冠心病病人外周血微RNA-133b表达与预后的关系分析

刘少云，张红，刘艳静，吴玮，刘志敏

作者单位：1华北石油管理局总医院，a心内二科，b老年病科，河北 沧州 062552；2天津市第二医院内分泌科，天津 300143

冠心病为常见心血管疾病，病人在多种因素的作用下发生动脉粥样硬化，冠状动脉内膜下粥样斑块聚集引发冠状动脉狭窄甚至阻塞，导致心肌缺氧、缺血，严重者可导致死亡［1］。冠心病是目前全球死亡的主要原因之一，在中国其发病率、病死率均呈上升趋势，该病由高血压、高脂血症、吸烟、糖尿病等危险因素相互作用而引发［2］。有效加强冠心病预防，提高早期诊断、治疗、干预的成功率对于改善冠心病预后意义重大。微RNA（microRNA，miRNA）是长度18～24 nt 的小分子非编码RNA，在人体中发挥调控功能，其水平变化与心血管疾病密切相关［3］。微RNA-133b（microRNA-133b，miR-133b）在癌症中研究较为广泛，其在食管鳞癌组织中低表达，作为抑癌基因发挥作用，可能成为食管鳞癌的治疗靶点［4］；过表达miR-133b，可抑制结直肠癌细胞转移［5］。近年来发现，miR-133b与心力衰竭、心肌梗死等心血管疾病有关，心力衰竭病人血清miR-133b水平随着心功能分级升高而增加，miR-133b 水平可在一定程度上预测心衰病人病情严重程度［6］。miR-133b 与冠心病的关系研究较少，本研究拟探讨冠心病病人血清miR-133b水平及其与病人预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2019 年7 月至2021 年1 月于华北石油管理局总医院就诊的冠心病病人95例，其中稳定性冠心病（stable coronary heart disease，SACD）病人54 例为SACD 组，急性冠状动脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）41 例为ACS 组。冠心病病人纳入标准：（1）ACS 符合《急性冠脉综合征急诊快速诊治指南（2019）》［7］中的诊断标准，病人具有典型的缺血性胸痛症状；（2）SACD 符合2013年欧洲心脏病学会指南［8］中的诊断标准，ACS 后稳定的、无症状的阶段；（3）冠状动脉造影证实单支和（或）多支冠状动脉狭窄≥50%；（4）依从性良好，病人或近亲属知情同意；（5）临床资料完整。排除标准：（1）合并自身免疫疾病者；（2）合并精神异常、认知功能异常者；（3）合并血液系统疾病者；（4）妊娠期、哺乳期女性；（5）合并恶性肿瘤者。另选同期该院进行体检的健康人群60 例作为对照组，均无心血管疾病，排除标准与冠心病病人一致。收集所有研究对象的年龄、性别、高血压、糖尿病、吸烟史、身体质量指数及血脂异常情况。本研究经华北石油管理局总医院伦理委员会审批同意（批号20190322）。

1.2 方法

1.2.1 冠脉动脉造影成像分析根据Gensini 评分系统［9］评估冠心病病人动脉狭窄程度，0 分：无任何异常，1 分：狭窄＜25%，2 分：25%≤狭窄＜50%，4 分：50%≤狭窄＜75%，8 分：75%≤狭窄＜90%，16 分：90%≤狭窄＜100%，32 分：100%闭塞。不同冠脉评分系数，左主干病变×5.0；前降支远段×1.0，中段×1.5，近段×2.5；回旋支远段×1.0，中段×1.0，近段×1.5；右冠状动脉远段、中段及近段×1.0；小分支×0.5。最终积分为各分支积分总和。

1.2.2 血清miR-133b 水平检测采集所有研究对象的空腹肘静脉血3 mL，室温静置30 min，离心后取上层血清，-20 ℃保存待测。采用Trizol 试剂提取血清总RNA，并逆转录为互补DNA（cDNA），以cDNA 为模板进行实时荧光定量PCR 反应，在实时荧光定量PCR 仪上扩增miR-133b。采用2-ΔΔCt法计算血清miR-133b 水平。miR-133b 引物序列：正向5'-TTTGGTCCCCTTCAACCAGCTA-3'，反向5'-GTGCAGGGTCCGAGGT-3'，内参U6 引物序列：正向5'-TTAGCATGGCCCCTGC-3'，反向5'-TGCGTGTCGTGGAGTC-3'。

1.3 随访病人出院后进行随访，采用电话、微信或门诊等方式，共随访6个月，记录病人的主要心脏不良事件，包括死亡、非致死性心肌梗死、血运重建、新发狭窄及再狭窄。随访期间病人出现主要心脏不良事件，即为预后不良组（33 例）；未出现主要心脏不良事件，即为预后良好组（62例）。

1.4 统计学方法采用SPSS 24.0 软件处理数据。计量资料以描述，两组间比较采用两独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用SNK-q检验；计数资料以例（%）描述，采用χ2检验。采用Spearman 检验分析血清miR-133b水平与Gensini评分的关系；采用多因素logistic回归分析影响冠心病病人预后的危险因素；采用受试者操作特征曲线（ROC 曲线）分析血清miR-133b 水平对冠心病病人预后不良的预测价值。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组一般资料比较三组年龄、男性及糖尿病占比相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；SACD 组、ACS组身体质量指数、高血压、吸烟史及血脂异常者比例高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；ACS组Gensini 评分、病变支数≥3 支占比高于SACD 组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 体检健康者60例和冠心病病人95例一般资料比较

2.2 三组血清miR-133b 水平比较ACS 组、SACD组、对照组血清miR-133b 水平分别为1.59±0.15、1.36±0.12、1.02±0.05（F=349.57，P＜0.001），ACS 组、SACD 组miR-133b 水平均高于对照组（P＜0.05），ACS组miR-133b水平高于SACD组（P＜0.05）。

