猫传染性腹膜炎病原特征及病例分析

刘宽辉,张威龙,黎婷,谢诗慧,许泽军,蔡永强,朱园园

(1.芜湖职业技术学院 食品与生物工程学院,安徽 芜湖 241000;2.合肥京科宠物医院,安徽 合肥 230031)

猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)是猫冠状病毒(FCoV)突变而来,FCoV具有两种生物型:一类为猫肠道冠状病毒(FECV),普遍存在于猫肠道内,一般不致病或引起猫轻度肠炎;另一类为FIPV,毒力强,感染后引起腹膜炎并伴随着其他的病症,如肠炎、腹水、胸水等[1]。FIPV感染主要与机体产生抗体依赖性增强作用有关,即同血清型FCoV感染有助于提升FIPV感染力,因FCoV普遍存在于猫体内,以及养猫人群的逐年扩大,导致猫传染性腹膜炎(FIP)流行性呈上升趋势。FIPV主要通过消化道、呼吸道和生物媒介传播,未成年猫感染多与机体内母源抗体消失有关,老年猫感染多与机体免疫力下降相关,群居饲养的猫感染率显著高于一般家庭单独饲养猫感染率,说明本病水平传播较严重[2]。

临床上FIP主要分为渗出型和非渗出型两种,渗出型FIP临床上较为常见,以机体腹腔、胸腔有液体渗出和脏器肿大为特征[3-4];非渗出型FIP主要以脏器肉芽肿为特征,并伴有神经症状[5-6]。近年来临床上也多出现混合型FIP,即机体出现肉芽肿的同时并伴有渗出液现象[7]。目前市场上缺乏FIPV疫苗,增加FIP预防难度,提升了FIP感染率。FIP主要治疗药物为GC-376与GS-441524,GS-441524治疗效果优于GC-376,可有效地降低FIP致死率[8-9]。本文结合一例渗出型FIP病例,进行综合诊断及治疗,分析FIPV病原特征,为FIP疾病防治提供可靠依据。

1 病例介绍

德文卷毛猫,3月龄,雄性,体重1.53 kg,刚买回一个月,已接种一针疫苗(疫苗接种种类不详)。猫消瘦,挑食,日常主食以罐头为主,猫粮较少食用,近期精神不振,呼吸急促,有皮肤瘙痒史。

2 临床、影像学及实验室检查

2.1 临床检查

体温39.8℃,呼吸55次/min,心率156次/min,可视粘膜苍白,皮肤弹性差,脱水现象较明显,肺部听诊呼吸音加重,心音听诊模糊不清,胸围增大。

2.2 影像学检查

2.2.1 DR 检查结果 胸腔密度增加,心脏轮廓消失,肺脏纹理消失(图1 A图标记所示),提示胸腔内有大量液体压迫肺脏;膈肌后移,腹腔内浆膜纹理消失,肝脏肿大,肠道内聚集大量气体(图1 B图标记所示),见图1。

图1 治疗前DR检查结果

2.2.2 B超检查 胸膜腔内见大量无回声的胸腔积液以及塌陷的肺叶(图2 A图标记所示),腹腔肠道淋巴结增大(图2 B图箭头所示)。见图2。

图2 治疗前B超检查结果

2.3 实验室检查结果

2.3.1 血常规检查结果 血常规检查白细胞数、中性粒细胞数及百分比、红细胞数均高于参考值,淋巴细胞百分比、平均红细胞体积和血小板体积低于参考值。见表1。

表1 治疗前血常规检查结果

2.3.2 血液生化检查结果 血液生化检查总蛋白、球蛋白、丙氨酸转移酶、碱性磷酸酶和血清淀粉样蛋白—A均高于参考值,白蛋白与球蛋白比值低于参考值。见表2。

表2 治疗前血液生化及SAA检查结果

2.3.3 李凡他试验结果 胸腔穿刺收集胸水进行李凡他试验,胸水滴入酸液内,出现丝状蛋白沉淀,结果判定为阳性。

2.3.4 RT-PCR检查结果 胸腔穿刺收集胸水进行RT-PCR检测试验,有明显S型扩增曲线,且Ct值小于30,结果判定FIP。见图3。

3 诊断

根据体温升高、脱水、胸腔积液及李凡他试验阳性、白细胞和中性粒细胞数增加等特征,判定该幼猫因毛细血管壁通透性增加导致的血管炎生成胸腔积液,再依据SAA为7显著高于参考值(<2 mg/L)及A/G比值0.37低于参考值0.4,疑是FIP;最后通过FIP RT-PCR试验结果为阳性判定本病为FIP。

4 治疗

4.1 治疗原则

对症治疗,去除病因,纠正酸碱电解质平衡紊乱,补充营养,防治继发感染。

4.2 治疗方案

第1天:GS-441524皮下注射2 mL,每天一次;头孢噻呋,30 mg/kg,静脉注射,每天两次;甲硝唑氯化钠,5 mL/kg ,静脉注射,每天两次;托芬那酸,4 mg/kg ,皮下注射,每天两次;呋塞米,4 mg/kg静脉注射,每天两次;白蛋白,3 mL/kg,5%的葡萄糖溶液稀释静脉注射,每天两次;钾离子溶液,3 mL,静脉注射,每天两次;超声引导下胸水抽取,24 h吸氧治疗。

