白细胞介素-17A与雌激素受体α和β在上皮性卵巢癌组织中的表达及其临床意义

王科芳，陈 瑜，吴陈雨，刘 梅，汪丽杰，田建广，周小会，，许 岚

(1.华东疗养院妇科，江苏 无锡 214065；2.无锡市妇幼保健院妇科，江苏 无锡214002；3.无锡市人民医院妇科，江苏 无锡 214023)

上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer，EOC)是妇科常见的恶性肿瘤，占卵巢癌70%左右，发病率和死亡率均居妇科恶性肿瘤前列，其发病隐匿性强，多数患者发现时已至中晚期[1]。EOC 恶性程度高，中晚期患者病情进展迅速，且治疗过程中易出现化疗耐药，导致治疗失败，生存期短。目前针对EOC的诊断和治疗水平不断提高，但5年生存率仍低于45%[2]。因此寻找与EOC临床病理特征密切相关，且能有效预测预后的肿瘤标志物有重要临床意义。

雌激素受体(estrogen receptor，ER)在卵巢癌发病机制中起重要作用，ER的两个亚型ERα、ERβ在正常卵巢组织中的表达处于平衡状态，当卵巢细胞癌变时其平衡被打破，通常在恶性肿瘤中ERα高表达，ERβ低表达[3]。Negi 等[4]报道指出，ERα在卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌中均高表达，ERα有望作为妇科肿瘤治疗的潜在靶点。Liu等[5]研究显示，芹菜素能通过下调ERα/β比值从而抑制卵巢癌细胞增殖。白细胞介素(interleukin，IL)-17A是参与多种实体瘤血管生成过程的重要促炎因子。有研究显示，IL-17A在子宫内膜癌组织中的表达水平明显高于子宫内膜增生组织，且经细胞学研究显示，IL-17A 能促进子宫内膜癌细胞增殖、迁移，同时上调ERα/β比值[6]。基于上述背景可推测IL-17A表达水平、ERα和ERβ平衡与EOC预后相关，但尚缺乏相关的临床证据支持。因此，本研究分析了IL-17A、ERα、ERβ在EOC组织中的表达水平及其与临床病理特征和预后的关系，以期为EOC的临床诊疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2018 年8 月—2022 年8 月期间无锡市妇幼保健院收治的102 例EOC 患者的临床和病理资料，年龄33～70 岁，平均(53.60±6.44)岁。纳入标准：①术后病理确诊为EOC者；②首次接受手术，术中取癌组织和癌旁组织；③年龄18周岁以上；④临床病理资料完整。排除标准：①合并其他系统恶性肿瘤；②术前接受过放化疗、激素治疗等干预；③合并急性感染性疾病；④妊娠期或哺乳期。

1.2 方 法

1.2.1 IL-17A、ERα、ERβ mRNA 表达水平的检测取-80 ℃保存的EOC癌组织和相应癌旁组织，采用TRIzol酚氯仿法提取组织中的总RNA(试剂盒购自德国Wiagen)，测定RNA 纯度，应用逆转录试剂盒(美国Thermo Fisher 公司)获取互补链cDNA，以之为模板进行实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR，qPCR)，qPCR 试剂盒购自德国Roche 公司，反应体系20 μL，步骤为：95 ℃预变性15 s；95 ℃变性10 s，58 ℃复性20 s，72 ℃延伸30 s，共45个循环。以2-ΔΔCT法计算IL-17A、ERα、ERβ mRNA 的相对表达量，β-actin为内参对照，引物序列见表1。

表1 引物序列

1.2.2 IL-17A mRNA 表达量及ERα/β比值与临床病理特征的关系以IL-17A mRNA、ERα/β的平均值为分界值，将患者分为IL-17A 高表达与低表达组，ERα/β高比值与低比值组。采用R×C 列联表卡方检验的方法，比较IL-17A表达、ERα/β比值不同水平组患者的临床病理特征，包括年龄、国际妇产联合会(FIGO)[7]分期(I～IV 期)、腹水量、分化程度(低或中/高)、淋巴结转移情况、组织学分型。

