Box-Behnken 响应面法优化羟基红花黄色素A 纳米粒处方工艺及体外释放评价

肖奕菲，杜利新，魏起东，陆慧玲，郭志华，李雅（湖南中医药大学，湖南 长沙 410208）

羟基红花黄色素A （hydroxysafflor yellow A，HSYA）是菊科植物红花的主要水溶性成分，自《中国药典》2005年版起，HSYA 被规定作为红花质量标准成分之一[1]。大量研究表明HSYA 具有改善心肌缺血/再灌注损伤、改善缺血性脑卒中损伤、抗高血压、抗动脉粥样硬化等药理作用[2-3]，已广泛用于治疗心脑血管疾病，且已被国家药品食品监督管理局批准为新型心血管药物[4]。目前HSYA 多采用静脉注射给药，由于长期频繁注射给患者带来诸多不便，亟需研发口服给药剂型。但根据生物药剂学分类系统，HSYA 属于高溶解性、低渗透性的Ⅲ类药物，其极性强，膜通透性差，难以跨过胃肠道上皮细胞屏障[5]；且易于光、高温、碱性条件下发生氧化、水解、聚合反应[6]；由于酚羟基的存在[7]，HSYA 以质子化的形式存在于天然或碱性水溶液中，严重影响其跨膜能力，导致其口服生物利用度低，阻碍了其临床应用。因此，目前对HSYA 给药系统的研究主要通过研究如何提高其脂溶性，增强理化性质和提高生物利用度[8]。研究表明纳米粒、微乳剂、自乳化体系均可提高HSYA 的跨膜能力[9-12]，其中纳米粒的优点包括控制药物释放、提高药物稳定性和药物负载效率、改良药物的溶解性、生物相容性[13-16]。乳酸-羟基乙酸共聚物[poly（lactic-co-glycolicacid，PLGA）]是纳米粒常用的载体之一，具有良好的生物相容性；且在体内发生水解时降解为可被人体正常排出的乳酸和羟基乙酸，相较于其他载体的安全性高，现已被美国食品药品监督管理局和欧洲药品局批准应用于临床[17]。故本研究拟采用PLGA 为载体，制备HSYA 纳米粒，以提高HSYA 口服生物利用度，为HSYA口服制剂的研究奠定基础。

1 仪器与试剂

1.1 仪器Agilent 1200s 高效液相色谱仪，美国Agilent 公司；C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），大连依利特分析仪器有限公司；十万分之一电子天平，德国梅特勒-托利多仪器公司；ZNCL-B-L 磁力搅拌器，巩义市中天仪器科技有限公司；超声波细胞粉碎机，宁波新芝生物科技股份有限公司；Zetasizer Nano-ZS90 激光粒度分析仪，英国Malvern仪器有限公司；Hitachi H-7650 透射电子显微镜，日本Hitachi 公司；Bruke D8 Advance X 射线衍射（XRD）仪，德国Bruke 公司；Nicolet iS20 傅立叶红外光谱（FT-IR）仪，美国Thermo Fisher Scientific 公司；冷冻干燥机，美国Gold SIM公司。

1.2 试剂羟基红花黄色素A 对照品（成都埃法生物科技有限公司，含量98%，批号：AFCA1001）；PLGA（济南代罡生物科技有限公司，分子量：30 000）；透析袋（北京鼎国昌盛生物技术有限公司，截留分子量为8～14 kDa）；泊洛沙姆188（上海毕得医药科技有限公司，货号：BD105932）；甲醇（国药集团化学试剂有限公司，批号：20210308）；丙酮（湖南汇虹试剂有限公司，批号：20210903-2）；乙腈（色谱纯，美国TEDIA天地试剂公司，批号：22105166）。

2 方法与结果

2.1 HSYA 纳米粒的制备精密称取处方量HSYA 原料药加入0.2 mL 磷酸缓冲溶液溶解，作为内水相；精密称取处方量PLGA加入2 mL丙酮超声溶解，作为油相；将内水相注入到油相中超声形成初乳；将初乳缓慢注入到5 mL 含0.2%泊洛沙姆的外水相中，超声3 min；再用注射器将超声后的混悬液在1 200 r·min-1磁力搅拌速度下缓慢注入到10 mL 0.1%的泊洛沙姆水溶液中，即得HSYA 纳米粒（HSYA Nanoparticles，HSYA NPs）。

