HPV E6/E7 mRNA 检测在宫颈高级别病变诊断中的价值分析

周秀琴

宫颈癌是妇科恶性肿瘤, 对女性健康构成严重威胁, 宫颈癌筛查是我国公共卫生项目, 大部分宫颈癌的产生均与HPV 感染有关, 临床对宫颈癌筛查的主要方式为宫颈液基薄层细胞学检查(TCT)和HPV DNA 检查, 但是有关研究表明, HPV E6/E7 mRNA 的表达可以反映HPV 基因活性, 能够以此推断感染水平以及致癌程度, 所以该项检测逐渐被临床所应用［1-3］。本次对于本院接收的进行宫颈高级别病变诊断的患者实施HPV E6/E7 mRNA 检测以及HPV DNA 检测的效果进行探究,报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2019 年12 月～2020 年12 月院内3200 例进行宫颈癌筛查的患者入组研究, 患者年龄为22～73 岁, 平均年龄为(42.84±10.06)岁。所有患者均进行TCT。对检测结果转阴者进行随访, 如果持续阳性且细胞学筛查没有升级, 半年后复查行TCT, 并进行2 年的随访。所有患者均了解本研究内容, 已经签订知情协议, 本研究的开展经过医学伦理相关组织批准。将患者随机分为对照组与研究组, 每组1600 例。1. 2 纳入及排除标准 纳入标准：自愿接受宫颈癌筛查者；性生活史为3 年或以上者；TCT 为意义不明的非典型鳞状上皮细胞者；检查前24 h 没有性生活者；未接受过宫颈治疗者。

排除标准：已确诊为宫颈上皮内瘤变者；已确诊为宫颈癌者；既往TCT 异常者；妊娠期患者；检查3 d内具有阴道用药史者；急性生殖道炎症者；存在盆腔放疗史者；具有宫颈手术史者。

1. 3 方法 对照组行HPV DNA 检测, 研究组行HPV E6/E7 mRNA 检测。对照组HPV DNA 阳性患者与研究组HPV E6/E7 mRNA 阳性患者均进行阴道镜检查、病理组织学检查。在对照组及研究组阳性患者中分别抽取185 例患者, 并分别行HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA 检测, 即共370 例患者同时行HPV DNA 与HPV E6/E7 mRNA 检测。

HPV DNA 分型检测：通过凯普医用核酸分子快速杂交因子分型试剂盒实施病毒分型检测, 并检测21 型别病毒亚型, 含有高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68)以及低危型HPV。本研究中HPV 阳性即高危型HPV 阳性。提取宫颈分泌物细胞DNA, 实施聚合酶链反应基因信号扩增, 以基因芯片为基础, 实施导流充分杂交, 再进行显色。

HPV E6/E7 mRNA 检测：通过美国Hologic 公司出品的Aptima HPV E6/E7 mRNA 检测试剂盒检测, 以Quantivirus 支链DNA 杂交捕获原理, 对14 种高危型HPV E6/E7 mRNA 进行定量检测, 检测探针针对14 种高危病毒, 其中任一种存在即显示阳性。操作步骤严格遵循试剂盒说明, 结果涵盖HPV16、HPV18、其他高危型, 由计算机软件按照E6/E7 mRNA 拷贝数、产品临床实验阈值等判读。若检测值≥1.0 即阳性, ＜1.0 即阴性。

TCT 检测：患者体位为膀胱截石位, 使用窥阴器彻底展现宫颈, 使用无菌棉签擦拭宫颈表面分泌物, 使用宫颈刷顺相同方向刷取脱落细胞, 放置毛刷于取样瓶中进行检测。通过南京键邦锦源公司出品的TCT 制片系统, 依据国际癌症协会推荐的伯塞斯达系统分类标准分成6 种类型, 分别为未见上皮内病变和恶性细胞、不确定意义的非典型鳞状细胞、低级别鳞状上皮内瘤变、高级别鳞状上皮内瘤变、宫颈癌。

阴道镜及病理组织学检查：病理标本均由两位正高级病理医师阅片、诊断, 包括宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CINⅠ)、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌, 若CINⅡ级或以上则定性为高级别宫颈上皮内病变。若检测结果显示异常, 如不确定意义的非典型鳞状细胞、更高级别细胞学异常结果, 或者出现HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA 检测阳性者, 则实施阴道镜检查和宫颈活检病理学检查, 病理组织学诊断结果包括以下5 种：慢性宫颈炎、宫颈浸润癌、CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级。通过电子阴道镜系统对宫颈表面色泽、形态、血管和边界情况进行观察。涂抹4%醋酸溶液于整个宫颈, 仔细观察后使用碘液涂抹。对可疑病变处进行多点活检, 如白色病变、碘不着色等, 对3 型转化区进行宫颈管搔刮术。

1. 3 观察指标 比较两组患者的检测结果及病理检查结果；比较两种检测方法的检测结果、病理检查结果及诊断高级别宫颈病变的准确率、特异度、灵敏度。准确率=(真阴性+真阳性)/(真阴性+真阳性+假阴性+假阳性)×100%；特异度=真阴性/(真阴性+假阳性)×100%；灵敏度=真阳性/(真阳性+假阴性)×100%。

