上饶市隐匿性乙肝病毒感染状况的研究

杨丽华 王振峰 吴雅静

【摘要】 目的：探討上饶市隐匿性乙肝病毒感染（OBI）状况，并分析其血清学指标与基因特征。方法：收集2021年6月—2022年8月上饶市居民体检血液标本72 584例，对所有血液样本进行乙肝表面抗原（HBsAg）检测，对HBsAg阴性的标本进行乙肝病毒（HBV）DNA检测。对OBI样本检测其乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）、乙型肝炎E抗原（HBeAg）、乙型肝炎E抗体（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）水平，以及谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平。同时对OBI样本进行HBV基因分型与S区氨基酸做突变检测。结果：72 584例血液标本中HBsAg阴性且HBV DNA阳性检出率为0.11%（81/72 584），OBI检出率为0.10%（74/72 584）。74例OBI患者中单独HBcAb阳性占比最高（37.84%），不同血清学特征OBI患者间ALT和AST水平差异均无统计学意义（P>0.05）。74例OBI患者实时荧光PCR检测中，74例OBI样本中有19例呈阳性，检出率为25.68%。19例HBV DNA阳性患者中有15例样本扩增出S区序列，其中HBV基因分型B型13例，C型2例，且均发生S区氨基酸发生突变，其中14例HBsAg抗原决定簇基因及周边主要亲水区域（MHR）检测出氨基酸突变。结论：上饶市居民中OBI感染率较高，其中HBcAb阳性占比最高，HBV基因分型以B型居多，S区及MHR氨基酸突变可能与OBI感染的发生密切相关。

【关键词】 隐匿性乙肝病毒感染 血清学指标 HBV基因分型 上饶市

Study on Occult Hepatitis B Virus Infection Status in Shangrao City/YANG Lihua， WANG Zhenfeng， WU Yajing. //Medical Innovation of China， 2023， 20（34）： 0-093

[Abstract] Objective： To explore the status of occult hepatitis B virus infection （OBI） in Shangrao city， and analyze the serological indicators and gene characteristics. Method： A total of 72，584 blood samples of residents with physical examination in Shangrao City were collected between June 2021 and August 2022. Hepatitis B surface antigen （HBsAg） detection was performed on all blood samples， and hepatitis B virus （HBV） DNA detection was performed on HBsAg negative samples. The levels of hepatitis B virus surface antibody （HBsAb）， hepatitis B E antigen （HBeAg）， hepatitis B E antibody （HBeAb）， hepatitis B virus core antibody （HBcAb）， alanine aminotransferase （ALT） and aspartate aminotransferase （AST） were detected among OBI samples. HBV genotyping and S region amino acid mutation detection were performed on OBI samples. Result： The detection rate of negative HBsAg with positive HBV DNA in 72，584 blood samples was 0.11% （81/72，584）， and the detection rate of OBI was 0.10% （74/72，584）. Among the 74 patients with OBI， positive HBcAb alone accounted for the highest proportion （37.84%）， and there were no statistical differences in ALT and AST levels among OBI patients of different serological characteristics （P>0.05）. A total of 74 OBI patients were detected by real-time PCR， 19 out of 74 OBI samples were positive， with a detection rate of 25.68%. The S-region sequence was amplified in 15 of 19 HBV-DNA positive patients， including 13 cases of HBV genotype B and 2 cases of HBV genotype C， and S region amino acid mutation was detected in all cases. Amino acid mutations were detected in 14 cases of HBsAg antigen determinant genes and surrounding major hydrophilic regions （MHR）. Conclusion： The infection rate of OBI among residents in Shangrao City is high， and the proportion of positive HBcAb is the highest， the majority of HBV genotypes are B type， the mutations of S region and MHR amino acid may be closely related to the occurrence of OBI infection.

