蛋鸡禽腺病毒与大肠杆菌混合感染的诊治

赵伟伟

山东省宁津县畜牧业发展中心，山东宁津 253400

禽腺病毒病是1种危害蛋鸡养殖业的传染性疾病，该病原感染可以引发3种临床病症，分别是鸡包涵体肝炎、产蛋下降综合征和火鸡出血性肠炎。禽腺病毒对鸡群造成的危害非常严重，一旦发生腺病毒感染，就容易继发大肠杆菌，这样就会导致2种病共同危害，使得蛋鸡出现发病急、病程长和高死亡率等特点，甚至会导致鸡群丧失产蛋性能并出现大量死亡，给养殖场带来较大的经济损失。

1 病原简介

禽腺病毒（avian adenovirus）是一种属于腺病毒科（adenoviridae）的DNA 病毒，不具有囊膜、二十面体对称的病毒颗粒。病毒粒子大小75～90 nm，其中核心大小55～65 nm[1]，禽腺病毒有12个血清型，分3个群，其中Ⅰ群和Ⅲ群主要感染鸡，流行的主要病原类型包括禽腺病毒1型（FAdV-1）和禽腺病毒4型（FAdV-4），其中FAdV-4 是目前最为常见和致病性最高的类型。

禽腺病毒的病毒颗粒在环境中相对稳定，病毒颗粒的外壳由蛋白质构成，能够保护内部的DNA避免外界环境的影响，在干燥的环境中能够维持一定的活性。禽腺病毒颗粒在低温和低湿环境下能够存活较长时间，尤其是在冷冻条件下，其对高温也有一定的抵抗能力，可以在60 ℃下存活1 h 左右，但随着温度的升高和持续时间的延长，病毒的活性会逐渐降低。禽腺病毒在酸性条件下（pH 3～5）仍能保持一定的活性，而在碱性条件下（pH 9～11）则会迅速失活；该病毒对一些常用的消毒剂具有一定的抵抗力，对含氯消毒剂（如次氯酸钠）和醇类消毒剂（如乙醇）的抵抗力较强，需要使用更高浓度或更长的消毒时间才能有效杀灭。

鸡大肠杆菌存在多个菌株，其中一部分是致病性菌株，可以引起蛋鸡大肠杆菌病。致病性菌株通常具有特定的毒力因子，如肠毒素、肠毒性质粒和附着因子等，这些因子使其具有致病性。一些蛋鸡大肠杆菌菌株已经产生多重耐药性，对多种抗生素均耐药。蛋鸡大肠杆菌适应于温暖湿润的环境，适宜的生长温度为20～45 ℃，最适生长温度为37 ℃。

2 流行病学

禽腺病毒的传染源主要是感染禽类动物，包括家禽（如鸡、鸭、鹅等）和野禽（如鸽子、鹤等）。感染禽类动物的禽腺病毒可以通过粪便、呼吸道分泌物、眼泪、唾液等排泄物传播给其他禽类动物。禽腺病毒的传播途径主要有直接接触传播和间接接触传播2种方式。禽腺病毒通过禽类动物之间的直接接触（如接触感染禽类动物的分泌物、排泄物等）传播给其他禽类动物，禽腺病毒还可通过污染的环境、饮水、饲料、工具等间接接触传播给其他禽类动物。此外，该病毒还可以进行垂直传播，病鸡产出的蛋内含有病毒，孵出的雏鸡也带有病毒[2]。腺病毒感染的易感动物主要是禽类，尤其是家禽。禽腺病毒的发病季节主要与气候条件和禽类动物的养殖管理有关，在温暖湿润的季节更为常见，如春季和秋季。此外，禽腺病毒的发病季节还与禽类动物的养殖密度、环境卫生状况、养殖管理措施等因素有关。