2.2 溶液的制备精密称取10.0 mg HSYA 对照品置100 mL 棕色容量瓶中，加入25%甲醇溶液超声溶解，冷却后定容至刻度线，即得100 μg·mL-1HSYA对照品溶液；分别取1 mL 按“2.1”项下方法制备的空白NPs 溶液、HSYA NPs 溶液置10 mL 容量瓶中，加甲醇超声破乳30 min，静置过夜后，过0.22 μm 微孔滤膜，即得NPs阴性溶液和HSYA NPs样品溶液。

2.3 HSYA 含量测定

2.3.1 色谱条件[1]色谱柱：Hyperdil BDS C18柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）。流动相，流动相A：甲醇∶乙腈=13∶1；流动相B：0.7%磷酸溶液；A∶B = 28∶72。流速：1.0 mL·min-1。检测波长：403 nm。柱温：30 ℃。进样量：10 μL。

2.3.2 专属性考察 取“2.2”项下制备的对照品溶液、阴性溶液及NPs样品溶液按“2.3.1”项下条件进行测定。由图1 可知，阴性溶液在HSYA 保留时间处未出现色谱峰，表明未干扰HSYA的测定。

图1 羟基红花黄色素A纳米粒（HSYA NPs）的高效液相色谱图Figure 1 HPLC chromatogram of hydroxysafflor yellow a nanoparticle（HSYA NPs）

2.3.3 线性关系考察 取“2.2”项下制备的HSYA 对照品溶液，用25%的甲醇溶液稀释得0.05、0.5、1、25、50、100 μg·mL-1浓度的系列溶液，按“2.3.1”项下方法测定。以HSYA 浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，计算回归方程和相关系数（r）。得方程为Y= 33.293X-0.819 2，r= 1。表明HSYA 在浓度为0.05～100 μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.3.4 精密度试验 取1、25、100 μg·mL-1的HSYA对照品溶液作为低、中、高浓度，按“2.3.1”项下方法测定，各浓度分别连续进样6次，根据各浓度峰面积计算得RSD 分别为0.83%、0.75%、0.45%，表明仪器精密度良好。

2.3.5 稳定性试验 取“2.2”项下方法制备的样品溶液，分别放在室温下放置0，2、4、8、12、24 h，按“2.3.1”项下方法测定其峰面积，计算得RSD 为0.51%，表明样品在24 h内稳定性良好。

2.3.6 重复性试验 按照“2.2”项下方法制备HSYA NPs 样品溶液6 份，按照“2.3.1”项下方法测定，结果峰面积的RSD 为0.69%，表明该方法重复性良好。

2.3.7 加样回收率试验 取9份已知浓度的HSYA NPs溶液，每份0.5 mL，分别加入相当于样品质量浓度50%、100%、150%的对照品溶液，制成低、中、高质量浓度样品，每个浓度各3份。按照“2.3.1”项下方法测定，结果回收率均在95%～105%之间，且RSD均小于0.7%，表明该方法回收率合格。

2.4 HSYA NPs 包封率及载药量测定

2.4.1 包封率的测定 采用反透析法测定HSYA NPs包封率，量取5 mL 纯水置于透析袋中密封，将透析袋放入100 mL 含有5%HSYA NPs 的水溶液中；以100 r·min-1恒温磁力搅拌。分别于1、2、4、6、8、10、12 h从透析袋内吸取1 mL溶液（透析袋中补加同温同体积的纯水），过0.22 μm 微孔滤膜，按照“2.3.1”项下条件测定。测得10 h 后透析袋内浓度不再增加，表明透析袋内外游离药量浓度平衡，故通过测定10 h时透析袋内浓度计算HSYA游离药量。精密移取HSYA NPs 混悬液1.0 mL 至10 mL 容量瓶中，加入甲醇超声破乳，冷却后定容至刻度线，静置过夜，过0.22 μm 微孔滤膜，测定后计算得总药量和包封率。包封率（%）=（总药量－游离药量）/总药量×100%。

2.4.2 载药量的测定 取一定量HSYA NPs 溶液置于称量瓶中，真空冷冻干燥，得HSYA NPs 冻干粉。精密称取适量HSYA NPs 冻干粉，并按照“2.2”项下供试品溶液处理方法处理后进样，测定冻干粉中的总药量，计算载药量。载药量=（总药量/冻干粉净质量）×100%。

