胺拮抗剂。本品为氯雷他定的活性代谢物，可通过选择性地拮抗外周H1受体，快速缓解季节性过敏性鼻炎的相关症状，如打喷嚏、流涕和鼻痒、鼻黏膜充血、鼻塞；还用于缓解慢性特发性荨麻疹的相关症状如瘙痒，并可减少荨麻疹的数量及大小[1-3]。

地氯雷他定口溶膜为改良型新药，还未上市，各国药典中均未收载该品种。《美国药典》（USPNF）[4-5]、国家食品药品监督管理局标准[6]、国家药典委公示稿[7]及相关文献[8-13]中均是关于地氯雷他定片和地氯雷他定口崩片的溶出度和溶出曲线测定，分别采用紫外分光光度法和HPLC法检验剂片或口崩片的溶出度和溶出曲线。紫外分光光度法专属性差、操作烦琐、耗时长，USP中地氯雷他定口崩片采用HPLC法测定溶出度，但流动相中磷酸二氢钾浓度较高，对色谱柱寿命影响较大。陈承贵等[11-12]采用HPLC法测定溶出度，但流动相用三乙胺调pH值，操作难且三乙胺有强烈氨臭，刺激性强，对色谱柱寿命影响也较大。严一铭[13]采用HPLC法测定溶出曲线，该方法与地氯雷他定片公示稿的有关物质测定方法一致，流动相盐浓度较低、无害环保且便于制备，但地氯雷他定保留时间在21 min左右，耗时长。本研究拟优化色谱条件，使地氯雷他定保留时间缩短至2.5 min左右，提高检测效率，进而满足样品大批量快速测定的质量控制需求。

1 仪器与试药

1260液相色谱仪（美国安捷伦公司），860DL药物溶出仪（LOGAN），分析天平（梅特勒托利多，精度：0.01 mg），地氯雷他定对照品（含量：99.9%，批号：100919-202105，中国食品药品检定研究院），地氯雷他定口溶膜（规格：5 mg，批号：230301、230302、230303，均为自制），乙腈和三氟乙酸为色谱纯，十二烷基硫酸钠、盐酸、醋酸钠、冰醋酸、磷酸二氢钾、氢氧化钠、氯化钠为化学纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：采用Agilent C8（4.6 mm×150 mm，3.5 μm）柱，流动相：乙腈-0.003 mol·L－1的十二烷基硫酸钠水溶液（称取十二烷基硫酸钠0.865 g，加1000 mL水溶解，加三氟乙酸 1 mL）（47∶53）；检测波长280 nm；流速1.5 mL·min－1；进样量10 μL；柱温35℃。

2.2 溶出试验方法

取本品6片，照溶出度测定法（2020年版《中国药典》四部通则0931第二法），以0.1 mol·L－1盐酸溶液900 mL为溶出介质，转速为50 r·min－1，依法操作，经30 min后取样。另取地氯雷他定对照品适量，精密称定，用0.1 mol·L－1盐酸溶液溶解并定量稀释成每1 mL约含5 μg的溶液。同法测定，计算每片溶出量。

2.3 溶出介质

根据《普通口服固体制剂溶出度试验技术指导原则》[14]并参考日本“药品品质再评价”工程[15-16]，采用不同pH的4种溶出介质，分别为0.1 mol·L－1盐酸溶液（取9 mL盐酸，加水稀释至1000 mL，混匀）、pH 4.0醋酸盐缓冲液（取醋酸钠1.22 g，冰醋酸2.46 g，用水溶解并稀释至1000 mL，冰醋酸调节pH值为4.0）、0.2 mol·L－1氯化钠溶液（取11.7 g的氯化钠，用水溶解并稀释至1000 mL）和pH 6.8磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾6.805 g，氢氧化钠0.896 g，加水稀释至1000 mL，混匀，氢氧化钠调节pH值为6.8）。

