miR-92a、sICAM-1、VEGF在乳腺癌组织中的表达及其与超声血流参数的相关性研究

常正江 陈小龙

作者单位：716000 陕西省延安市人民医院

乳腺癌是目前临床上常见的女性恶性肿瘤,每年新增病例数位居世界第一[1]。传统的手术切除、放化疗以及免疫、靶向治疗等手段可在一定程度上改善乳腺癌的预后,但由于患者的早期诊断率较低,患者长期预后仍然存在巨大挑战[2]。由于乳腺癌早期不易与其他良性肿瘤区分,加上缺乏有效的肿瘤标志物对高危患者进行早期识别,导致乳腺癌的预后不理想。因此,进一步探索乳腺癌早期诊断及病情评估的相关分子标志物在疾病防治中极其重要。乳腺癌组织中微小核糖核酸-92a(miR-92a)的表达与临床分期以及淋巴结转移相关[3];可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)与乳腺癌病情密切相关,可用于术后动态监测病情[4];血管内皮生长因子(VEGF)与乳腺癌肿瘤大小、腋窝淋巴结转移及不良预后密切相关[5]。本研究主要探讨 miR-92a、sICAM-1、VEGF在乳腺癌患者中的表达及与超声血流参数的相关性,旨在为疾病的早期诊断及病情评估提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

回顾性收集2021年1月到2021年12月期间本院收治的乳腺癌患者102例作为乳腺癌组,年龄30～70岁,平均年龄(52.3±8.4)岁。纳入标准:①首次确诊且临床资料记录完整;②符合《中国晚期乳腺癌规范诊疗指南(2020版)》[6]的诊断标准,术后病理组织均经病理检查证实。排除标准:①合并其他系统的恶性肿瘤;②肝、肾功能受损;③合并严重感染性疾病;④合并自身免疫系统疾病。⑤合并心脑血管疾病。同期收集100例乳腺良性结节患者作为对照组,年龄30～70岁,平均年龄(51.9±8.0)岁,经术后病理组织切片确诊为良性结节。两组研究对象的年龄、性别等比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准备案通过,所有患者知情同意。

1.2 超声检查方法

超声检测仪器为日本东芝Aplio 500仪器,线阵探头频率4～11 MHz。患者采取仰卧位,使乳腺病变部位充分暴露。图像稳定后测定血流参数,测量3次PSV、EDV、PI、RI值,取平均值进行记录。以上操作由2名资深B超医生进行。

1.3 血清学检测方法

所有研究对象空腹8小时以上于次日8点左右抽取静脉血3 ml注入无添加剂的干燥试管,颠倒混匀数次后静置30 min,再以3000 rpm的速度离心10 min,吸取上清液置于-80 ℃超低温冰箱中保存备用。miR-92a采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测,其逆转录引物是5'-CTCAACTGGTGTCGT,GGAGTCGGCAATTCAGTTGAGACAGGCCG-3',上游引物是5'-ACACTCCAGCTGGGTATTGCACTTGT CCCG-3',下游引物是5'-TGGTGTCGTGGAGTCG-3'。通过2-△△CT法计算相对表达量,每个标本检测3次,仪器为美国ABI7500型PCR仪。sICAM-1采用酶联免疫方法进行检测,检测试剂盒由上海玉博生物科技有限公司提供,仪器为雷杜公司RT-6100酶标分析仪。VEGF应用罗氏cobas e601全自动电化学发光免疫分析仪及其配套试剂进行检测。同一检测项目均在同一台仪器完成,严格按照试剂盒说明书进行检测。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 两组miR-92a、sICAM-1、VEGF水平比较

乳腺癌组miR-92a、sICAM-1、VEGF水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 两组miR-92a、sICAM-1、VEGF水平比较

2.2 miR-92a、sICAM-1、VEGF检测对乳腺癌的诊断价值

绘制miR-92a、sICAM-1、VEGF对乳腺癌的ROC 曲线,结果显示,三项联合检测的曲线下面积(AUC)为0.897,灵敏度为89.3%,特异度为90.0%,提高了诊断效能,具体见表2和图1。

图1 miR-92a、sICAM-1、VEGF对乳腺癌的ROC曲线

表2 miR-92a、sICAM-1、VEGF检测对乳腺癌的诊断价值分析

2.3 乳腺癌发生的影响因素分析

以是否发生乳腺癌为因变量,将miR-92a、sICAM-1、VEGF作为自变量进行多因素Logistic回归分析,结果显示,miR-92a、sICAM-1、VEGF是乳腺癌发生的重要危险因素(P<0.05),见表3。