2.5 HSYA NPs 优化实验据前期单因素预试筛选出缓冲溶液pH 值（A）、PLGA 与药物的质量浓度比（B）、投药量（C）、外水相浓度（D）、外水相体积（E）及超声乳化时间（F）6 个因素及范围；采用Plackett-Burman 设计（Plackett-Burman design，PBD）方法，以包封率（Y1）、粒径（Y2）、PDI（Y3）、Zeta 电位（Y4）及载药量（Y5）为响应值，从6 个因素中筛选出3 个关键变量； 再通过Box-Behnken 设计（Box-Behnken design，BBD）法设计3 因素3 水平实验，获得实验结果并确定最优工艺处方。

2.5.1 Plackett-Burman设计实验

2.5.1.1 PBD 因素及水平设计 Plackett- Burman design 法是一种基于不完全平衡块原理的实验设计方法，可利用最少实验次数评估一个因素的影响，并能够在众多因素中快速地筛选出最重要的因素，以供进一步研究[18]。本实验以缓冲溶液pH 值（A）、PLGA 与药物的质量浓度比（B）、投药量（C）、外水相浓度（D）、外水相体积（E）及超声乳化时间（F）为考察因素，各因素设置2 个水平，分别用+1 和-1 表示，运用Design-Expert 软件设计。PBD 实验的因素水平见表1。

表1 羟基红花黄色素A 纳米粒PBD 实验的因素水平Table 1 The factor levels of PBD experiments for HSYA NPs

2.5.1.2 PBD 结果及分析 PBD 实验结果见表2。利用Design-Expert 软件进行分析，纳米粒包封率、粒径、PDI、电位、载药量方差分析及显著性检验结果见表3～表7。各模型P＜0.05，表明模型差异均显著，其中因素A、B、C、F 对包封率影响显著（P＜0.05）；B、C对粒径和PDI影响显著（P＜0.05）；A、C对电位影响显著（P＜0.05）；B、D 对载药量影响显著（P＜0.05）。综合实验结果，选取缓冲溶液pH（A）、PLGA与药物的质量浓度比（B）、投药量（C）为BBD 实验的影响因素，做进一步考察。

表2 羟基红花黄色素A 纳米粒PBD 实验结果Table 2 Results of the PBD experiments for HSYA NPs

表3 羟基红花黄色素A 纳米粒包封率方差分析及显著性检验Table 3 ANOVA and significance test of rate for HSYA NPs

表4 羟基红花黄色素A 纳米粒粒径方差分析及显著性检验Table 4 ANOVA and significance test of particle size for HSYA NPs

表5 羟基红花黄色素A 纳米粒PDI 方差分析及显著性检验Table 5 ANOVA and significance test of PDI for HSYA NPs

表6 羟基红花黄色素A 纳米粒Zeta 电位方差分析及显著性检验Table 6 ANOVA and significance test of Zeta potential for HSYA NPs

表7 羟基红花黄色素A 纳米粒载药量方差分析及显著性检验Table 7 ANOVA and significance test of nanoparticle drug loading for HSYA NPs

2.5.2 Box-Behnken设计实验

2.5.2.1 BBD 实验因素及水平设计 根据单因素和PBD 实验确定实验因素和水平，采用3 因素3 水平实验设计评价各因素水平对HSYA NPs 的影响，优选出最佳制备工艺。BBD设计实验的因素水平见表8。

2.5.2.2 BBD 实验结果 将缓冲溶液pH（A）、PLGA 与药物的质量浓度比（B）、投药量（C）3 个因素为自变量，以包封率（Y1）、粒径（Y2）、PDI（Y3）、Zeta 电位（Y4）及载药量（Y5）的总评归一值（overall desirability，OD）为响应值[19]。其中Y1、Y5以及Y4的绝对值越大越好，故选用di =（Yi-Ymin）/（Ymax-Ymin）；Y2、Y3值越小越好，故选用di =（Ymax-Yi）/（Ymax-Ymin）。其中di为归一值，OD=（d1×d2…×dk）1/k。BBD实验结果见表9。

表9 羟基红花黄色素A 纳米粒BBD 实验结果Table 9 Results of the BBD experiments for HSYA NPs

2.5.2.3 BBD 实验结果分析 利用Design-Expert 软件对BBD 结果进行多元二次回归方程拟合及方差分析，结果见表10。OD 值对各因素的多元二次回归模型方程为OD=13.017 9A+0.174 4B-0.925 8C-0.007 6AB+0.216 6AC+0.048 7BC+0.249 5A2-0.020 1B2-0.161 1C2，R2=0.917 1，模型P＜0.01，表明各因素之间具有良好的相关性，且模型具有显著性意义；缺失项F值为0.977 2，P值为0.486 8（P＞0.05），表明拟合程度良好，可信度高，能够真实反映实验结果。