2.4 方法学考察

2.4.1 专属性 按处方比例配制空白辅料，用溶出介质溶解、稀释，滤过，取续滤液，测定。结果4种溶出介质中，空白辅料均不干扰本品溶出度的测定。色谱图见图1。

图1 0.1 mol·L－1盐酸溶液（A）、pH 4.0醋酸盐缓冲液（B）、0.2 mol·L－1氯化钠溶液（C）及pH 6.8磷酸盐缓冲液（D）专属性色谱图Fig 1 Chromatogram of specificity test in 0.1 mol·L－1 hydrochloric acid（A），acetate buffer pH 4.0（B），0.2 mol·L－1 sodium chloride aqueous solution（C），and phosphate buffer pH 6.8（D）

2.4.2 线性关系考察 精密称取地氯雷他定对照品14 mg，置100 mL量瓶中，加溶出介质溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液适量，用溶出介质稀释制成每1 mL中含地氯雷他定分别为0.6、1.7、2.8、4.5、5.6、6.7 μg的溶液。分别进样10 μL，以地氯雷他定质量浓度（μg·mL－1）为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y），绘制标准曲线，求得回归方程，结果见表1。地氯雷他定在0.6～6.7 μg·mL－1与峰面积呈良好的线性关系。

表1 地氯雷他定在不同溶出介质中的线性试验结果Tab 1 Linearity of desloratadine in different dissolution media

2.4.3 精密度考察 取对照品溶液（5.6 μg·mL－1）连续进样5次，结果在0.1 mol·L－1盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐缓冲液、0.2 mol·L－1氯化钠溶液、pH 6.8磷酸盐缓冲液中，地氯雷他定峰面积的RSD分别为0.15%、0.56%、0.070%、0.050%，表明仪器精密度良好。

2.4.4 重复性考察 取样品6份（批号：230301），按“2.2”项下方法分别配制溶液，在同一色谱条件下进样，结果在0.1 mol·L－1盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐缓冲液、0.2 mol·L－1氯化钠溶液、pH 6.8磷酸盐缓冲液中，地氯雷他定峰面积的RSD分别为0.55%、0.71%、0.37%、0.67%，表明该方法具有良好的重复性。

2.4.5 回收试验 精密称取已知量的辅料细粉适量，置100 mL量瓶中，加溶出介质溶解并稀释至刻度；精密量取2 mL，置50 mL量瓶中，共量取12份，3份一组，各组分别精密加入地氯雷他定对照品溶液（0.14 mg·mL－1）0.2、2.0、2.4 mL，加溶出介质溶解并稀释至刻度，进样测定，并采用外标法计算回收率，结果显示在0.1 mol·L－1盐酸溶液中平均回收率为100.4%，RSD为0.14%；在pH 4.0醋酸盐缓冲液中平均回收率为100.5%，RSD为0.72%；在0.2 mol·L－1氯化钠溶液中平均回收率为100.0%，RSD为0.61%；在pH 6.8磷酸盐缓冲液中平均回收率为100.3%，RSD为0.57%。

2.4.6 稳定性考察 取供试品溶液，在同一色谱条件下，分别于0、2、4、6、8、10、12、24 h测定8次，结果在0.1 mol·L－1盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐缓冲液、0.2 mol·L－1氯化钠溶液、pH 6.8磷酸盐缓冲液中，地氯雷他定峰面积的RSD分别为0.71%、1.2%、0.22%、1.2%。

2.4.7 滤膜吸附 取不同浓度供试品溶液，在同一色谱条件下，分别弃去0、1、2、3、4、6、8、10 mL，考察峰面积的RSD，结果见表2。结果显示：50%浓度、100%浓度时本品均无滤膜吸附；10%浓度在0.1 mol·L－1盐酸溶液中无滤膜吸附；在0.2 mol·L－1氯化钠溶液中弃去1 mL后，本品无滤膜吸附；在pH 4.0醋酸盐缓冲液和pH 6.8磷酸盐缓冲液中弃去2 mL后，本品无滤膜吸附。

