抗-M 抗体对血型鉴定及临床输血的影响

李丽群

1927 年MNS 血型系统被发现, 其为被识别的第二个血型系统, 第一个是ABO 血型系统, 1933 年Johnson和Wolf 发现了抗-M 抗体, 其为自然产生, 相对常见,大部分为免疫球蛋白M(IgM) 抗体, 37℃下不活跃, 临床忽略了其在输血实践中的存在, 于室温下大部分抗-M 抗体会有盐水凝集情况发生, 属冷反应性的盐水凝集素, 偶尔可在抗球蛋白阶段或37℃有反应发生,可导致迟发性的溶血性输血反应［1,2］。本文2021 年1 月～2022 年12 月发现由抗-M 抗体引发的18 例正反定型不符情况, 经对此类抗体检测结果展开分析, 探究在临床治疗中抗-M 抗体的影响, 如何及时发现, 让输血安全提高, 进而对O 型红细胞加入后的影响展开分析, 详细报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本院输血科于2021 年1 月～2022 年12 月收集首次血型鉴定的8500 例患者, 女性居多, 年龄4～92 岁, 中位年龄58 岁, 大部分源自胃肠外科, 部分源自其他科室, 上述标本上清清亮, 未见溶血。

1.2 方法

1.2.1 血型鉴定与抗体鉴定 留取EDTA 抗凝血2 ml,使用全自动微柱凝胶卡法、手工试管法对ABO、RhD血型进行鉴定, 按照说明书或者临床规定的相关操作方法进行鉴定。进行直接抗人球蛋白试验(DAT)和间接抗球蛋白试验(IAT), 包括：①使用试管法进行DAT, 将1 滴5%三洗红细胞待检标与1 滴免疫球蛋白G(IgG)、C3d 抗人球蛋白试剂相互混合, 进行离心后, 结果呈阴性则结束实验, 呈阳性为进行抗-IgG、抗-C3d；②凝聚胺法：将血清分别与3 份抗体细胞、5%三洗红细胞进行混合, 比例为2∶1, 在分别加入0.6 ml低离子液后混匀, 再将2 滴凝聚胺加入进行离心, 观察凝集情况, 弃去上清后加入2 滴解凝聚, 轻摇后观察1 min 内的凝集情况［3,4］。

1.2.2 不规则抗体影响实验 ①热放散实验：室温四洗后的1 ml DAT 阳性标本压积红细胞与1 ml 生理盐水在水浴箱中放散, 温度设置为56℃, 时间为10 min,离心后取出放散液进行IAT。②酸放散实验：按照试剂说明书操作对放散液进行DAT。③吸收实验：使用抗-M 试剂检测阳性的O 型压积红细胞与标本血清混合, 比例为1∶1, 冰箱温度设置为4℃, 吸收时间为1 h,离心后取上清, 对其进行ABO 反定型［5］。

1.2.3 配血方法 将患者的血清、5%三洗红细胞和献血者的血清、5%三洗红细胞进行交叉混合(血清：红细胞=2∶1), 使用凝聚胺法、盐水法、手工卡式法,具体操作如上［6］。

1.2.4 抗-M 抗体效价测定 留取2～3 ml 抗凝静脉血进行离心, 分离出血清, 使用盐水法, 用生理盐水倍比稀释血清100 μl, 再加入50 μl 5% O 型健康人的M 抗原阳性红细胞悬液, 在4、24、37 ℃环境分别放置15 min, 离心观察并记录红细胞凝集情况［7］。

2 结果

2.1 血型鉴定结果 血型鉴定时借助微柱凝胶法、全自动血型仪, 结果显示8500 份标本中, 正反定型相符8432 份, 正反定型不符68 份。仅抽取了18 份典型标本结果展开分析, 见表1。经开展反定型试管法结果可见, A、B、O 细胞管均呈阳性, 而对照管结果呈阴性。见表2。经处理后, 标本血清接受直接抗人球实验以及抗体筛查实验, 其对应实验结果见表3。

表1 18 份典型标本初检结果分析

表2 18 份典型标本血型鉴定结果

表3 18 份典型标本血型结果分析

2.2 标本交叉配血结果 在抽取的18 份典型标本中,去除标本中的2、3、6、8、9、11、12、13、15、17、18 号, 剩余7 份抗-M 抗体标本的患者行备血申请, 分别与相应血型的供血者开展配血试验, 利用盐水法, 筛出阴性供血者, 在借助凝聚胺配血试验, 无凝集者提示配血成功。

2.3 实验室结果分析 在抽取的18 份典型标本中,3 例输血患者监测尿常规, 结果显示胆红素、尿胆原均呈阴性, 未见输血不良反应。评价疗效显示输注有效。见表4。