表10 羟基红花黄色素A 纳米粒BBD 实验方差分析及显著性检验Table 10 ANOVA and significance test of BBD experiments for HSYA NPs

三维响应面图和等高线图见图2。其可直观评价各因素对OD 值的影响，缓冲溶液pH（A）、投药量（C）、PLGA 与药物的质量浓度比（B）的响应面图陡峭，表明各因素对OD 值均有显著影响；此外，A 与B、B 与C 交互的响应面陡峭，表明缓冲溶液pH 和PLGA 与药物的质量浓度比、PLGA 与药物的质量浓度比和投药量对OD 值影响明显。由多元二次回归模型预测最优工艺处方为pH=6.95，载体与药物比=6.5∶1，投药量=2.8 mg。

图2 羟基红花黄色素A 纳米粒等高线图和三维响应面Figure 2 3D response surface and contour plots for HSYA NPs

2.5.2.4 验证实验 根据BBD 优选出的最佳工艺处方，按照“2.1”项下方法制备HSYA NPs，平行3 份。测得其平均粒径为（176.4±1.29）nm，平均PDI为（0.152±0.014），平均Zeta电位为（-17.6±0.46）mV，平均包封率为（78.5±0.49）%，平均载药量为（7.3±0.07）%。OD 值为0.560 1，与预测值方差相差小于5%，表明模型预测性良好，优化方法可行。

2.6 纳米粒表征

2.6.1 粒径与Zeta 电位 分别取“2.1”项下制备的样品1 mL，用去离子水稀释至5 mL，取适量于激光粒度分析仪测定其粒径、PDI、Zeta 电位。测得HSYA NPs 平均粒径为176.4 nm，PDI 为0.152，Zeta电位为-17.6 mV，表明HSYA NPs 混悬液粒径大小适宜，分散性及稳定性良好。见图3和图4。

图3 羟基红花黄色素A 纳米粒粒径分布图Figure 3 Particle size distribution map of HSYA NPs

图4 羟基红花黄色素A 纳米粒电位图Figure 4 Zeta potential of map HSYA NPs

2.6.2 HSYA NPs 形态观察 HSYA NPs 呈带有乳光的亮黄色，无沉淀及絮凝现象，如图5-A 所示。取10 μL HSYA NPs 滴加于铜网上，滴加10 μL 醋酸双氧铀，干燥后以80～120 kV 进行电镜检测成像。结果如图5-B所示，纳米粒形态圆整，大小均一，无粘连现象，与“2.6.1”粒径测定结果一致。

图5 羟基红花黄色素A 纳米粒形态图Figure 5 Morphology chart of HSYA NPs

2.6.3 HSYA NPs X射线衍射分析 分别将HSYA原料药（A）、空白NPs（B）、HSYA NPs（C）干燥粉末样品置于载玻片上，在Cu-Kα 射线光源下，以2°/min 在5～90°范围内扫描，使用X 射线衍射仪进行测试。由图6 可知，HSYA 原料药在8.05°、12.07～14.93°、17.08°处有明显的衍射峰，HSYA NPs 在此度数下无衍射峰，而同空白NPs 在19.25°、22.63°处表现出相同的衍射峰，说明HSYA已被材料包裹。

图6 羟基红花黄色素A 纳米粒X-射线衍射谱图Figure 6 X-ray diffraction graph of HSYA NPs

2.6.4 HSYA NPs红外光谱分析 分别取HSYA原料药（A）、空白NPs（B）、HSYA NPs（C）样品，红外光谱仪在波数为4 000～400 cm-1处，采集样品的红外光谱。由图7可知，HSYA原料药在3 391.63 cm-1处有一个-OH 的伸缩振动峰，且在1 425.25、1 517.13 cm-1处有双键的伸缩振动峰，提示酚羟基的存在，而HSYA NPs 在此处吸收峰明显减弱接近消失；此外，HSYA NPs 在2 887.397、1 759.59、1 111.13 cm-1处分别表现出与空白NPs相同C-H、C=O、C-O-C 的伸缩震动吸收峰，表明HSYA 成功被载体包裹，HSYA NPs制备成功。