大肠杆菌病的传染源主要是已经感染鸡，它们的粪便、肠道内容物和呼吸道分泌物中均含有大量的大肠杆菌。部分蛋鸡可能是隐性感染，不表现出明显的临床症状，但仍然可以排出病原，成为传播病原体的潜在传染源。蛋鸡大肠杆菌病主要通过粪-口传播途径传播，病原菌还可以通过空气中的飞沫或气溶胶传播，当感染的蛋鸡咳嗽、打喷嚏或呼吸时，病原菌可以通过空气传播给其他蛋鸡。蛋鸡之间共用饮水器、饲料器、笼子等，也可能传播病原，青年鸡更容易受到感染，免疫功能低下的蛋鸡更容易受到感染。蛋鸡大肠杆菌病在夏季和秋季的发病率较高，这与气温升高和环境湿度增加有关，这些条件有利于病原菌的生长和繁殖。

3 临床症状

混合感染禽腺病毒和大肠杆菌的病鸡表现出食欲不振、消化不良，甚至完全停食，鸡冠和肉髯苍白，被羽蓬乱，还可见有呼吸困难、喘息、咳嗽、打喷嚏等症状，发病严重的病鸡还可能出现神经症状，如运动障碍、肌肉颤动、抽搐、瘫痪等。严重感染时可导致中枢神经系统炎症和神经损伤等神经系统疾病。有的病鸡还可能出现生殖障碍、卵巢炎、睾丸炎等症状，严重感染时可导致生殖系统疾病和生殖功能受损。病鸡还会出现腹泻，表现为粪便稀薄、呈现黄绿色水样，甚至带有黏液和血液，产蛋期的鸡群还表现为产蛋率下降的情况。

4 病理变化

剖检后，病鸡表现为严重的心包积液，液体呈现出淡黄色，有时呈现胶冻状，有的病鸡可见心脏肿大严重，心肌变得松软，有时可见心包膜浑浊。病鸡肠道黏膜充血、水肿、糜烂和溃疡，糜烂和溃疡可能出现在小肠或大肠的不同部位，严重时可见有肠道出血，也可能同时出现。肝脏充血、水肿、黄染，在肝脏表面有大量斑点状的出血。在继发大肠杆菌病后，肝脏表面常被纤维素性膜所覆盖，还表现出气囊浑浊；鼻腔和气管黏膜充血、水肿、糜烂和呼吸道分泌物增多，肺脏出现不同程度的水肿和淤血，脾脏可见颜色变深，失去弹性；卵巢和输卵管部位也会有炎症和大量的分泌物。

5 诊断方法

这2 种病混合感染的诊断较为困难，由于临床症状和病理变化较为复杂，仅通过对症状和病变的观察难以确诊，还需要通过实验室技术辅助诊断。

通过血清学检测方法中的酶联免疫吸附试验（ELISA）或血凝试验可以检测蛋鸡血清中的腺病毒特异性抗体，以确定是否感染腺病毒。ELISA 的结果通常通过比较待测样品的信号强度与标准曲线或对照样品的信号强度来判定。标准曲线法是通过制备一系列已知浓度的标准样品，测量其信号强度，绘制标准曲线。然后，将待测样品的信号强度与标准曲线进行比较，从而确定待测样品中目标分子的浓度。对照样品法是设置正对照样品和负对照样品，正对照样品中含有目标分子，负对照样品中不含目标分子。测量待测样品、正对照样品和负对照样品的信号强度，通过对照样品的信号强度来判断待测样品中是否存在目标分子。

还可以对组织标本进行免疫组织化学检测，可以检测到腺病毒的抗原，进一步确认感染的腺病毒的类型和分布情况。试验是通过收集组织样本，进行固定、切片和染色等处理后将特异性的一抗体加入样品中，与目标蛋白质结合。加入酶标记二抗或荧光标记二抗，与一抗体结合。根据使用的标记物（如酶、荧光物质等），使用适当的检测方法进行信号的可视化或测量。其结果判定通常可以根据信号的强度和位置判断目标蛋白质的表达水平和亚细胞定位或组织分布情况，并做好阴阳性对照，辅助判断。也可利用电子显微镜观察蛋鸡组织或粪便中的腺病毒颗粒的形态特征，禽腺病毒颗粒为非包膜的多面体病毒颗粒，直径70～100 nm。它们呈现为规则的六角形或二十面体形状，禽腺病毒颗粒表面通常具有6 个突起的二十面体结构。

