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一例猪传染性胃肠炎的诊疗及防控

2024-03-11颜永群

山东畜牧兽医 2024年2期
关键词:患猪胃肠炎核酸

颜永群

(贵州省习水县动物疫病预防控制中心,贵州 习水 564600)

猪传染性胃肠炎(porcine transmissible gastroenterictis, TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒( porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)引起的一种急性、高度接触性肠道疾病,严重危害我国养猪业健康稳定发展。猪传染性胃肠炎的主要病原体是TGEV,其是一种冠状病毒科、冠状病毒属的病毒,光学显微镜下不可见,电镜负染可见。TGEV 不稳定,极端温度、强光、强紫外线可将其杀灭。6 h 光照即可有效除去TGEV。此外,TGEV 对氯仿、乙醚、甲醛、氢氧化钠等化学品敏感,常温下易被杀灭。TGEV 只有一个血清型,但目前已发现多个亚种,包括猪呼吸道冠状病毒。TGEV 可经过粪-口途径传播,定植于患猪的小肠上皮细胞,并迅速增殖,导致肠蠕动功能障碍、肠腔渗透压改变,大量溶质进入肠腔,阻碍养分吸收,增加粪便体积,导致患猪营养不良、腹胀腹泻,进而脱水死亡。本文通过对传染性胃肠炎的进一步分析,总结了有效的诊疗对策,旨在为相关技术人员提供参考。

1 病例探讨

1.1 患病情况分析

2023年2月,习水县某生猪养殖场的仔猪表现为急性呕吐、腹泻,症状提示可能患传染性胃肠炎。但养殖人员没有及时明确诊断,直接采用抗生素治疗。在注射抗生素后较短的一段时间内,仔猪的症状稍有好转,但由于药不对症,胃肠炎很快在猪场中传开,30 日龄仔猪病死率逐渐升高,高达80%。

1.2 临床症状

导致猪传染性胃肠炎的冠状病毒TGEV 潜伏期不定,少则1 天内,长则可至3 天。根据病猪与死猪的发病症状分析,TGEV 的传染性强,数天内即可导致大面积感染。TGEV 主要感染仔猪,尤其是1 周龄以内的仔猪,患猪表现为吃奶后突然呕吐,继之腹泻、脱水,呕吐物中常可见凝乳块,粪稀薄,有腥臭味,气味恶臭。由于严重高渗性脱水,患猪常口渴。若症状没有及时控制,仔猪会在2~5 d 内死亡。传染性胃肠炎的病死率约50%。另有部分仔猪尽管可治愈,但治愈后生长发育明显落后,经济价值减少。若成年猪、架子猪或后备猪感染TGEV,症状较仔猪轻,多表现为厌食、恶心、腹泻、体重不增或下降,时间一长,也会出现口渴和脱水症状。若母猪感染,可导致乳房功能减退、泌乳量减少;若孕猪感染,可导致流产。成年猪传染性胃肠炎较少致死[1]。

1.3 剖检变化

患猪死亡后,大体表现为腹部肿胀、皮肤干燥、眼眶凹陷、唾液分泌减少。尸检可见,死猪的胃底黏膜充血或弥漫性出血,微小血管淤血或破裂;仔猪胃腔内有时可见大量白色凝乳块。由于患猪肠蠕动功能下降,死猪肠腔常积气、积液,肠道内积存多量内容物、含或不含混合胆汁的泡沫或凝乳块。纵向切开死猪空肠,以生理盐水彻底清洗,并在培养皿中平铺,在生理盐水充分浸润的前提下,借助低倍镜观察,可见受病毒感染的肠段绒毛减少、杯状细胞分泌明显增加,这是猪传染性胃肠炎最显著的病理改变[2]。

图1 病死猪剖检图

2 临床诊断

猪传染性胃肠炎的鉴别诊断较为困难,因为仔猪的临床表现不典型,且容易与其他传染性消化道疾病如痢疾、伤寒、轮状病毒肠炎等混淆。这些消化道疾病均会出现呕吐、腹泻、脱水的表现。因此,为降低仔猪死亡率,应当及时明确诊断病原。

最易受TGEV 感染的仔猪月龄为1~4月龄。其中,以断奶期尤甚。感染后急性期,仔猪表现为便秘、腹痛、呕吐、腹胀等,进而皮肤黏膜淤血、出血。如果仔猪患慢性副伤寒,通常表现为食欲不振,排黄绿色、灰绿色或白陶土样血便,伴腥臭味。可从患猪血清样本中分离出沙门杆菌,即可与传染性胃肠炎鉴别。轮状病毒腹泻的潜伏期多为5~8 天,表现为呕吐、腹泻,体温不升或略升高,食欲不振。但轮状病毒腹泻为自限性疾病,且存在明显的季节性(夏秋、秋冬换季时多发),虽无有效对症治疗方式,但少有仔猪病死,除非继发感染,死亡率可升至10%以上。

当前,用于确诊传染性胃肠炎的金标准仍是病原学鉴定。临床常用的检测方法有ELISA、常规PCR 和荧光定量PCR。另外可将TGEV 分离培养,即提取患猪的部分小肠绒毛上皮细胞进行传代。初代病毒定植的细胞多继发水肿,呈球形或椭球形;若病毒多次传代,则细胞水肿加剧,可膨胀为半透明气球样。此外,可借助血清学检测的方式,即ELISA(酶联免疫吸附试验)或组化染色。多克隆抗体双夹心ELISA 也是近年来常用的血清学TGEV 分离方法[3]。

2.1 病料的处理及核酸的提取

提取TGE 核酸前,首先将少量小肠绒毛上皮提取并置于EP 管内,加入灭菌蒸馏水,搅拌,使二者均匀混合。组织液冻融至少3 次后,离心2 000 rpm、10 min,取上清液提取核酸。