图7 羟基红花黄色素A 纳米粒傅里叶红外光谱图Figure 7 Fourier transform infrared graph of HSYA NPs

2.7 纳米粒稳定性考察

2.7.1 4 ℃储存稳定性考察 将HSYA NPs 混悬液置于4 ℃冰箱中储存，分别于1、3、5、7、9、11、13、15、20、25、30 d 取样，测定其粒径、PDI 及Zeta 电位，考察HSYA NPs 在4 ℃条件下的储存稳定性。见表11。HSYA NPs 在4 ℃放置30 d 内，粒径、PDI、Zeta 电位均无明显变化，表明纳米粒4 ℃储存稳定性良好。

表11 羟基红花黄色素A 纳米粒储存稳定性（±s，n=3）Table 11 Storage stability of HSYA NPs（±s，n=3）

表11 羟基红花黄色素A 纳米粒储存稳定性（±s，n=3）Table 11 Storage stability of HSYA NPs（±s，n=3）

时间/d 135791 1 13 15 20 25 30粒径/nm 183.43±6.18 181.08±7.36 180.80±5.43 177.57±7.47 184.00±9.80 185.22±0.56 183.36±7.39 177.54±5.51 181.54±9.32 176.32±6.43 177.83±5.48 PDI 0.136±0.014 0.133±0.012 0.135±0.022 0.136±0.012 0.112±0.010 0.153±0.020 0.126±0.021 0.143±0.035 0.157±0.007 0.160±0.038 0.143±0.032 Zeta 电位/mV-20.09±1.39-19.06±1.36-16.07±1.16-17.03±1.67-17.27±1.79-16.60±4.23-16.72±0.85-18.98±2.23-18.53±1.73-16.63±0.75-17.87±0.66

2.7.2 不同生理介质中稳定性考察 量取HSYA NPs混悬液1 mL 加入到4 mL PBS 中（n=3），37 ℃恒温孵育，于0、1、3、5、7、9、12 h 时间点取样测定，观察其粒径和PDI 变化；同法考察HSYA NPs 在人工肠液、人工胃液中的稳定性。由图8可知，在不同生理介质中孵育12 h，NPs 的粒径、PDI 无明显变化，表明HSYA NPs 在PBS、人工肠液、人工胃液中稳定。

图8 羟基红花黄色素A 纳米粒在不同生理介质中的稳定性（n=3）Figure 8 HSYA NPs stability in different physiological media of HSYA NPs

2.8 纳米粒冻干保护剂筛选各取HSYA NPs 2 mL于西林瓶中，分别加入不同浓度的蔗糖、葡萄糖、海藻糖作为冻干保护剂，并设置空白对照组。首先将样品置于-20 ℃冰箱冷冻6 h，随后立即转入-40 ℃冰箱冷冻12 h，最后置于真空冷冻干燥机中冷冻至完全干燥，加入2 mL去离子水复溶，测定粒径、PDI以及Zeta 电位。结果表明，加入1%的葡萄糖保护剂冻干后样品的粒径、PDI、Zeta 电位均优于未加冻干保护剂的样品，且冻干粉外观饱满，色泽一致，故可选用1%葡萄糖作为NPs的冻干保护剂。见表12。

表12 冻干保护剂对羟基红花黄色素A 纳米粒的影响（±s，n=3）Table 12 Effects of lyophilized protectants on HSYA NPs（±s，n=3）

表12 冻干保护剂对羟基红花黄色素A 纳米粒的影响（±s，n=3）Table 12 Effects of lyophilized protectants on HSYA NPs（±s，n=3）

冻干保护剂空白对照蔗糖葡萄糖海藻糖蔗糖葡萄糖海藻糖蔗糖葡萄糖海藻糖浓度/%-111555 10 10 10粒径/nm 252.30±5.37 427.27±21.15 178.57±0.80 318.73±7.34 224.10±3.93 290.77±2.68 335.57±4.36 279.57±5.08 285.67±6.30 287.53±2.75 PDI 0.268±0.001 0.577±0.153 0.124±0.028 0.272±0.021 0.202±0.032 0.248±0.007 0.256±0.017 0.211±0.017 0.184±0.021 0.154±0.028 Zeta 电位/mV-15.8±1.04-15.77±0.32-18.33±1.10-18.17±1.69-15.83±0.15-13.47±1.15-12.60±0.43-12.43±1.01-10.80±0.20-17.42±0.62