表3 乳腺癌发生的多因素Logistic回归分析

2.4 两组超声血流参数的比较

乳腺癌组患者的PSV、EDV明显高于对照组,PI、RI明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),见表4。

表4 两组超声血流参数比较

2.5 miR-92a、sICAM-1、VEGF与乳腺癌患者超声血流参数的相关性

采用Spearman相关性分析 miR-92a、sICAM-1、VEGF与超声血流参数的关系,结果显示,miR-92a、sICAM-1、VEGF与PSV、EDV呈正相关(P<0.05),与PI、RI呈负相关(P<0.05),见表5。

表5 miR-92a、sICAM-1、VEGF与乳腺癌患者超声血流参数的相关性分析

3 讨论

乳腺癌已成为全世界范围內最常见的女性恶性肿瘤之一。根据全球癌症数据统计显示,2020年全球约有1000万人死于恶性肿瘤,其中乳腺癌占11.7%[7]。乳腺癌早期的临床表现为乳头溢液、乳房包块、腋窝淋巴结肿大等等,晚期可发生侵袭、转移,出现多器官病变,严重威胁患者生命安全。血清肿瘤标志物在恶性肿瘤的早期诊断中起着重要作用,但乳腺癌的诊断缺乏高灵敏度和特异度的标志物[8]。因此,寻求有效的血清学标志物对乳腺癌的早期诊断及病情评估具有重要作用。

miR-92a是目前研究最多的微小核糖核酸之一,主要参与调控心、肺、免疫系统等器官的发育以及新生血管的形成过程,可促使恶性肿瘤细胞增殖,提高肿瘤细胞侵袭、转移能力,在肿瘤进展过程中发挥致癌作用[9]。s ICAM-1是粘附分子中的免疫球蛋白超家族成员之一,具有介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质相互粘着、相互识别、传递信号的作用,正常情况下不表达或低表达[10]。sICAM-1作为介导细胞间黏附的一种黏附分子,其与配体结合可介导肿瘤细胞与不同细胞、基质之间的黏附,促进肿瘤的侵袭、转移[11]。VEGF是一种寡二聚体糖蛋白,由肿瘤细胞和基质细胞分产生,是参与血管生成的正向调节因子,能够促进肿瘤新生血管生成,为肿瘤细胞增殖提供气体交换与营养,其水平随肿瘤的进展程度而逐渐升高[12]。本研究为乳腺癌的诊断筛选了miR-92a、sICAM-1、VEGF这3个指标,结果显示,其水平在乳腺癌患者中均明显升高,这与上述研究结论一致。利用ROC曲线分析了这3个指标的诊断效能,结果显示,联合检测的灵敏度和特异度可达到89.3%、90.0%,相比较单一检测而言,可进一步提高诊断效能。进一步利用多因素Logistic回归分析结果显示miR-92a、sICAM-1、VEGF是乳腺癌发生的重要危险因素,这在邱晓阳[13]、徐小艳[14]的报道中也有体现。

超声是临床常用辅助检查手段,因具有操作简单、无创伤性等优点而广泛应用。乳腺恶性肿瘤可促使机体产生血管生成因子,加速血管生长,造成肿瘤内部血流增多,且流速加快、分布紊乱,再加上肿瘤缺乏肌层、血管壁薄、弹性不佳,导致血流信号异常[15]。恶性肿瘤常呈现高流速、低阻力的情况。临床上常常采用PI、RI作为恶性肿瘤的参考指标,PSV、EDV则是辅助参考标准[16]。本研究显示,乳腺癌患者的PSV、EDV明显升高,PI、RI明显降低,正好与上述研究相符。利用Spearman相关性分析可知 miR-92a、sICAM-1、VEGF与超声血流参数密切相关,提示 miR-92a、sICAM-1、VEGF在一定程度上可以反映乳腺癌的血流情况,用于评估病情。

综上所述,miR-92a、sICAM-1、VEGF在乳腺癌患者中明显升高,且与患者超声血流参数密切相关,是乳腺癌发生的重要危险因素,三项联合检测有助于乳腺癌的早期诊断及病情评估。但本次研究属回顾性研究,未进行前瞻性设计,可能存在一定的选择偏倚,待日后进行改进来进一步验证此次研究的正确性。