三清山白茶对高脂血症小鼠的降脂作用

◎ 郑 敏，黄 强，舒 婷

（江西医学高等专科学校，江西 上饶 334000）

高脂血症（Hyperlipidemia，HLP）是一种由于体内脂类代谢异常所引起的代谢性疾病，主要表现为一项或多项生化指标异常，如血浆中的总胆固醇（Total Cholesterol，TC）高于正常值上限、甘油三酯（Triglyceride，TG）高于正常值上限、低密度脂蛋白胆固醇水平（Low-Density Lipoprotein Cholesterol，LDL-C）高于正常值上限、高密度脂蛋白胆固醇（High-Density Lipoprotein Cholesterol，HDL-C）水平低于正常值上限等[1]。高脂血症是目前公认的诱发脂肪肝、动脉粥样硬化以及心脑血管疾病的重要病因[2]。同时，高脂血症已成为冠心病发生最常见的危险因素之一[3]，是严重危害人类健康的杀手[4]。目前，临床上主要通过药物、适当运动以及日常膳食调控等对高脂血症患者进行治疗，有多种治疗高脂血症的药物，主要为他汀类、贝特类等[5]，但这些药物的长期使用会给患者带来肝脏毒性、肝功能损伤、药物剂量依赖性等许多不良反应[6]。因此，选择来源丰富且不良反应小的天然产物用于治疗高脂血症具有广阔的市场与优势。茶是我国的国民饮料，也是世界上仅次于水消耗最多的液体。近年来，茶因其所呈现的降脂功效备受人们的关注[7]，且其采用冲泡的方式进行服用，方便简单，深受消费者认同，因此开发具有降脂保健功效的茶饮具有广阔的前景[8-10]。

三清山白茶产于世界自然遗产地——三清山，是江西省名牌农产品，该茶是一种不可多得的绿茶品种[11]。近年来，三清山白茶产量大且销量广，然其降脂保健功效尚未知。本研究以三清山白茶为实验材料，基于高脂血症小鼠模型研究三清山白茶的降脂效果，以期为三清山白茶的功效研究提供实验依据，为三清山白茶产业发展提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 实验动物

C57BL/6 雄性小鼠，6～8 周，25 只，购于斯贝福（北京）生物技术有限公司，许可证为SCXK（京）2019-0010。购入小鼠后置于SPF 级动物房进行分笼饲养，小鼠自由进食和自由饮水，动物房温度设定为20～25 ℃，相对湿度控制在50%～60%。小鼠适应性饲养7 d 后测定各小鼠体重，并按体重进行随机分组开始实验。

1.2 材料与试剂

三清山白茶，购于江西三山实业有限公司；非诺贝特，购于辰欣药业股份有限公司；TC、TG、LDL-C、HDL-C 测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所；普通饲料（Co60 辐照小鼠维持饲料），由斯贝福（北京）生物技术有限公司提供；高脂饲料（D12079B），由小黍有泰（北京）生物科技有限公司提供。

1.3 仪器与设备

Allegra 21R 台式高速冷冻离心机（美国BECKMAN）；ML204 型电子天平（梅特勒）；移液枪（德国Eppendorf）；Infinite M200 Pro Nano 酶标仪（TECAN）；MD1000 正置显微镜（徕卡显微系统有限公司）；Multiskan GO全波长酶标仪（赛默飞）；TKD-TSB 组织脱水机（湖北康强医疗器械有限公司）；TB-718D 石蜡包埋机（湖北泰维科技实业有限公司）；RM2235 石蜡切片机（徕卡显微系统有限公司）；PPTHK-21B 摊片烤片机（徕克公司）。

1.4 实验方法

1.4.1 茶样干粉制备

将三清山白茶粉碎80目，取茶叶与水按1∶10（w/v）的比例置于100 ℃沸水中浸提30 min，浸提结束后过滤减压浓缩。一次浸提结束后将茶渣按照相同的方法再提取一次，将两次滤液混合置于-80 ℃下预冷12 h 后真空干燥30 h，收集干粉并贮存于-20 ℃冰箱，备用[11]。

1.4.2 动物模型构建及分组给药

25 只C57BL/6 小鼠适应性喂养7 d 后，称量小鼠体重并根据体重随机分为空白对照组、高脂模型组、三清山白茶低剂量组、三清山白茶高剂量组和阳性药物（非诺贝特）组共5 组，每组5 只小鼠。空白对照组采用普通饲料进行喂养，其他组均采用高脂饲料进行喂养。阳性药物组和三清山白茶低剂量组的给药剂量根据人的等效剂量换算所得，三清山白茶高剂量组给药剂量为低剂量组的4 倍，空白对照组和高脂模型组则采用等量蒸馏水进行灌胃。各组小鼠灌胃的药物及给药剂量如表1 所示，每次小鼠的灌胃量均按0.01 mL·g-1计算得到，各小鼠每天进行一次灌胃，连续灌胃35 d，各小鼠每周称重2 次，记录小鼠体重变化情况[12]。

表1 小鼠灌胃药物名称及相应给药剂量表

1.4.3 血液生化指标的测定

末次给药后，所有小鼠禁食10 h，采用异戊巴比妥钠进行腹腔注射麻醉，经动脉取血。血液样本分两部分，一部分制备得到小鼠血浆，用于检测LDL-C和HDL-C，另一部分离心分离制备得到小鼠血清，用于检测TC 和TG，测定均严格按照试剂盒的说明书进行。根据测定得到的TC、HDL-C 浓度计算各小鼠的动脉粥样硬化指数（Atherosclerosis Index，AI）值，计算公式为