2.9 体外释放实验取HSYA 原料药溶液和HSYA NPs 溶液各2 mL 置于透析袋中封闭，以100 mL pH7.4 的磷酸缓冲液为透析介质，将透析袋放入透析介质中，于37 ℃恒温水浴，100 r·min-1条件下动态透析，每组平行3 份。于0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24、36、48 h 时间点取样，过0.22 μm 滤膜，HPLC 法测定每组HSYA 浓度。以累计释放率为纵坐标，释放时间为横坐标绘制释放曲线，并拟合释药动力学模型方程。

体外释放结果显示，HSYA 原料药组在12～24 h时间段累计释放率已达到100%，表明原料药释放完全；而HSYA NPs 组在12 h 时累计释放率仅为69%，48 h体外释放率为85%，且仍在持续缓慢释放，表明将HSYA 制成纳米粒后能延长药物释放时间，具有缓释作用。见图9。拟合释药动力学模型方程结果显示，HSYA NPs 释放规律符合一级释药动力学模型。见表13。

表13 羟基红花黄色素A 纳米粒释药动力学方程和相关系数Table 13 Pharmacokinetic equations and correlation coefficients of HSYA NPs

图9 羟基红花黄色素A 纳米粒的体外释放曲线（n=3）Figure 9 In vitro release profile of HSYA NPs（n=3）

3 讨论

本研究以PLGA 为载体，利用复乳法制备羟基红花黄色素A纳米粒（HSYA NPs），通过Plackett-Burman设计实验成功筛选出缓冲溶液pH、PLGA与药物的质量浓度比、投药量3 个变量作为Box-Behnken 设计实验的影响因素，以包封率、粒径、PDI、Zate 电位及载药量的OD 值为响应值，通过三维响应面曲线分析3 个自变量的组合交互与OD 值响应之间的关系，观察自变量的交互作用对OD 值的影响，并进行多元二次回归拟合及方差分析预测每个变量的最大OD 值和自变量交互作用下的最佳水平。结果得出最优工艺处方为：pH 为6.95，载体与药物比为6.5∶1，投药量为2.8 mg。用该工艺处方制备出的HSYA NPs 与BBD 实验预测的OD 值接近，方差相差小于5%，模型预测性好。HSYA NPs 表征、稳定性考察和体外释放实验结果显示，HSYA NPs 的制备工艺稳定可靠，在PBS、人工肠液、人工胃液中稳定，具有一定缓释作用。

由HSYA NPs 4 ℃储存稳定性考察结果可知，纳米粒在4 ℃环境下存放30 d 内粒径、PDI 及Zeta 电位均无明显变化，稳定性良好。但长期以悬浮液的形式存放会发生聚集、药物过早泄漏、药物的变性、水解等现象[20]。研究[21]表明可通过冷冻干燥技术将纳米粒制剂干燥成固体形态，可提高药物的稳定性，从而延长纳米粒药物的储存保质期。在冻干过程中，由于机械应力、局部浓度增加、表面脱水等情况，可导致纳米粒的不可逆聚集。为了减少或者避免冷冻干燥过程中的不可逆聚集，可在待冷冻的混悬溶液中加入冻干保护剂。本研究对不同浓度的多种冻干保护剂进行了考察，最终发现以1%的葡糖糖为冻干保护剂，冷冻干燥后冻干粉外观饱满，色泽一致；且再分散性好，复溶后粒径较小，能有效保护HSYA NPs 不被聚集。葡萄糖能够保护纳米粒的原因可能是葡萄糖可与纳米粒的极性基团形成氢键，在膜界面代替失去的水，作为纳米粒的稳定剂，在冻干的过程中保护纳米粒的微观结构[22]。

研究HSYA 新型纳米制剂，开发出稳定且可靠的HSYA 药物传递系统，在提高HSYA 化学稳定性和生物利用度，以及选择性地将HSYA 靶向到疾病部位具有巨大的潜力。本研究以PLGA 为载体制备的HSYA NPs粒径大小适宜，分散均匀，稳定性良好。但其载药量偏低，这可能与PLGA 对亲水性药物的装载能力有关，故提高PLGA 的载药量是未来研究的关键问题之一[23]；目前仅对纳米粒制备部分进行研究，后续将对其在体内的安全性、口服生物利用度以及细胞、动物水平的药效作用进行研究，为HAYA NPs的临床应用奠定基础。