表2 滤膜吸附试验结果Tab 2 Filtration membrane adsorption

2.5 样品含量测定

以4种不同溶出介质，按拟订溶出试验方法，转速为50 r·min－1，分别于5、10、15、30、45、60 min（0.1 mol·L－1盐酸溶液）或5、10、15、30、45、60、90、120 min（pH 4.0醋酸盐缓冲液、0.2 mol·L－1氯化钠溶液、pH 6.8磷酸盐缓冲液），取溶液1.5 mL，取续滤液作为供试液品溶液。另取地氯雷他定对照品适量，精密称定，用0.1 mol·L－1盐酸溶液溶解并定量稀释成每1 mL约含5 μg的溶液，计算每片溶出量并绘制溶出曲线。溶出量结果见表3及图2。

表3 3批样品在不同介质中的累计溶出度Tab 3 Cumulative dissolution of 3 batches of samples in different dissolution media

图2 地氯雷他定口溶膜在0.1 mol·L－1盐酸溶液（A）、pH 4.0醋酸盐缓冲液（B）、0.2 mol·L－1氯化钠溶液（C）及 pH 6.8磷酸盐缓冲液（D）的溶出曲线Fig 2 Dissolution of desloratadine oral soluble film in 0.1 mol·L－1 hydrochloric acid（A），acetate buffer pH 4.0（B），0.2 mol·L－1 sodium chloride aqueous solution（C），and phosphate buffer pH 6.8（D）

3 讨论

3.1 三氟乙酸用量考察

三氟乙酸用量分别为0.05%、0.1%、0.15%时，考察主峰拖尾因子，结果用量为0.05%时，主峰前延；用量为0.1%和0.15%时，主峰峰形较好，拖尾因子分别为1.12和0.98，保留时间分别为12 min和10 min，考虑三氟乙酸对柱子的影响，故选择用量为0.1%。

3.2 不同色谱柱考察

更换不同品牌、不同规格C8色谱柱，最后选择Agilent（4.6 mm×150 mm，3.5 μm）色谱柱，保留时间为6 min，快速出峰。

3.3 考察流动相比例

先后考察了乙腈和0.003 mol·L－1十二烷基硫酸钠水溶液的比例为44∶56、45∶55、46∶54、47∶53、48∶52、50∶50的影响，最终选用乙腈-0.003 mol·L－1十二烷基硫酸钠溶液（47∶53）作为流动相等度洗脱，主峰拖尾因子1.1，保留时间为2.5 min，满足要求。

3.4 溶出介质的筛选

根据日最大剂量5 mg推算，地氯雷他定可完全溶解在小于250 mL的pH 1.0～6.8范围水溶性介质中，属于高溶解性药物，故采用常规的4种介质作为其溶出介质，即0.1 mol·L－1盐酸溶液、pH 4.0醋酸盐缓冲液、水、pH 6.8磷酸盐缓冲液，但由于水介质中没有离子，无法使地氯雷他定从包覆辅料中置换出来，故选择在水介质中加入氯化钠，同时考察不同氯化钠浓度对溶出曲线的影响。结果选择0.2 mol·L－1氯化钠溶液作为溶出介质。

3.5 溶出装置的选择

参照各国药典[4-5]及标准[6-7]收载的地氯雷他定片或地氯雷他定口崩片溶出度项目规定，设置地氯雷他定口溶膜的溶出条件为桨法。考察采用铜丝作为沉降装置固定药膜和采用沉降篮固定药膜两种不同投样方法对本品溶出结果的影响。结果采用沉降篮固定药膜时5 min内溶出杯中已无漂浮的肉眼可见的口溶膜，而采用铜丝固定药膜时5 min时溶出杯内仍有少量肉眼可见的口溶膜，两种投样方式累计溶出度无明显差异，但沉降篮作为沉降方式投样测得的溶出结果RSD相对更好，故选择沉降篮作为沉降装置。

4 结论

本试验建立了一种HPLC法测定地氯雷他定口溶膜溶出度和溶出曲线的方法，专属性、线性范围、精密度、稳定性和回收试验结果均满足要求，且有耗时短、准确度高、重现性好等优点，提高检验工作效率的同时为大批量快速测定溶出曲线提供了可能。