表4 18 份典型标本实验室结果分析

3 讨论

MNS 血型系统涵盖了诸多红细胞, 而一个红细胞可涵盖约80 万M 抗原, 其密度十分充足, 乃病毒、细菌补体的受体。抗-M 抗体中大多数为IgM 抗体, 无需补体激活, 剩余少数为IgG 型抗体血型, 而同种免疫为之诱发因素, 可引发血管外溶血反应, 可在温度严格控制下检测上述两种类型的抗体, 以此实施鉴别［8］。本文中对抗-M 抗体产生人群展开了分析, 结果发现消化道出血、怀孕中和备孕、肿瘤患者、心脏手术患者4 类人群会有抗-M 抗体产生。而经认真调查显示, 纳入病例无输血史, 而细菌感染史大都存在。抗-M 抗体和冷凝集素(CA)致病机制十分类似, 某些诱导因素下,低温程度下可展现特殊效用, 其该作用十分关键, 而其致病性多由热振幅(TA)决定, 也就是和抗原作用最高温度(通常为22 ～ 30℃), 与效价无关［9］。抗-M 抗体热振幅越高, 会增加诱导核心体温较低患者体内溶血,尤其是在各类体温限制的手术中, 如心脏、神经手术等,其可发挥关键效用。因而, 术前此类患者应联合会诊,输血科参与会诊, 拟定手术策略, 确保其个体化, 避免将冷抗体激活, 致灾难性事件发生, 如溶血等。提示了实际临床检测期间, 低温环境下检出抗-M 抗体的几率相对更高［10］。

不同于CA 的是, 还有IgG 型抗-M 抗体存在,且其有IgG 同种抗体一般特性存在, 本文结果可见,18 份典型标本中, IgG 型抗-M 抗体存在11 份, 约占65.0%, 大部分为免疫性病症、恶性肿瘤患者, 然在正常人群中其大部分为天然抗体, 说明一旦在免疫性病症、恶性肿瘤患者体内检测出抗-M 抗体, 在低温、输血治疗执行期间, 应格外重视配合型输血、温度等因素,若必要, 可取MN 血型同型血输注［11］。

胎儿、新生儿HDFN 中抗-M 抗体可对红系前体细胞产生抑制, 以致新生儿有红细胞发育不全等情况出现, 有关资料显示［12］, 抗-M 抗体可引发新生儿溶血病(HDN), 且无HDN 典型特征, DAT 结果呈现阴性为其具体表现, 处于新生儿期则表现为长期贫血。由于抗-M 抗体可将红系祖细胞破坏, 极易出现孕早期流产等情况, 本文中就发现1 例妊娠中期孕妇, 由于该孕妇并未在本院继续检查, 因而未能继续追踪其结果, 有关文献指出, IgG 型抗-M 抗体存在于血清中可引发新生儿严重溶血、多次死胎, 检测直抗结果为阴性, 在给予M抗原阴性悬浮红细胞(1单位)后, 胆红素数值降低,Hb 升高, 二者程度均较为明显, 病症好转, 提示抗-M抗体致HDFN 直抗结果最终可能为阴性, 误诊、漏诊情况极易发生［13］。

本文所选微柱凝胶卡属ABO-CDE 卡, 无O 细胞孔, A、B 细胞二者均为反定型孔。本文纳入8500 份标本, 经检测可见, 正反定型不符68 份, 从中抽取的18 份典型标本中, O 型标本2 份, 这2 份标本微住凝胶卡数值显示, 其正反定型不符合, 经检测有含盐水类的不规则抗体存在, 由于常规检测项目中并无反定型检测O 细胞的项目, 极易出现漏诊情况。人类遗传学曾记载, 人群中P1 抗原占比约为34.28%, 而M 抗原约为70.36%, Le(a+)占比约为21.0%。需注意的是抗-Leb抗体、天然抗-M 抗体均可导致溶血性输血反应, 献血者血清内若含有此抗体, 则不适宜献血［14］。

所以, 在大批量检测血型时, 将O 细胞对照组加入能显著升高盐水类中不规则抗体检出率。而实践中,抗-M 抗体在不同条件下表现不同, 有一定差异性存在, 不同患者应给予不同管理, 明确抗-M 抗体临床价值, 需要开展热振幅检测、测定抗体类别、抗体滴定等［15］。因而, 若需开展相关操作, 如移植评估等, 供体应行小规模检测, 含抗体筛查、交叉匹配, 确保了解供体抗体的水平, 移植成功率提高。本文仅有3 例患者接受了配合型对输注, 并取得了确切疗效, 无输血不良反应。因而, 检测结果若显示输血者有潜在意义的抗体, 即使未检测到此类抗体, 红细胞输注时, 还需关注确认无对应抗原, 以免再次发生免疫应答。所以, 结合抗-M 抗体自身不同特性, 事前掌握自身有无抗-M抗体, 对于疾病诊断、治疗手段选择、优选献血者均可发挥较好的参照效果。