[Key words] Occult hepatitis B virus infection Serological indicators HBV genotyping Shangrao City

First-author's address： Shangrao People's Hospital， Jiangxi Province， Shangrao 334000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.34.020

随着我国乙肝疫苗工作的不断开展，近年来乙型肝炎病毒（HBV）感染率有所下降^[1]。但我国整体HBV感染率水平仍然较高，相关研究显示，我国每年HBV感染人数已超过百万^[2]。HBV的主要传播途径是输血，随着近年来对血液制品中乙肝表面抗原（HBsAg）的严格检测，使得我国HBV经血液传播的风险显著降低^[3-4]。隐匿性乙肝病毒感染（OBI）是HBV感染的一种特殊形式，是指常规血液检测中HBsAg呈阴性，但血液或肝脏组织中能检测到HBV DNA，且病毒载量往往较低，对我国医疗输血带来极大的安全隐患^[5-6]。同时目前对于OBI患者的血清学及基因分型特征尚无定论，因此，本研究以上饶市居民为研究对象，探讨该地区居民中OBI发生率及病毒學特点，以期为居民的HBV防控与输血安全提供更多理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2021年6月—2022年8月上饶市居民体检血液标本72 584例。纳入标准：因献血或身体检查而留存血液标本；病历资料完整。排除标准：合并其他型肝炎或严重肝脏疾病；合并血液系统疾病或严重贫血。本研究通过本院医学伦理委员会批准。患者及家属对研究知情并自愿参与。

1.2 方法

1.2.1 临床资料 通过查阅患者病历资料了解患者年龄、性别等一般资料信息。

1.2.2 OBI标本筛查 使用全自动化学发光免疫分析仪（北京联众泰克科技有限公司，UD90DT，国械注准20183220293）对所有血液标本进行HBsAg检测，S/CO值高于1提示存在反应性，高于0.5但低于1为灰区，低于0.5为阴性，除阴性外其他均判定为阳性。采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术对HBsAg阴性组标本进行HBV DNA检测。对于检出的HBsAg阴性且HBV DNA阳性样本排除HBV感染治疗后的窗口期患者，从而筛选出OBI患者。

1.2.3 血清学检测 采用化学发光免疫分析技术检测OBI样本乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）、乙型肝炎E抗原（HBeAg）、乙型肝炎E抗体（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）水平，使用全自动生化分析仪（迪瑞医疗科技股份有限公司，吉械注准20192220203，CS-T240PLUS）采用速率法测量其谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平。

1.2.4 HBV DNA载量及基因分型与S区基因突变检测 采用磁珠法及相应试剂[宁波海尔施基因科技有限公司，浙甬食药监械（准）字2013第1400194号]提取OBI样本中的HBV DNA，使用实时荧光PCR定量仪（英滩捷基贸易有限公司，7500，国械注进20163400767）进行病毒载量检测，以10 IU/mL为检出最低阈值。参照相关文献^[7]中S区基因扩增条件、引物序列及GeneBank野生型序列，使用基因测序仪（广州金圻睿生物科技有限责任公司，KM MiniSeqDx-CN，国械注准20203220340）对S区基因进行测序，并使用美国国家生物技术信息中心（NCBI）基因分型工具对S区基因序列进行基因分型对比，以GeneBank野生型序列为参照使用MEGA5.0软件检测S区氨基酸突变位点。

2 结果

2.1 OBI发生率

72 584例血液标本中HBsAg阴性且HBV DNA阳性检出率为0.11%（81/72 584），OBI检出率为0.10%（74/72 584）。

2.2 OBI样本血清学检测结果

74例OBI患者中单独HBcAb阳性占比最高（37.84%），其次为HBcAb阳性/HBsAb阳性（25.68%），所有OBI患者中HBcAb阳性率为94.59%，见表1。

2.3 不同血清模式OBI患者感染学特征比较

不同血清模式OBI患者一般资料及ALT、AST水平差异均无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.4 OBI样本HBV DNA定量与基因分型

实时荧光PCR检测中，74例OBI样本中有19例呈阳性，检出率为25.68%。19例样本平均HBV DNA浓度为（45.72±8.23）IU/mL，其中17例样本HBV DNA浓度低于100 IU/mL，2例样本HBV DNA浓度高于100 IU/mL。19例HBV DNA阳性患者中有15例样本扩增出S区序列，其中HBV基因分型B型13例，C型2例。