2.3 血清miR-133b 水平与Gensini 评分的关系SACD 组病人血清miR-133b 水平与Gensini 评分呈正相关（r=0.58，P＜0.001）；ACS 组病人血清miR-133b 水平与Gensini 评分也呈正相关（r=0.57，P＜0.001）。

2.4 不同预后冠心病病人一般资料及血清miR-133b 水平比较不同预后冠心病病人年龄、身体质量指数及男性、高血压、糖尿病、吸烟史、血脂异常占比相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；预后不良组病人Gensini 评分、血清miR-133b 水平及病变支数≥3 支占比高于预后良好组（P＜0.05），差异有统计学意义。见表2。

表2 不同预后冠心病95例一般资料及血清miR-133b水平比较

2.5 影响冠心病病人预后的危险因素分析以冠心病病人预后情况（预后良好=0，预后不良=1）作为因变量，以Gensini评分、病变支数、miR-133b作为自变量进行多因素logistic回归分析，结果显示，Gensini评分、病变支数、miR-133b 均为影响冠心病病人预后的危险因素（P＜0.05）。见表3。

表3 影响冠心病95例预后的危险因素分析

2.6 血清miR-133b 水平预测冠心病病人预后不良的价值分析血清miR-133b 水平预测冠心病病人预后不良的曲线下面积为0.83［95%CI：（0.75，0.91）］，最佳截断值为1.55，灵敏度高达97.0%，特异度为64.5%。见图1。

图1 血清miR-133b水平预测冠心病95例预后不良的ROC曲线

3 讨论

冠心病好发于中老年人群，临床症状以突感心前区疼痛、多发性压榨痛为主，该疾病与肥胖、高血压、糖尿病等有关，随着生活质量的不断提高和老龄化加剧，冠心病发病率逐年上升［10-11］。研究显示，降低收缩压和脂蛋白胆固醇、戒烟、保持健康的体质量、锻炼和健康饮食均可降低冠心病的发生风险［12］。本研究中，SACD 组、ACS 组身体质量指数、高血压、吸烟史及血脂异常者比例高于对照组，表明保持良好的生活习惯、尽早采用药物治疗控制血压、血脂有助于降低冠心病发病率。冠心病因心肌细胞损伤、变性或纤维化，导致心肌运动平衡失调，继而引发心室重构，心力衰竭，甚至死亡，冠心病病人经系统治疗后，部分病人可能再发心血管事件，致使住院率、病死率增加，给病人家庭及社会带来沉重的经济负担［13］。

miRNA 是一类进化上保守的非编码小RNA，已成为一类新型基因调控分子，作为内源性分子，miRNA 已被证明在人体病理生理过程的不同领域中发挥着关键作用，不仅参与细胞发育、细胞内代谢机制、细胞分化和增殖过程，还参与心血管疾病、神经系统疾病和各种恶性肿瘤中的应激反应等基本生物学过程［14］。miRNA 体积小且对降解具有很强的抵抗力，又因与某些基于脂质的载体相连或被包裹在微囊泡中，甚至不受内源性RNase的影响，凭借以上优势，miRNA 已成为研究包括冠心病在内的心血管疾病的新型标志物［15］。miR-133b定位于6号染色体，最初在骨骼肌中发现，被认为是肌肉特异性miRNA，参与骨骼肌生长发育，其异常变化与神经系统生长、神经系统疾病有关［16］。miR-133b 在炎症和肿瘤中起着重要作用，miR-133b 在许多类型的肿瘤中表达异常［17］。近年来，miR-133b 在心脑血管疾病中的作用越来越多地被揭示。有研究显示，miR-133b 在心力衰竭病人血清中呈高表达，其水平随病情加重而升高，且与心室重构有关，可通过miR-133b 水平判断心室重构状况［6］。此外，ST 抬高型急性心肌梗死病人血清miR-133b水平升高，其高表达病人术后心功能与低表达病人相比较差，心血管不良事件发生率较高，预后不佳［18］。

本研究中，SACD 组、ACS 组血清miR-133b 水平均高于对照组，ACS 组血清miR-133b 水平高于SACD 组，且miR-133b 水平与病人Gensini 评分（呈正相关），与贾秋菊、李莉［18］研究结果基本一致，提示miR-133b 参与冠心病的发生发展，可通过监测miR-133b 水平，预测冠心病病人的疾病严重程度。分析原因，miR-133b 可能通过影响心肌纤维化和心肌细胞凋亡而参与冠心病的病情进展［19］，需增加细胞实验验证此推测。病人出院后进行随访，结果发现，预后不良组病人Gensini 评分、血清miR-133b 水平及病变支数≥3支占比高于预后良好组，且Gensini评分、病变支数、miR-133b 均为影响冠心病病人预后的危险因素，且血清miR-133b水平预测冠心病病人预后不良的曲线下面积为0.83，灵敏度高达97.0%，血清miR-133b 水平高于1.55 时冠心病病人预后不良发生风险较高。表明可根据miR-133b 水平预测冠心病病人预后情况，针对高表达病人尽早采取相应措施，以降低其心脏不良事件发生率。

综上所述，冠心病病人血清miR-133b 水平升高，miR-133b 水平越高冠心病病人冠脉狭窄越严重，监测miR-133b水平对于预测病人疾病严重程度及预后情况有一定的帮助。但鉴于本研究是小样本量、单中心的研究，研究得出的结论需进一步扩大样本量，并进行多中心的研究证实，同时，外周血miR-133b 表达水平与冠心病病人长期预后的关系也需要进一步研究明确。