2.2 病原核酸检测

离心引物探针序列和RT-PCR 酶反应液,进而借助移液枪将后者转移到引物探针中,充分混匀,制作RT-PCR 反应液。加样结束后,将反应管离心,并在荧光PCR 仪中接续如下操作:(1)反转录:50 ℃,15 min;(2)预变性:95 ℃,30 s;(3)变性:95 ℃,15 s;(4)延伸:60 ℃,20 s,步骤2~4 共40 个循环;60 min 时间,将FAM 荧光信号记录整理[4]。

2.3 结果与分析

借助核酸检测,可见待检RNA 的Ct 值为31.35,符合阳性对照,确定样品含有TGEV 核酸,表明送检小肠绒毛上皮细胞中含有TGEV。

3 防治措施

3.1 预防措施

为预防TGEV 扩散,首先应当做好猪场的管理工作,提供均衡配比、营养充足的饲料,以增强猪的免疫力。控制饲养密度,保持猪场通风、光照、温湿度适宜。如遇极端天气,或者气温降低,应当及时对猪场进行保暖。及时消毒,清理猪场内的排泄物,并使用2%~3%的强碱溶液消毒水槽和食槽。垫料应及时换新,避免发霉生菌。饲料饲喂前应检查质量,如发现霉变等,需及时更换,避免猪食用后发生胃肠道感染[5]。

其次,应当对孕猪、哺乳期母猪和仔猪进行保健防护。泌乳期的母猪可不限制喂养方式,使其自由觅食,以提升产奶量、提高产奶品质。新生仔猪必须及早饲喂母乳,且以初乳为佳。饲养员应对仔猪进行饮食护理。例如,出生后3 日内的仔猪要及时补充微量元素如铁,并添加饲料辅食。为提升仔猪的肠道功能和免疫能力,可在饲料中添加有机酸、抗生素和酶制剂。为避免仔猪积食,应减少单次摄食量,增加摄食频率。

最后,应当及时保护易感猪,即对未患病的生猪进行免疫接种。常选用的疫苗是胃肠炎-猪流行性腹泻二联灭活疫苗。在仔猪断奶后的7 d内,应当注射1 mL 二联疫苗。孕猪在预产期前的20~30 d 内,应注射4 mL 灭活疫苗,以降低仔猪感染率。

3.2 治疗措施

猪传染性胃肠炎需要及时治疗,以降低死亡率。治疗的原则是“消除炎症,清洁肠道,去除毒物,防止脱水”。同时,应隔离患猪,在一般治疗的基础上选用合适的对因疗法[6]。

3.2.1 中医治疗 用于治疗猪传染性胃肠炎的中药方剂,含有黄连18 g、大黄50 g、郁金36 g、白芍18 g、栀子18 g、黄芩15 g,煎药前需加入1 L 水。用量为200 mL/头,灌服,1 次/d。实践证明,中药可有效缓解胃肠炎症状,促进痊愈[7]。

本方剂的主要功效为清热解毒,主药为黄芩,主攻各类炎症,其余药物为辅药。白芍可缓解胃肠痉挛,解除腹痛、消肿去结、清热去火。黄连可清热解毒,主要用于治疗呕吐、腹泻等症状。栀子清热利湿,郁金活血止痛,大黄促进毒素排出。

3.2.2 西医治疗 使用西医药物治疗猪传染性胃肠炎为常规方法。首先,应当进行抗菌消炎,使用缓泻剂、轻泻剂促进肠道内毒物排出。待急性期后,可使用环丙沙星抗菌,按药物说明使用。如仔猪呕吐,可肌注维生素B12,连续2~3 d。如仔猪腹泻严重,可使用4 g 鞣酸蛋白加6 g 小苏打,溶于水中灌服。若患猪脱水严重,应当及时扩容,避免休克。具体方法是,使用5%的葡萄糖盐水40 mL 加1.3%小苏打溶液20 mL 进行腹腔注射,1 次/d,连续使用2~3 d。其次,应当重视患猪护理工作,减少患猪饲料摄入量,以减轻胃肠道负担。若腹泻严重,可适量使用木炭粉或蒙脱石散口服,以保护消化道。此外,也可以在患猪的饲料中增加黄连素等,避免继发细菌感染,加重病情[8]。

4 结语

多种致病因素或病原体可导致猪出现腹泻症状。其中,病毒的症状最重、致死率最高,且传播速度最快,难以有效预防和治疗,因此应格外受到关注。

在上文所述的猪场中,经常有患猪发生呕吐、腹泻、脱水等表现,且新生仔猪严重腹泻,乃至脱水死亡的病例频发,给猪场造成了严重的经济损失。同时,抗生素治疗效果不佳,考虑致病因素为病毒,但在病原学检测之前,尚不能明确具体的致病原因。而某些病原体导致的病理改变,在光镜下具有相似性,故而难以区分。

在荧光RT-PCT 等核酸检测技术的辅助下,组织材料中的TGEV 病毒核酸可以直接被提取,且不受外界环境、病毒载量等的影响。该技术具有较高的灵敏度和特异性,能够迅速确诊。在本案例中,经过荧光RT-PCR 检测,成功从患猪的小肠绒毛上皮细胞中检出TGEV。

猪传染性胃肠炎通常发病于春冬季节,但夏季也会有散在发病。在既往无TGEV 感染的猪场内,生猪体内无抗体,因此初次感染可呈暴发性。成年母猪较少患病,但仔猪、育肥猪易感染,且仔猪死亡率接近50%。既往曾有发病的猪场中,本病多表现为季节性流行,由于常规疗效差、难以及时鉴别诊断,因此常给猪场造成严重经济损失。

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