2.5 不同血清模式OBI患者病毒定量检测及基因分型分布

不同血清模式OBI患者HBV DNA定量检测（阳性、阴性）与基因分型分布[B型、C型、未检出（HBV DNA定量阴性及HBV DNA定量阳性但未扩增处S区序列）]差异均无统计学意义（P>0.05），见表3。

2.6 病毒基因分型与S区氨基酸突变分析

15例扩增出S区序列的样本均发生S区氨基酸突变，其中14例HBsAg抗原决定簇基因及MHR检测出氨基酸突变，见表4。

3 讨论

HBV传播途径广泛，而OBI作为HBV感染中的一种特殊形式，不仅给输血安全带来极大挑战，同时也会发生于疫苗接种后人群中，相关研究指出，该病是乙肝疫苗接种、透析及输血失败的重要影响因素^[8]。因此，了解人群中OBI感染率与病毒特征尤为重要。不同地区的OBI感染率差距较大，本研究中显示，上饶市72 584例血液标本中OBI检出率为0.10%，OBI感染率高于韶关市（0.089%）^[9]、西安市（0.067%）^[10]，低于温州市（0.12%）^[11]。说明上饶市居民中仍存在一定比例的OBI感染人群，需重视血液制品中的OBI筛查，防止漏检引发的HBV传播。

HBcAb阳性是HBV既往感染的标志，常常伴随患者一生，同时也是OBI阳性的特征之一^[12]。本研究中显示，74例OBI患者中呈现出5种不同血清模式，其中单独HBcAb阳性占比最高（37.84%），所有OBI患者中HBcAb阳性率为94.61%，证明了上述论断，同时提示临床血液筛查应重视HBcAb的检测。本研究中显示，不同血清模式OBI患者一般资料及ALT、AST水平差异均无统计学意义（P>0.05），与左晓娇等^[13]研究结果相似，提示高HBV感染率的环境是导致OBI发生率较高的原因之一。OBI的发生机制尚无统一的定论，但相关研究指出，免疫因素是OBI感染发生的一个重要因素。在免疫抑制的情况下很可能会诱导OBI的激活，并使患者显示出典型的血清学特征^[14-15]。同时机体免疫监视系统能通过相关机制将HBV DNA载量控制在较低水平，这也是其呈隐匿性的重要原因^[16]。本研究中显示，实时荧光PCR检测中74例OBI样本中有19例呈阳性，检出率为25.68%，且整体HBV DNA较低，其中17例样本HBV DNA浓度低于100 IU/mL，仅2例样本HBV DNA浓度高于100 IU/mL。相关研究指出，OBI患者中HBcAb阳性组的HBV DNA定量检测阳性率明显低于HBcAb阴性组^[17]。但本研究中显示，各血清模式OBI患者间HBV DNA定量检测阳性率差异无统计学意义（P>0.05），考虑为本研究纳入样本量较小所致。

目前对于OBI的基因分型与突变的研究逐渐受到重视，本研究中显示，19例HBV DNA阳性患者中有15例样本扩增出S区序列，其中HBV基因分型B型13例，C型2例，与孙妮等^[18]研究结果相似。MHR是HBsAg膜外区的氨基酸区域，相关报道指出，HBV DNA中S区MHR氨基酸发生的突变，尤其是在“a”抗原决定簇上发生的突变是OBI发展的重要原因之一^[19-20]。本研究中OBI患者S区MHR氨基酸突变发生率较高，同时Q129R为常见突变位点，表明了上饶市人群S区MHR氨基酸突变的地域特点。

OBI不仅为输血安全带来极大挑战，同时会影响患者肝细胞生命周期，增加患者出现肝硬化与肝癌的风险^[21]。本次研究对上饶市居民中OBI流行情况、血清学及病毒基因特征进行了初步探讨，为本地OBI防控及血液筛查提供了数据支持。但本研究尚存在一定不足，纳入样本量较小，有待日后进一步扩增样本量深入研究与分析。

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（收稿日期：2023-03-30） （本文编辑：何玉勤）

*基金项目：上饶市科技局重点研发项目（2021E002）

①江西省上饶市人民医院 江西 上饶 334000

通信作者：杨丽华