1.2.3 临床治疗及随访所有患者均接受肿瘤细胞减灭术，术后接受以铂类为基础的化疗。收集患者的临床和病理资料，包括年龄、FIGO分期、腹水量、分化程度、有无淋巴结转移及组织学分型。随访：术后1年内每3个月随访1次，之后6个月随访1次，随访截止时间为2023 年8 月1 日。终点事件为患者死亡、失访或随访时间截止，记录确诊后治疗开始时间至终点事件发生的时间间隔即总生存期(overall survival，OS)。采用Kaplan-Meier 法比较IL-17A 高表达与低表达组、ERα/β高比值与低比值组患者的累积生存曲线；采用Cox比例风险模型分析IL-17A mRNA、ERα/β对EOC患者预后OS的影响。

1.3 统计学方法

采用SPSS 26.0 软件分析数据，计数资料用例数或百分率(%)表示，两样本比较用χ2检验或秩和检验，采用Kaplan-Meier 法、Cox 比例风险模型分析IL-17A mRNA表达量及ERα/β比值对OS的影响。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 癌组织及癌旁组织中IL-17A、ERα、ERβ mRNA表达量及ERα/β比值的比较

qPCR 结果显示，与癌旁组织比较，EOC 癌组织中IL-17A、ERα mRNA 表达水平及ERα/β水平均升高，而ERβ mRNA表达水平降低，差异均有统计学意义(P＜0.05)。IL-17A mRNA 和ERα/β的平均值分别为0.52、3.85。见图1。

图1 癌组织及癌旁组织中IL-17A、ERα、ERβ mRNA的相对表达量及ERα/β比值的比较

2.2 IL-17A mRNA 表达量及ERα/β比值与临床病理特征的关系

以IL-17A mRNA的平均值0.52，ERα/β的平均值3.85 为分界值，将患者分为IL-17A 高表达与低表达，ERα/β 高比值与低比值组。统计分析结果显示，IL-17A 高表达及ERα/β高比值与FIGO 分期、淋巴结转移、腹水量有关(P＜0.05)，与年龄、分化程度、组织学分型无明显相关关系(P＞0.05)。见表2。

表2 IL-317A、ERα、ERβ mRNA表达与临床病理特征的关系

2.3 Cox比例风险分析结果

单因素Cox 分析结果显示，FIGO 分期、腹水量、术后残灶、化疗疗程、IL-17AmRNA、 ERα mRNA、ERβ mRNA 及ERα/β比值与EOC 患者OS 有关(P＜0.05)；多因素分析显示FIGO III+IV 期、术后残灶＞2 cm、IL-17A mRNA 高表达、ERα/β高比值是影响EOC患者OS的独立危险因素(P＜0.05)。见表3。

表3 EOC患者总体生存期的影响因素Cox比例风险分析

2.4 IL-17A mRNA 表达水平和ERα/β比值对EOC患者OS的影响

随访时间12～60个月，中位随访时间36个月，随访期间3例患者失访，随访率97.06%，随访期间共38例(37.25%)死亡。IL-17A mRNA高表达、低表达患者随访期间分别有27、11例死亡，Kaplan-Meier 生存分析显示，IL-17A mRNA 高表达者累积生存率低于IL-17AmRNA低表达者(Log rankχ2=7.549，P=0.006)。ERα/β高比值与低比值患者随访期间分别有29、9例死亡，Kaplan-Meier生存分析显示，ERα/β高比值者累积生存率低于ERα/β低比值者(Log rankχ2=9.750，P=0.002)。见图2。