式中：c(TC) 为总胆固醇的浓度，mmol·L-1；c(HDL-C)为高密度脂蛋白的浓度，mmol·L-1。

1.4.4 小鼠肝脏病理切片制备

采血后的小鼠，解剖分离得到肝脏组织，在中性福尔马林溶液中固定48 h，流水状态下冲洗1 h，脱水，石蜡包埋并切片。切片经HE 染色后，显微镜下观察并拍照。

1.4.5 数据处理与分析

采用Excel 2016 和SPSS 分析软件进行数据分析，计算数据用“平均值±标准差”表示，每个实验组的样本数为5（n=5）。

2 结果与分析

2.1 三清山白茶对小鼠体重的影响

肥胖可引起高脂血症的发生，随着人体肥胖程度的增加，高脂血症的发生率呈明显上升趋势，且高脂血症容易诱发心血管疾病的发生[13]。因此，控制体重是降低高脂血症发生率的重要手段。由表2 可知，高脂模型组小鼠体重随着喂养时间的延长而逐步上升，且明显高于空白对照组，说明此次小鼠的高脂模型建模成功。另外，第4 周开始，低剂量组、高剂量组、阳性药物组的小鼠体重均比高脂模型组低，尤其是高剂量组小鼠体重明显下降，说明高剂量三清山白茶饲养对小鼠的体重有较好的控制作用。另外，低剂量和高剂量三清山白茶饲养对小鼠体重的控制效果均优于阳性药组。

表2 三清山白茶对小鼠体重的影响表

2.2 三清山白茶对小鼠血液生化指标的影响

由表3 可知，高脂模型组小鼠的血液TC、TG、LDL-C 含量与空白对照组比较分别增加了25.41%、124.10%、75.89%，而HDL-C 含量降低了50.00%。说明经过高脂饲料喂养后，小鼠血液TC、TG、LDL-C 指标明显升高，HDL-C 指标明显降低，再次验证本次高脂血症小鼠造模成功。与高脂模型组对比，三清山白茶和阳性药物组的小鼠血清中TC、TG、LDL-C 含量均降低，HDL-C 含量均升高，说明三清山白茶和阳性药物都能够改善高脂模型小鼠的血脂水平。

表3 各组小鼠的血液生化指标水平表 单位：mmol·L-1

与高脂模型组对比，三清山白茶高剂量组小鼠血清中TC、TG、LDL-C 的含量分别降低了30.67%、35.48%、40.10%，HDL-C 含量增加了88.07%，说明高剂量组对小鼠血液生化指标的改善效果优于阳性药物组。与高脂模型组对比，三清山白茶低剂量组小鼠血清中TC、TG、LDL-C 的含量也有明显降低，HDL-C 的含量也有所增加，只是改善的效果不如阳性药物。因此，可以得出三清山白茶高剂量喂养对高脂血症小鼠血脂有明显改善且效果优于阳性药物非诺贝特的结论。

2.3 三清山白茶对小鼠AI 的影响

由图1 可知，高脂模型组小鼠的AI 指数高于空白对照组，再次验证本次实验高脂血症小鼠造模成功。另外，相较于高脂模型组的AI，经阳性药物、三清山白茶喂养后的各组小鼠的AI 明显更低；而与阳性药物相比，高剂量组AI 的降低效果更好。由此说明三清山白茶高剂量组对高脂血症小鼠动脉粥样硬化发生率具有较好的防治效果。

图1 三清山白茶对小鼠AI 的影响图

2.4 三清山白茶对小鼠肝组织形态的影响

小鼠肝组织HE 染色镜检结果如图2 所示。空白对照组小鼠肝组织结构正常，肝细胞核清晰可见，细胞排列整齐且结构清晰，几乎没有脂肪沉积。高脂模型组肝组织脂肪明显可见，肝组织结构异常，肝细胞有明显的脂滴蓄积并伴有肿胀现象，细胞核在细胞的中间位置，细胞质呈气球样状态。与高脂模型组对比，灌胃低、高剂量三清山白茶及阳性药后，小鼠肝细胞损伤有不同程度的改善，其中高剂量组的改善情况优于低剂量组和阳性药组，高剂量组小鼠肝细胞变性及肿胀程度明显降低，肝细胞恢复情况较好，脂滴蓄积明显减少。以上结果进一步表明三清山白茶能改善高脂血症小鼠的肝脏病变，有效减少小鼠肝脏脂肪堆积、促进肝细胞恢复。

图2 小鼠肝脏组织病理形态变化图（200×）

3 结论

通过建立高脂血症小鼠模型，研究了三清山白茶的降脂效果。研究结果表明，对小鼠喂养高脂饮食后，血清中TG、TC、LDL-C 浓度明显提高，HDL-C 浓度明显降低，通过计算发现AI 明显升高，说明高脂血症小鼠建模成功。通过低剂量组、高剂量组三清山白茶对小鼠进行干预性饲养，发现三清山白茶可以降低高脂血症小鼠血清中TG、TC、LDL-C 的含量，提高小鼠血清中HDL-C 的含量，改善肝损伤。特别是三清山白茶高剂量组，其对高脂血症小鼠的降脂效果和改善肝损伤效果远优于阳性药非诺贝特。

综上所述，三清山白茶可在一定程度上改善高脂饮食所引起的高脂血症。本研究结论可为三清山白茶降脂机制的进一步研究、三清山白茶的功效研究提供有价值的参考信息，也为三清山白茶产业发展提供技术支撑。