第2-3天:相较于第一天增加葡萄糖酸钙4 mL,静脉注射每天两次;布托啡诺,0.5 mg/kg,皮下注射,每天2次;不再使用托芬那酸和钾离子溶液,其余治疗相同。

第4-5天:GS-441524、头孢噻呋、甲硝唑氯化钠、布托啡诺和白蛋白同样使用,增加强力止泻片与乳铁蛋白各1片每次,每天两次;6小时吸氧治疗。

第6-7天:不再给予吸氧治疗,其余治疗同第4-5天。

第7天后:GS-441524皮下注射2 mL,每天一次,连用4周;其余药物根据每天症状进行调整治疗。

5 转归

5.1 DR检查结果

治疗后第七天见胸部轮廓清晰,胸水明显减少。见图4。

5.2 实验室检查结果

分别与治疗后第7天、30天和60天对本病例进行实验室检查。治疗后第7天该病例白细胞、中性粒细胞和SA任偏高,A/G比值为0.4,提示该病例任有炎症期,相较于之前病情大有好转;治疗第30天以后各项指标已基本恢复正常,表明该病猫已基本恢复健康。见表3。

表3 治疗后实验室检查结果

6 讨论与分析

6.1 FIP病原特征分析

FIPV属FCoV成员,直径100 nm,基因组约29 kb[10],对环境抵抗力不强,绝大部分消毒剂均可杀灭本病毒。FCoV有11个开放阅读框,编码4种结构蛋白,分别为棘突(S)蛋白、包膜(E)蛋白、膜(M)蛋白和核衣壳(N)蛋白。S蛋白是病毒附着细胞的主要因素,决定病毒血清型[11];E蛋白不影响FCoV的复制但影响病毒的独立作用[12];M蛋白是FCoV含量最丰富的糖蛋白,可引起机体细胞免疫[13],免疫作用相较于N蛋白效果一般;N蛋白是FCoV基因组保护蛋白,决定病毒抗原性,诱导机体产生细胞免疫,是生物检测病毒抗原性的靶标蛋白[14]。FCoV生物型分为FECV和FIPV两种,FECV致病力弱,但其感染后更利于FIPV感染[2]。FIPV被机体巨噬细胞吞噬后不会被破坏,依然不断复制,并通过巨噬细胞传播到机体各组织器官,引起免疫应答产生Ⅲ超敏反应,FIPV与免疫应答产生的抗体结合形成的免疫复合物激活补体系统,引发更为严重的炎症反应[15],造成组织器官的损伤。

6.2 FIP诊断分析

FIP诊断目前常用影像学、实验室和分子生物学诊断。影像学DR和B超常用于动物脏器病变检查,如胸腹腔积液、器官肿大及结节等,影像学检查对渗出型FIP具有较高的诊断价值[16]。本病例影像学检查可见胸腹腔积液、肝脏肿大及淋巴结肿大等特征,李凡他试验结果阳性,表明患猫腹腔积液为渗出液。胸腹腔液体渗出,可致机体脱水,血常规检测红细胞数目相对增多,由于机体脱水红细胞及血小板受影响体积缩小。因此,渗出型FIP在血常规检查可见上述几项指标异常,表明机体处于脱水状态[17]。本病例可见患猫因机体渗出液过多已出现脱水症状。猫传染性腹膜炎可引起机体中性粒细胞数目增多,淋巴细胞减少[18],本病例可见患猫中性粒细胞增多、白细胞减少。多种疾病均可导致猫出现血常规检查异常,因此无法通过血常规检查对FIP进行确诊,但对FIP辅助诊断及治疗具有重要价值。FIP可致患猫肝脏病变,引起肝脏肿大及功能障碍。本病例检查可见肝脏肿大,丙氨酸转移酶和碱性磷酸酶活性显著增高,表明患猫已出现肝损坏,后期治疗需要保肝护理。血清淀粉样蛋白—A是急性期蛋白,一种重要的炎症指标,白蛋白与球蛋白比值偏低表明具有肝功能障碍、FIP可能,当白蛋白与球蛋白比值比值低于0.4、SAA高于2 mg/L时可怀疑疾病为FIP[19]。本病例可见血清淀粉样蛋白—A浓度已达到7 mg/L,白蛋白与球蛋白比值为0.37低于0.40,可疑患猫为FIP。为进一步对本病例进行确诊,采用分子生物学技术RT-PCR进行诊断,RT-PCR因其特异性强、操作简便及准确性高等特点,已成为FIP诊断新标准[20]。本病例RT-PCR检测结果出现FIPV荧光曲线,确诊为FIP。

6.3 FIP治疗药物分析

目前市场上缺乏有效的疫苗预防FIP疾病,因此药物治疗是解决FIP最佳途径。FIP治疗的特效药物为抗病毒药物,如GS-441524与GC-376,主要通过抑制FIPV复制或蛋白合成过程抑制病毒繁殖生长[21-22],达到治疗本病效果。GS-441524治疗效果优于GC-376。GS-411524分子式如图5所示。

图5 GS-411524分子式

GS-441524学名为三磷酸核苷竞争性抑制剂,是一类小分子核苷酸药物,主要通过抑制RNA病毒复制达到治疗效果。GS-441524进入机体细胞内进行磷酸化反应生成三磷酸盐代谢物(NTP),NTP在胞内与天然三磷酸核苷酸竞争性结合RNA聚合酶,干扰FIPV在宿主细胞内的复制过程,阻断FIPV的生物合成,起到治疗作用[21]。

7 小结

FCoV广泛存在于猫体内,随着国内养猫人群逐年扩大,FIP流行性呈逐年上升趋势。目前国内外对FIP发病机制及抗原性仍处于研究状态,导致FIP目前尚无有效疫苗。市场上出现的GS-441524与GC-376药物能够抑制FIPV的复制与蛋白合成,治疗效果显著,但仍存在治疗时间长和药物副作用等缺点,亟需研发FIPV特效生物药品。本文结合渗出型FIP病例,通过诊断、治疗及对FIPV病原特征进行分析,为FIP防治提供理论依据。