图2 IL-17A mRNA和ERα/β比值对EOC患者OS的影响

3 讨 论

近年来EOC外科手术及放化疗技术取得很大的进展，但EOC总体生存期仍较短，术后仍有较高的复发或远处转移风险，5 年生存率处于较低水平。EOC 发病原因及发病机制尚未完全明确，学者认为与激素、遗传、炎症、生殖等多种因素有关[8]。近年来有证据证实，ERβ主要表达于健康卵巢组织或良性卵巢组织中，ERα表达于恶性卵巢组织中，ERα与ERβ平衡在卵巢癌发病机制中扮演重要角色[9]。另有研究显示，雌激素能通过ERβ途径促进皮肤炎症，提示ER 在机体免疫系统及自身免疫性疾病中起重要调控作用[10]。肿瘤微环境中免疫失衡及炎症反应促进EOC发生及发展，IL-17A 是重要的CD4+T 细胞分泌的促炎因子，多项报道其参与促进卵巢癌的发展[11-12]。因此探究EOC组织中IL-17A及ERα，ERβ的表达及其与临床病理特征及预后的关系有重要临床意义。

本研究发现，癌组织中IL-17A、ERα mRNA 表达水平及ERα/β水平高于癌旁组织，ERβ mRNA表达水平低于癌旁组织，说明EOC 组织中IL-17A 上调，ER 亚型平衡向ERα漂移。IL-17A 属于重要促炎因子，同时参与宫颈癌[13]、乳腺癌[14]等多种实体瘤血管生成及癌细胞恶性行为学进展。Kang 等[15]研究发现，ER 能增强IL-17A 的表达进而增强子宫组织中免疫记忆γδT 细胞，从而调控机体免疫监视作用。ERα/β值是ER介导致癌过程的关键参数，其在ER依赖性肿瘤进展过程中发挥重要作用。有研究显示，高ER 水平通过抑制乳腺癌中IL-17A及IL-17其他亚型表达，从而靶向下调细胞程序性死亡受体1/配体1 通路(PD-1/PD-L1)，说明ER 与IL-17A 参与调控肿瘤免疫微环境[16]。本研究发现，IL-17A 高表达及ERα/β高比值与EOC 患者FIGO 分期、淋巴结转移、腹水量有关。分析原因可能为，一方面高IL-17A介导的慢性炎症会诱导癌细胞快速分裂，促进细胞的增殖和侵袭，导致淋巴结转移、腹水及临床分期进展[17]；另一方面ERα升高促使靶基因过度表达或启动增殖、侵袭相关通路促进肿瘤进展[18]；此外，高水平IL-17A能促进肿瘤细胞存活及侵袭，促进肿瘤免疫逃逸，而ER 能抑制IL-17A表达从而增强抗肿瘤免疫作用[19]。

本研究经Kaplan-Meier分析显示，IL-17A mRNA高表达者及ERα/β高比值者累积生存率低于IL-17A mRNA 低表达者和ERα/β低比值者，且经多因素Cox分析证实，IL-17A mRNA高表达、ERα/β高比值是影响EOC 患者OS 的独立危险因素。Tsai 等[20]研究显示，IL-17A可能具有促进三阴性乳腺癌迁移及血管生成活性，利于肿瘤转移。另有报道发现，靶向IL-17 能增强结直肠癌对免疫检查点抑制剂的耐药性，从而使患者生存获益[21]。说明IL-17A高表达可能通过调控抗肿瘤免疫系统从而影响EOC预后。ERβ属于肿瘤抑制因子，Takano 等[22]报道指出在三阴性乳腺癌中ERβ表达水平与复发或生存无关，这与本研究结果相似。另有研究表明，ERα在非小细胞肺癌男性患者中表达水平更高，且与预后不良有关[23]。ERα/β高比值反映ER表达偏向ERα，其导致EOC预后生存期较短的原因可能与抑制癌细胞凋亡[24]、抑制肿瘤免疫监视及抗肿瘤药物的敏感性有关[25]。因此监测IL-17A mRNA表达水平及ERα/β比值对判断EOC预后有重要参考价值。

综上所述，EOC 组织中IL-17A、ERα及ERα/β上调、ERβ下调，且IL-17A 高表达及ERα/β高比值的EOC患者预后相对较差。IL-17A及ERα/β有望成为预测EOC术后转归的靶点或潜在标志物，为临床及早评估患者预后提供参考。