聚合酶链反应（PCR）是1 种敏感且特异的检测方法，可通过检测蛋鸡粪便、组织或血清中的腺病毒核酸来确认感染情况。常用的PCR 方法包括传统PCR、实时荧光PCR 和逆转录PCR 等，应用琼脂糖凝胶电泳或者通用对荧光信号的观察，可以确定有无病原特异性基因序列片段（图1），对PCR 扩增的腺病毒核酸进行测序，可以进一步研究其遗传变异、毒力因子和抗原性等特征。

图1 禽腺病毒PCR扩增电泳鉴定图

大肠杆菌的检测是采集发病蛋鸡的肠道内容物或挑取病死鸡的肝脏和脾脏等病变组织接种于营养琼脂和麦康凯琼脂培养基上，经过37 ℃培养24 h，可见在普通琼脂上有边缘整齐，光滑的灰白色菌落，而在麦康凯琼脂上为红色菌落（图2），经革兰氏染色呈阴性杆菌（图3）。也可以通过血清学检测方法，如凝集试验或酶联免疫吸附试验检测蛋鸡血清中的大肠杆菌特异性抗体，以确定感染的大肠杆菌的类型和感染程度。有条件的也可以通过PCR检测来更准确地判断病鸡是否感染致病性大肠杆菌。

图2 大肠杆菌麦康凯培养

图3 大肠杆菌染色镜检

6 防控措施

6.1 预防措施

1）生物安全管理。建立合理的隔离和分区制度，将不同批次、不同健康状况的蛋鸡进行隔离，防止疾病的传播和扩散，加强人员的卫生和健康管理，包括定期体检、穿戴适当的防护装备、严格遵守卫生操作规程等，以避免人员携带病原对蛋鸡造成感染的风险。定期清洁和消毒鸡舍、设备和工具，确保良好的生产环境和设施卫生。

2）环境控制。维持适宜的鸡舍温度和湿度，提供良好的生长环境，减少蛋鸡的感染风险。保持良好的通风系统，确保新鲜空气的流通，减少空气中病原的浓度，确保饮水系统的清洁和无污染。

3）疫苗接种。根据当地的病情和流行株，选择合适的禽腺病毒疫苗和大肠杆菌疫苗进行接种，当前主要是新城疫-禽流感-禽腺病毒病三联疫苗以及各种大肠杆菌的蜂胶灭活苗，以提高蛋鸡的免疫力，减少感染风险。

4）健康监测。定期对蛋鸡进行健康监测，包括粪便样本、血清样本等的采集和实验室检测，及时发现和诊断感染情况，定期对鸡舍环境、饲料和水源进行病原菌监测，了解病原的分布情况，采取相应的防控措施。

6.2 治疗措施

1）禽腺病毒病的治疗。禽腺病毒病是由病毒感染所引起，没有相应的药物进行治疗，一旦发现有鸡发病，应立即将发病鸡隔离并进行彻底的消毒，防止病原体的传播和扩散，给予高营养、易消化的饲料，适当的维生素和微量元素，维持蛋鸡体内的水电解质平衡，减轻病情，提高蛋鸡的抵抗力和康复能力。根据临床症状的严重程度，选择合适的抗炎药物进行治疗，减轻炎症反应。

2）大肠杆菌病的治疗。使用抗生素可以治疗大肠杆菌病，在用药前需要进行药敏试验，根据试验结果选择合适的抗生素，并按照规定的剂量和疗程使用，以减少抗生素滥用和耐药菌株的产生。在临床上常用的药物有卡那霉素、阿米卡星、氟苯尼考和恩诺沙星等。根据蛋鸡的体重和病情，确定抗生素的给药途径（口服、注射等）和剂量，保证药物的有效浓度；根据病情的严重程度，确定抗生素的疗程和间隔，避免过度使用和抗药性的产生；根据需要，可以考虑联合使用不同类别的抗生素，以增强治疗效果，定期观察蛋鸡的临床症状和体征变化，评估抗生素治疗的疗效，对于需要长期使用抗生素的蛋鸡，可以进行药物浓度监测，确保抗生素在治疗期间的有效浓度。还可以应用中草药治疗大肠杆菌病，用0.2 kg 穿心莲、黄柏和大青叶，0.15 kg龙胆草、大黄和黄连等混合后加入8 kg水[3]，煎汁供鸡群饮用，效果良好。