1. 4 统计学方法 采用SPSS22.0 统计学软件进行统计分析。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 两组患者的检测结果及病理检查结果比较 对照组患者HPV DNA 检测结果阳性415 例, 阳性检出率为25.94%；研究组患者HPV E6/E7 mRNA 检测结果阳性400 例, 阳性检出率为25.00%。两组的阳性检出率比较, 不具有统计学意义(χ2=0.370, P=0.5423＞0.05)。研究组高级别宫颈上皮内病变患者72 例, 阳性率为4.50%(72/1600)；对照组高级别宫颈上皮的病变者76 例, 阳性率为4.75%(76/1600)。两组高级别宫颈上皮的病变阳性率比较, 不具有统计学意义(χ2=0.013,P=0.908＞0.05)。见表1。

表1 两组患者的检测结果及病理检查结果比较［n(%)］

2. 2 HPV DNA 检测、HPV E6/E7 mRNA 检测的高级别宫颈病变检查结果及病理检查结果分析 370 例患者同时进行HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA 检测及阴道镜及病理组织学检查。阴道镜、病理组织学检查结果显示阳性88 例, 阴性282 例。HPV DNA 检测结果显示, 阳性188 例, 阴性182 例；HPV E6/E7 mRNA 检测结果显示, 阳性168 例, 阴性202 例。见表2。

表2 HPV DNA 检测、HPV E6/E7 mRNA 检测高级别宫颈病变检查结果及病理检查结果分析(n)

2. 3 HPV DNA 检测、HPV E6/E7 mRNA 检测诊断高级别宫颈病变的准确率、特异度、灵敏度比较 HPV DNA 检测的特异度、灵敏度、准确率分别为56.38%、73.86%、60.54%, HPV E6/E7 mRNA 检测的特异度、灵敏度、准确率分别为67.73%、87.50%、72.43%。HPV E6/E7 mRNA 检测的特异度、灵敏度、准确率均高于HPV DNA 检测, 存在明显差异(P＜0.05)。见表3。

表3 HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA 检测诊断高级别宫颈病变的准确率、特异度、灵敏度比较(%)

3 讨论

宫颈癌是病因明确且能够预防的恶性肿瘤, 早期发现癌前病变、宫颈癌的患者通过及时有效的治疗,能够降低发病率和死亡率, 我国两癌筛查的终极目标为消灭宫颈癌, 主要筛查方式为TCT 检查, 但因为阅片者的主观因素会影响诊断结果, 加之该项检测的重复性较差, 所以检测结果准确率并不高, 检出率波动幅度也较大, 检测结果并不理想［4］。宫颈癌的发生、进展通常与高危型HPV 感染相关, 因此HPV DNA 检测筛查成为宫颈癌的主要辅助筛查方式, 也是意义不明的非典型鳞状上皮细胞患者的主要分流管理方式, 但大部分HPV 感染属于一过性, 在2 年内可清除, 不会致病, 所以该项检查下假阳性率较高, 检测效果也不尽如人意［5］。因此, 寻求一种高危型HPV 持续感染患者的有效检查方式, 提升宫颈癌筛查准确率, 是医学领域研究的热点［6］。

相关研究显示, HPV 病毒种引起宫颈癌的致病基因主要为E6/E7 基因, 其中E6 基因会阻断细胞凋亡过程, 对细胞抗癌效果产生影响；E7 基因会影响细胞周期, 促使炎性细胞增殖恶变进而形成癌症, 而HPV E6/E7 mRNA 水平可以预测HPV 病毒活性和癌变风险, 从而区分一过性感染以及宫颈病变, 进而对意义不明的非典型鳞状上皮细胞患者进行分流［7］。HPV E6/E7 mRNA 是一种HPV 病毒致癌活动提示指标, 也是宫颈上皮细胞癌变进展预测指标, 该项指标的表达说明HPV 整合入宿主细胞DNA 种, 癌基因转录异常造成E6/E7 癌蛋白表达过度, 导致细胞恶性转化, 说明HPV 癌基因E6/E7 处在表达活动期, 会促使癌变进展［8］。HPV E6/E7 mRNA 表达伴随宫颈病变级别的上升而上升, 随着其阳性率的提升, 高级别病变的阳性检出率也会提升, 其高表达表示HPV 处在持续感染状态, 因为该项检测更关注病变情况, 能够更好地反映宫颈病变严重程度, 所以属于高级别病变的特异性标志物［9-11］。

刘晓旭等［12］研究中显示, 宫颈病变诊治中应用HPV E6/E7 mRNA 检测的灵敏度为87.50%, 高于HPVDNA 检测；本文研究中, HPV E6/E7 mRNA 检测的灵敏度高于HPV-DNA 检测, 和刘晓旭等研究结果一致,表明HPV E6/E7 mRNA 检测灵敏度更高, 且本文研究中HPV E6/E7 mRNA 检测的准确率也更高, 说明该项检测方式可以作为宫颈高级病变患者分流管理方式,能够更精确地预测细胞向高度病变、癌症病变转变的风险。

综上所述, 将HPV E6/E7 mRNA 检测作为宫颈高级病变筛查指标, 能够对宫颈癌、高级别上皮内瘤变进行有效检测, 对于宫颈高级病变诊断具有积极的指导价值。